PROCEDIMIENTO PARA LA PRODUCCIÓN DE GLICÉRIDOS CON LIPASAS.

Un procedimiento para la producción de glicéridos, en donde se produce un 2-monoglicérido llevando a cabo la alcohólisis de un triglicérido de partida con 1,

3-lipasa de Candida antarctica

El presente invento se refiere a un procedimiento para la fabricación de glicéridos con lipasas. Mas particularmente el presente invento se refiere a un procedimiento para producir 2-monoglicéridos o triglicéridos, en particular triglicéridos (TG) que tienen residuos de ácido graso poliinsaturado (PUFA) en las posiciones sn-2, utilizando lipasas.

En el presente invento "DHA" es una abreviación que representa ácido docosahexaenoico, "EPA" es una abreviación que representa ácido eicosapentaenoico, y "ARA" es una abreviación que representa ácido araquidónico. Cuando se utilizan expresiones "grasa enriquecida con DHA" y "tri-DHAtriglicérido", "DHA" se utiliza como una abreviación que representa un residuo de ácido docosahexaenoico.

Asimismo "MG" representa un monoglicérido, "2-MG"

selectiva para las posiciones 1 y 3 y puede actuar aún sobre un ácido graso de cadena larga en alcohólisis.

"Segunda lipasa" se refiere a una que es selectiva para las posiciones 1 y 3 y puede producir un TG mediante la reacción de 2-MG con un éster de ácido graso o un ácido graso libre.

Arte anterior

Cuando se introduce cualquier ácido graso deseado en las posiciones 1 y 3 utilizando una lipasa que es selectiva para las posiciones 1 y 3, se utiliza en general un método para conducir acidólisis con un ácido graso objetivo, o un método para conducir intercambio de éster de un éster de ácido graso objetivo. Sin embargo, con estos métodos debe utilizarse una cantidad muy excesiva de ácido graso o éster.

Además, debido a que las lipasas tienen la actividad grandemente cambiable dependiendo de las longitudes de cadena de los ácidos grasos y la actividad con los ácidos grasos de cadena larga, tal como DHA, es extremadamente débil, en algunos casos no puede obtenerse un lípido con la estructura objetivo.

Las lipasas causan reacciones tales como hidrólisis, interesterificación, acidólisis y esterificación. Sin embargo, existen lipasas que tienen varias características, y todos los tipos de lipasas no desarrollan el mismo grado de reactividad bajo las mismas condiciones en todas las reacciones. Por ejemplo, el uso de una 1,3-lipasa con una fuerte reactividad para acidólisis es ventajosa en sustitución de ácidos grasos en las posiciones 1 y 3, pero

cuando esta lipasa no tiene una reactividad suficiente para

DHA, etc., surge una gran dificultad en la sustitución de un TG que tenga DHA en las posiciones 1 y 3 para otro ácido graso objetivo. Evidentemente, la sustitución objetiva puede lograrse utilizando una lipasa con una alta actividad no solo para acidólisis, sino también para DHA. Sin embargo, una lipasa de esta índole es de difícil obtención o es muy costosa. De aquí que es desventajoso el uso industrial de dicha lipasa.

SCHMID U ET AL: "Optimization of the reaction conditions in the lipase-catalyzed synthesis of structured triglycerides" JOURNAL OF THE AMERICAN OIL CHEMISTS' SOCIETY, SPRINGER, BERLIN, DE, vol. 75, nº 11, enero 1998, páginas 1527-1531 se dirige a la síntesis catalizada por lipasa de Triglicéridos, en donde los triglicéridos estructurados que contienen un tipo de ácido graso en la posición 1 y 3 y un segundo tipo de ácido graso en la posición 2 del glicerol se sintetizaron utilizando lipasas.

La EP-A-0 882 797 se dirige a la preparación de triglicéridos simétricos. De conformidad con el método aquí descrito se convierte un 2-monoglicérido utilizando una 1,3lipasa, por ejemplo la lipasa de Rhizomucor miehei.

OUMANOU M M: "Synthesis of structured triglycerides by lipase catalysis" FETT -LIPID.FAT SCIENCE TECHNOLOGY, WILEY-VCH VERLAG,WEINHEIM, DE, vol. 100, nº. 4-5, enero 1998, paginas 156-160 y SOUMANOU M M ET AL: "Two-step enzy-matic reaction for the synthesis of pure structured triacylglycerides" JOURNAL OF THE AMERICAN OIL CHEMISTS' SOCIETY, SPRINGER, BERLIN, DE, vol. 75, nº. 6, 1 enero 1998 (1998-01-01), paginas 703-710 se dirigen a la síntesis de ácido graso de cadena media de triglicéridos estructurados (o sea ácido caprílico) en las posiciones 1 y 3 y con ácidos grasos insaturados de cadena larga en la posición 2 de glicerol utilizando lipasas en un proceso de dos etapas.

SCHMID U ET AL: "Highly selective synthesis of 1,3ºleoyl-2-palmitoylglycerol by lipase catalysis." BIOTECHNOLOGY AND BIOENGINEERING, vol. 64, nº. 6, September 1999, paginas 678-684 se dirige a la síntesis de 1,3 oleoil2-palmitoilglicerol (OPO) con un proceso de dos etapas utilizando 1,3-lipasas.

