PROCEDIMIENTO PARA LA OBTENCIÓN DE (1S)-3-CLORO-1-(2-TIENIL)-PROPAN-1-OL ÓPTICAMENTE ACTIVO.

Procedimiento para la obtención de (1S)-3-cloro-1-(2-tienil)-propan-1-ol ópticamente activo de la fórmula I **Fórmula** llevándose a cabo la reducción de la 3-cloro-1-(2-tienil)-propan-1-ona de la fórmula II **Fórmula** en un medio que contiene a este compuesto,

para dar el compuesto de la fórmula I por medio de una alcoholdehidrogenasa procedente de Thermoanaerobacter spec., y se aísla el producto formado esencialmente en forma enantiómeramente pura

La presente invención se refiere a un procedimiento para la obtención de (1S)-3-cloro-1-(2-tienil)-propan-1-ol ópticamente activo por medio de una reducción enzimática. Estado de la técnica:

El (1S)-3-cloro-1-(2-tienil)-propan-1-ol es un precursor directo para la obtención del (1S)-3-metilamino-1-(2-tienil)-propan-1-ol ("duloxetina-alcohol"), que a su vez es una unidad estructural en la síntesis de la duloxetina. La Duloxetina® es un principio activo farmacéutico que en el momento actual se encuentra en período de autorización y que será empleada en el campo de indicación correspondiente a la depresión y a la incontinencia.

La publicación EP-B-0273658 describe un procedimiento para llevar a cabo la obtención de la correspondiente base de la duloxetina por medio de la reacción de 2-acetiltiofeno en una reacción de Mannich con formaldehído y con dimetilamina, la reducción del grupo ceto de la base de Mannich, obtenida en este caso, para dar el (S)-3-N,N-dimetilamino-1-(tien-2-il)propan-1-ol racémico, la eterificación de la función alcohólica con fluoruro de naftilo y la subsiguiente transformación del grupo dimetilamino en una función metilamino. El enantiómero deseado del naftiléter se obtiene por medio del empleo de materiales de partida quirales o por medio de la separación del racemato en la etapa del producto final, por ejemplo a través de las sales con ácidos ópticamente activos o por medio de una cromatografía sobre una fase estacionaria quiral.

La publicación US-5,362,886 describe un procedimiento análogo, según el cual se combina con ácido S-mandélico el propanol racémico que es obtenido tras la reducción del grupo ceto. El enantiómero S del alcohol, que se obtiene en este caso, se emplea en las etapas subsiguientes de la reacción.

La publicación EP-A-0457559 describe, así mismo, un procedimiento análogo al de la publicación EP-B-0273658. En este caso se reduce el grupo ceto de la base de Mannich con el sistema reductor asimétrico constituido por el LAH-Icb

- 2(hidruro de litio y de aluminio-[(2R,2S)-(-)-4-dimetilamino-1,2-difenil-3-metil-2butanol]) para dar el alcohol en forma del enantiómero S. El inconveniente en este caso reside, junto a los costes, en la sensibilidad del sistema reductor LAH-Icb, que sólo es estable durante pocos minutos. 5 Los autores W. J. Wheeler y F. Kuo describen en la publicación Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals, tomo XXXVI, Nr. 3, páginas 213 hasta 223, un procedimiento para llevar a cabo la obtención de la duloxetina. Con esta finalidad se hace reaccionar el cloruro del ácido tiofen-2-carboxílico en una copulación de Stille con estannato de vinil-tri-n-butilo en presencia de cantidades 10 catalíticas de bencilcloro-bis(trifenilfosfina)paladio(II) en DMPU (dimetilpropilenurea) para dar la 1-(tien-2-il)-propenona de la fórmula (V)

**(Ver fórmula)**

que se transforma a continuación, por medio de un tratamiento con ácido clorhídrico, en la 3-cloro-1-(tien-2-il)-propan-1-ona de la fórmula (VI)

**(Ver fórmula)**

El cloropropano, obtenido de este modo, se reduce a continuación por medio del empleo de una oxazaborilidina quiral y BH3 para dar el (S)-3-cloro-1-(tien-2-il)propan-1-ol de la fórmula (VII)

**(Ver fórmula)**

20 El alcohol, obtenido de este modo, se transforma, por medio de una conversión sucesiva con yoduro de sodio y a continuación con metilamina, en el (S)-3metilamino-1-(tien-2-il)-propan-1-ol. Por medio de la sucesiva reacción subsiguiente con hidruro de sodio, con 1-flúornaftalina y con cloruro de hidrógeno se obtiene la duloxetina en forma del hidrocloruro.

**(Ver fórmula)**

Hal = halógeno Los autores T. Stillger et al. describen en la publicación Chemie Ingenieur Technik (74) páginas 1035-1039, 2002, procedimientos para la regeneración del cofactor acoplado con el substrato para llevar a cabo la reducción enantioselectiva por vía enzimática del éster de etilo del ácido 5-oxohexanoico para dar el éster de etilo del ácido (S)-5-hidroxihexanoico.

