MOLÉCULAS DE UNIÓN ESPECÍFICAS DE CÉLULA HUÉSPED CAPACES DE NEUTRALIZAR VIRUS Y USOS DE LAS MISMAS.

Moléculas de unión específicas de célula huésped capaces de neutralizar virus y usos de las mismas. CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a medicina. En particular, la invención se refiere al diagnóstico, la profilaxis y/o el tratamiento de infecciones virales. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Varios virus ensamblan sus proteínas núcleo y material genómico en el citoplasma de una célula huésped y salen de la célula mediante gemación de la membrana plasmática. Estudios de estos virus, por ejemplo virus VIH-1, han mostrado que además de proteínas codificadas por el virus, pueden encontrarse proteínas de la célula huésped en los virus. Aunque algunas de estas proteínas pueden tomarse en los virus simplemente debido a su proximidad a los sitios de ensamblaje y gemación virales, es probable que otras proteínas de la célula huésped se incluyan en los virus como resultado de su interacción con proteínas virales durante el ensamblaje y la liberación. Adicionalmente, pueden incorporarse algunas proteínas de la célula huésped para proporcionar una función para el virus durante el proceso de infección. Se han encontrado proteínas de la célula huésped en la superficie o el interior de los virus. A pesar de su detección sobre o en los virus, el papel y la función de las proteínas de la célula huésped en el proceso de ensamblaje viral se entiende mal y son todavía sumamente especulativos. En la actualidad se usa una variedad de agentes para combatir la infección viral. Estos agentes incluyen compuestos antivirales, compuestos adecuados para la inmunización activa tales como vacunas y compuestos adecuados para la inmunización pasiva tales como inmunoglobulinas neutralizantes. Este último grupo se centra en inmunoglobulinas neutralizantes que actúan a través de unión específica a proteínas virales o receptores de superficie celular implicados en la entrada viral. Por tanto, se ha descrito la unión de inmunoglobulinas neutralizantes a la proteína (E) de la envuelta viral del virus del Nilo occidental (VNO) (Engle y Diamond, 2003; Oliphant et al., 2005; y documento WO02/072036). Estas inmunoglobulinas pueden neutralizar específicamente VNO. Sin embargo, debido a su especificidad de unión, tales inmunoglobulinas son sólo adecuadas en la profilaxis y/o el tratamiento de enfermedades virales específicas y no pueden aplicarse ampliamente en el tratamiento de enfermedades virales. Se ha descrito la neutralización de virus para inmunoglobulinas dirigidas contra proteínas derivadas de la célula huésped incorporadas al virus. Por ejemplo, se ha mostrado que VIH-1 incorpora la proteína molécula 1 de adhesión intercelular (ICAM-1) derivada de la célula huésped y se ha mostrado que un anticuerpo frente a ICAM-1 neutraliza viriones de VIH-1 que expresan ICAM-1 (véase Rizzuto y Sodroski, 1997). De manera desfavorable, ICAM-1 también se localiza en la superficie de células huésped no infectadas, de modo que la protección y/o el tratamiento de una infección viral con la inmunoglobulina contra ICAM-1, debido a la interacción de la inmunoglobulina con células huésped no infectadas, puede dar como resultado efectos secundarios graves y no deseados. Una desventaja adicional de la inmunoglobulina anti-ICAM-1 es que su actividad neutralizante es similar a las inmunoglobulinas específicas de receptor de superficie celular y específicas de proteínas virales, específicas de virus (VIH-1). Por consiguiente, existe una urgente necesidad de inmunoglobulinas que no tengan las desventajas descritas anteriormente. La presente invención proporciona tales inmunoglobulinas. Las inmunoglobulinas encontradas pueden unirse a una proteína de la célula huésped intracelular que se incorpora en virus o se expresa en la superficie celular. Debido a la ubicación intracelular de la proteína en células huésped no infectadas, no se producen efectos secundarios no deseados durante la administración de las inmunoglobulinas. Una ventaja adicional de las inmunoglobulinas es que no dependen de la identificación viral específica y que interaccionan con una proteína de la célula huésped que está implicada comúnmente en el proceso de gemación y ensamblaje virales y en consecuencia puede neutralizar varios virus distintos. DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS ES 2 365 749 T3 La figura 1 muestra la titulación del anticuerpo monoclonal anti-VNO CR4354L4328 en un modelo murino de exposición a VNO. Desde la parte superior hasta la inferior, se muestran la titulación del anticuerpo monoclonal anti- VNO CR4354L4328 usando dosis de 0,03, 0,01, 0,003, y 0,001 mg/kg y la titulación con un anticuerpo control a una concentración de 10 mg/kg. En el eje X se muestran los días y en el eje Y se representa la probabilidad de supervivencia (%). La figura 2 muestra la titulación del anticuerpo monoclonal anti-VNO CR4348 en un modelo murino de exposición a VNO. Desde la parte superior hasta la inferior, se muestran la titulación del anticuerpo monoclonal anti-VNO CR4348 usando dosis de 0,1, 0,03, 0,01, 0,003 y 0,001 mg/kg y la titulación con un anticuerpo control a una concentración de 10 mg/kg. En el eje X se muestran los días y en el eje Y se representa la probabilidad de superviviencia (%). La figura 3 muestra la unión en ELISA de diluciones de los anticuerpos optimizados CR4354L4261, CR4354L4267, CR4354L4328, CR4354L4335, CR4354L4383 y el anticuerpo original CR4354 a VNO. En el eje Y se muestra la absorbancia (DO) a 492 nm y en el eje X se muestra la cantidad de anticuerpo en g/ml. 2 La figura 4 muestra datos de neutralización de CR4348 (círculos negros) y CR4354L4328 (círculos blancos) de los flavivirus virus de la fiebre amarilla, virus de la encefalitis japonesa, virus de la encefalitis de San Luis y virus del Dengue 2 en un ensayo de reducción de placas. La figura 5 muestra una inmunotransferencia con, desde la izquierda hasta la derecha, lisado de células mycNDUFV-1 y lisado inmunoprecipitado con CR4348, CR4361, CR4374 o CR4354L4328. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN A continuación siguen en el presente documento definiciones de términos tal como se usan en la invención. DEFINICIONES Secuencia de aminoácidos La expresión secuencia de aminoácidos tal como se usa en el presente documento se refiere a moléculas sintéticas o que se producen de manera natural y a una secuencia de péptido, oligopéptido, polipéptido o proteína. Molécula de unión ES 2 365 749 T3 Tal como se usa en el presente documento, la expresión molécula de unión se refiere a una inmunoglobulina intacta incluyendo anticuerpos monoclonales, tales anticuerpos monoclonales quiméricos, humanizado o humanos, o a un dominio de unión a antígeno y/o variable que comprende un fragmento de una inmunoglobulina que compite con la inmunoglobulina intacta por la unión específica a la pareja de unión de la inmunoglobulina, por ejemplo una proteína de la célula huésped. Independientemente de la estructura, el fragmento de unión a antígeno se une con el mismo antígeno que reconoce la inmunoglobulina intacta. Un fragmento de unión a antígeno puede comprender un péptido o polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de al menos 2 residuos de aminoácido contiguos, al menos 5 residuos de aminoácido contiguos, al menos 10 residuos de aminoácido contiguos, al menos 15 residuos de aminoácido contiguos, al menos 20 residuos de aminoácido contiguos, al menos 25 residuos de aminoácido contiguos, al menos 30 residuos de aminoácido contiguos, al menos 35 residuos de aminoácido contiguos, al menos 40 residuos de aminoácido contiguos, al menos 50 residuos de aminoácido contiguos, al menos 60 residuos de amino contiguos, al menos 70 residuos de aminoácido contiguos, al menos 80 residuos de aminoácido contiguos, al menos 90 residuos de aminoácido contiguos, al menos 100 residuos de aminoácido contiguos, al menos 125 residuos de aminoácido contiguos, al menos 150 residuos de aminoácido contiguos, al menos 175 residuos de aminoácido contiguos, al menos 200 residuos de aminoácido contiguos o al menos 250 residuos de aminoácido contiguos de la secuencia de aminoácidos de la molécula de unión. La expresión molécula de unión, tal como se usa en el presente documento, incluye todas las clases y subclases de inmunoglobulinas conocidas en la técnica. Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas, las moléculas de unión pueden dividirse en cinco clases principales de anticuerpos intactos: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, y varias de estas pueden subdividirse en subclases (isotipos), por ejemplo, IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Los fragmentos de unión a antígeno incluyen, entre otros, Fab, F(ab), F(ab)2, Fv, dAb, Fd, fragmentos de región determinante de complementariedad (CDR), anticuerpos de cadena sencilla (scFv), anticuerpos de cadena sencilla bivalentes, anticuerpos... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo monoclonal capaz de unirse a una proteína de la célula huésped y que tiene actividad neutralizante de flavivirus, comprendiendo dicho anticuerpo una cadena pesada y una ligera, en el que dicha cadena pesada comprende una región CDR1 según SEQ ID NO:7, una región CDR2 según SEQ ID NO:8 y una región CDR3 según SEQ ID NO:5; y en el que dicha cadena ligera comprende una región CDR1 según SEQ ID NO:9, una región CDR2 según SEQ ID NO:10 y una región CDR3 según SEQ ID NO:11, y en el que dicha proteína de la célula huésped es factor 1 asociado a Fas. 2. Anticuerpo monoclonal capaz de unirse a una proteína de la célula huésped y que tiene actividad neutralizante de flavivirus, comprendiendo dicho anticuerpo una cadena pesada y una ligera, en el que dicha cadena pesada comprende una región CDR1 según SEQ ID NO:12, una región CDR2 según SEQ ID NO:13 y una región CDR3 según SEQ ID NO:6; y en el que dicha cadena ligera comprende una región CDR1 según SEQ ID NO:14, una región CDR2 según SEQ ID NO:15 y una región CDR3 según SEQ ID NO:16, o una secuencia según SEQ ID NO:74, y en el que dicha proteína de la célula huésped es NADHdeshidrogenasa flavoproteína-1. 3. Inmunoconjugado que comprende un anticuerpo monoclonal según la reivindicación 1 ó 2, comprendiendo además el inmunoconjugado al menos una etiqueta. 4. Molécula de ácido nucleico que codifica un anticuerpo monoclonal según la reivindicación 1 ó 2. 5. Composición farmacéutica que comprende un anticuerpo monoclonal según la reivindicación 1 ó 2 y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable. 6. Anticuerpo monoclonal según la reivindicación 1 ó 2 para uso como medicamento. 7. Uso de un anticuerpo monoclonal según la reivindicación 1 ó 2 en la preparación de un medicamento para la profilaxis y/o el tratamiento de una infección por flavivirus. 8. Uso según la reivindicación 7, en el que dicho flavivirus es un virus del Nilo occidental. 9. Uso de un anticuerpo monoclonal según la reivindicación 1 ó 2 para el diagnóstico in vitro. ES 2 365 749 T3 191 ES 2 365 749 T3 192 ES 2 365 749 T3 193 ES 2 365 749 T3 194 ES 2 365 749 T3