ZUYI L and Ward O P: "Lipase-catalyzed alcoholysis to concentrate the n-3 polyunsaturated fatty acid of cod liver oil" ENZYME AND MICROBIAL TECHNOLOGY, STONEHAM, MA, US, vol. 15, nº. 7, Julio 1993, páginas 601-606 se dirige a la alcohólisis catalizada por lipasa para la concentración de ácidos grasos omega-3 poliinsarturados utilizando aceite de hígado de bacalao. Descripción del invento

Un objeto del presente invento es proporcionar un procedimiento para producir un 2-MG o un TG, particularmente un TG que tiene ácido graso poliinsaturado (PUFA) en las posiciones sn-2, con una pureza extremadamente alta y una alta eficacia.

El presente invento se refiere a un procedimiento para producir glicéridos, en donde se produce un 2-MG llevando a cabo la alcohólisis de un TG de partida con 1,3-lipasa de Candida antarctica.

Un radical de acido graso en la posición 2 es un residuo de DHA, EPA o ARA. En este caso el presente invento se refiere a un procedimiento para producir glicéridos, en donde un MG con un residuo de ácido graso en la posición 2 siendo un residuo de DHA, EPA o ARA se produce mediante alcohólisis de un TG de partida con 1,3-lipasa de Candida antarctica.

El TG de partida es una grasa que contiene un ácido graso poliinsaturado de preferencia una grasa enriquecida con DHA, una grasa enriquecida por EPA o una grasa enriquecida con ARA. En este caso el presente invento se refiere a un procedimiento para producir glicéridos en donde se produce un 2-MG conduciendo alcohólisis de una grasa que contiene un ácido graso poliinsaturado, de preferencia una grasa enriquecida con DHA, una grasa enriquecida con EPA o una grasa enriquecida con ARA, con 1,3-lipasa de Candida Antarctica.

La grasa es aceite de pescado. En este caso el presente invento se refiere a un procedimiento para producir glicéridos, en donde se produce un 2-MG llevando a cabo alcohólisis de aceite de pescado, de preferencia aceite de pescado enriquecido con DHA o aceite de pescado enriquecido por EPA, con 1,3-lipasa de Candida antarctica.

El TG de partida es un tri-DHA-TG, un tri-EPA-TG o un tri-ARA-TG. En este caso el presente invento se refiere a un procedimiento para producir glicéridos, en donde se produce un 2-MG llevando a cabo alcohólisis de un tri-DHAobjetivo se produce introduciendo un residuo de ácido graso en cada una de las posiciones 1 y 3 con una segunda 1,3lipasa vía el 2-MG antes citado, o sea, un 2-MG producido llevando a cabo alcohólisis de un TG de partida con 1,3lipasa de Candida antarctica.

Un residuo de ácido graso en la posición 2 es un residuo de DHA, EPA o ARA. En este caso el presente invento se refiere a un procedimiento para producir glicéridos, en donde un TG objetivo se produce introduciendo un residuo de ácido graso en cada una de las posiciones 1 y 3 con una segunda 1,3-lipasa vía un MG con un residuo de ácido graso en la posición 2 siendo un residuo de DHA, EPA o ARA, que se produce llevando a cabo alcohólisis de un TG de partida con 1,3-lipasa de Candida antarctica.

El residuo de ácido graso introducido en cada una de las posiciones 1 y 3 es un residuo de ácido graso saturado de cadena media que tiene el número de carbonos de 8, 10 o

12. En este caso el presente invento se refiere a un procedimiento...

- 17-1. Un procedimiento para la producción de glicéridos, en donde se produce un 2-monoglicérido llevando a cabo la alcohólisis de un triglicérido de partida con 1,3-lipasa de Candida antarctica. 2. Un procedimiento para producir glicéridos, en donde, introduciendo residuos de ácidos grasos en cada una de las posiciones 1 y 3 con una segunda 1,3-lipasa vía un 2monoglicérido producido llevando a cabo la alcohólisis de un triglicérido de partida con 1,3-lipasa de Candida antarctica, se obtienen triglicéridos cada uno siendo de una estructura que tiene, en la posición 2, un residuo de ácido graso derivado del triglicérido de partida y, en las posiciones 1 y 3, el mismo residuo de ácido graso nuevamente introducido. 3. Un procedimiento para producir glicéridos, de conformidad con la reivindicación 2, en donde el residuo de

4. Un procedimiento para producir glicéridos, de conformidad con la reivindicación 2 o 3, en donde el residuo de ácido graso introducido en cada una de las posiciones 1 y 3 es un residuo de acido graso saturado de cadena media que tiene el número de carbonos de 8, 10 o 12.

5. Un procedimiento para producir glicéridos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en

donde el triglicérido de partida es una grasa que contiene un ácido graso poliinsaturado. 6. Un procedimiento para producir glicéridos de conformidad con la reivindicación 5, en donde la grasa es una grasa enriquecida en ácido docosahexaenoico, una grasa enriquecida en ácido eicosapentaenoico o una grasa enriquecida en ácido araquidónico.

7. Un procedimiento para producir glicéridos, de conformidad con la reivindicación 5 o 6, en donde la grasa 10 es aceite de pescado.

8. Un procedimiento para producir glicéridos, de conformidad con la reivindicación 1 o 2, en donde el triglicérido de partida es un ácido tri-docosahexaenoicotriglicérido, un ácido tri-eicosapentaenoico-triglicérido o

15 un ácido tri-araquidónico-triglicérido.