Breve descripción de la invención:

Por lo tanto, la invención tenía como tarea encontrar una vía para llevar a cabo la reducción estereoespecífica del (1S)-3-cloro-1-(2-tienil)-propan-1-ol ópticamente activo, debiendo conducir el procedimiento de la reacción por vía económica a un producto de la forma más cuantitativa posible.

Esta tarea se resolvió por medio del descubrimiento sorprendente de que pueden ser preparadas enzimas con actividad de dehidrogenasa del género 15 Thermoanaerobacter, que son capaces de catalizar de forma estereoespecífica la

reacción que ha sido indicada más arriba.

Descripción detallada de la invención:

El objeto de la invención es un procedimiento para llevar a cabo la obtención del (1S)-3-cloro-1-(2-tienil)-propan-1-ol ópticamente activo de la fórmula I

**(Ver fórmula)**

llevándose a cabo la reducción de la 3-cloro-1-(2-tienil)-propan-1-ona de la fórmula

**(Ver fórmula)**

en un medio que contiene a este compuesto, para dar el compuesto de la fórmula I 25 por medio de una alcoholdehidrogenasa del género Thermoanaerobacter y se aísla el

producto formado esencialmente en forma enantiómeramente pura.

Los enzimas, que son empleados de conformidad con la invención, con actividad de dehidrogenasa pueden ser empleados en el procedimiento de conformidad con la invención en forma de enzima libre o en forma de enzima inmovilizado.

El procedimiento, de conformidad con la invención, se lleva a cabo de manera ventajosa a una temperatura comprendida entre 0ºC y 95ºC, de manera preferente comprendida entre 10ºC y 85ºC, de manera especialmente preferente comprendida entre 15ºC y 75ºC.

El valor del pH en el procedimiento de conformidad con la invención se mantiene, de forma ventajosa, entre pH 4 y 12, de manera preferente entre pH 4,5 y 9, de manera especialmente preferente entre pH 5 y 8.

En el procedimiento, de conformidad con la invención, deben entenderse por productos enantiómeramente puros o bien quirales o bien por alcoholes ópticamente activos aquellos enantiómeros que muestren un enriquecimiento en enantiómeros. De manera preferente se consiguen en el procedimiento purezas en enantiómeros del 70 %ee como mínimo, de manera preferente del 80 %ee como mínimo, de manera especialmente preferente del 90 %ee como mínimo, de manera muy especialmente preferente del 98 % ee como mínimo.

Para el procedimiento de conformidad con la invención pueden ser empleadas células en crecimiento, que contengan los ácidos nucleicos, los constructos de ácido nucleico o los vectores de conformidad con la invención. De igual modo pueden ser empleadas células en reposo o lixiviadas. Se entenderá por células lixiviadas, por ejemplo, aquellas células que se haya hecho permeables por medio de un tratamiento, por ejemplo, con disolventes o aquellas células que hayan sido fracturadas por medio de un tratamiento mecánico (por ejemplo prensa francesa o ultrasonidos) o por medio de otros métodos. Los extractos en bruto, obtenidos de este modo, son adecuados de manera ventajosa para el procedimiento de conformidad con la invención. De la misma manera pueden ser empleados para el procedimiento los enzimas purificados

o enriquecidos. De igual modo, son adecuados los microorganismos o los enzimas

inmovilizados que pueden encontrar aplicación ventajosamente en la reacción. Cuando sean empleados para el procedimiento, de conformidad con la invención, organismos o enzimas libres, éstos serán separados convenientemente como paso previo a la extracción, por ejemplo por medio de una filtración o de una centrifugación.

El producto, preparado en el procedimiento de conformidad con la invención, constituido por el (1S)-3-cloro-1-(2-tienil)-propan-1-ol puede ser obtenido ventajosamente a partir de la solución acuosa de la reacción por medio de una extracción o de una destilación. La extracción puede repetirse varias veces para aumentar el rendimiento. Ejemplos de agentes adecuados de extracción son los disolventes tales como el tolueno, el cloruro de metileno, el acetato de butilo, el diisopropiléter, el benceno, el MTBE o el acetato de etilo, sin que éstos sean limitativos.

De manera alternativa el producto, preparado en el procedimiento de conformidad con la invención, constituido por el (1S)-3-cloro-1-(2-tienil)-propan-1ºl...

1. Procedimiento para la obtención de (1S)-3-cloro-1-(2-tienil)-propan-1-ol ópticamente activo de la fórmula I

**(Ver fórmula)**

llevándose a cabo la reducción de la 3-cloro-1-(2-tienil)-propan-1-ona de la fórmula II

**(Ver fórmula)**

en un medio que contiene a este compuesto, para dar el compuesto de la fórmula I por medio de una alcoholdehidrogenasa procedente de Thermoanaerobacter spec., y 10 se aísla el producto formado esencialmente en forma enantiómeramente pura. 2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque se emplea el NADPH a título de cofactor con ocasión de la reducción. 3. Procedimiento según la reivindicación 2, caracterizado porque con ocasión de la reducción se regeneran cofactores oxidados.

15 4. Procedimiento según la reivindicación 3, caracterizado porque la regeneración de los cofactores se lleva a cabo por medio de la oxidación por vía enzimática del isopropanol para dar acetona.