Una partícula de replicón alfaviral deficiente en la replicación que contiene una construcción de vector alfaviral que comprende un polinucleótido heterólogo que codifica al menos un primer antígeno o forma modificada del mismo,

siendo capaz dicho primer antígeno o forma modificada del mismo de estimular una respuesta inmune en un sujeto cuando se administra por vía intranasal, donde dicha partícula de replicón alfaviral deficiente en la replicación es una partícula alfaviral quimérica que contiene una construcción de vector del virus de la encefalitis equina venezolana (VEE) empaquetada con glucoproteínas de envuelta del virus Sindbis (SIN), para su uso en un procedimiento terapéutico para tratar a un sujeto mamífero generando una respuesta inmune en el sujeto por administración intranasal

Campo técnico

La presente invención se refiere en líneas generales a la inmunización de las mucosas, por ejemplo, la inmunización de las mucosas usando sistemas de suministro de genes. En particular el suministro a las mucosas de vectores deficientes en la replicación y/o vectores y partículas alfavirales recombinantes. Adicionalmente, también se describe el uso de estos sistemas para inducir potentes respuestas inmunes locales y sistémicas en las mucosas siguiendo diversas vías de inmunización de las mucosas.

Antecedentes de la invención

Sería deseable el desarrollo de vacunas que provoquen inmunidad en las mucosas contra diversos patógenos. Muchos patógenos causantes de enfermedad se transmiten a través de las superficies mucosas. Por ejemplo, el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) está reconocido como una de las mayores amenazas contra la salud que está encarando la medicina moderna y la transmisión sexual en todo el mundo del VIH es la causa principal del SIDA. Hasta ahora no hay curas o vacunas para el SIDA.

En 1983-1984, tres grupos identificaron independientemente el agente etiológico sospechoso del SIDA. Véase, por ejemplo, Barre-Sinoussi y col. (1983) Science 220:868-871; Montagnier y col., en Human T-Cell Leukemia Viruses (Gallo, Essex&Gross, eds., 1984); Vilmer y col. (1984) The Lancet 1:753; Popovic y col. (1984) Science 224:497500; Levy y col. (1984) Science 225:840-842. Estos aislados se llamaron de forma variada virus asociado a linfadenopatía (VAL), virus linfotrópico de células T humanas tipo III (VLTH-III), o retrovirus asociado al SIDA (ARV). Todos estos aislados son cepas del mismo virus, y posteriormente se llamaron colectivamente virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Con el aislamiento de un virus causante del SIDA relacionado, las cepas originalmente llamadas VIH se llaman ahora VIH-1 y el virus relacionado se llama VIH-2. Véase, por ejemplo, Guyader y col. (1987) Nature 326:662-669; Brun-Vezinet y col. (1986) Science 233:343-346; Clavel y col. (1986) Nature 324:691-695. Por consiguiente, existe la necesidad en la técnica de composiciones y procedimientos adecuados para tratar y/o prevenir en el mundo la infección por VIH.

Se ha accedido a una gran cantidad de información acerca del virus VIH, y se han examinado varias dianas para el desarrollo de vacunas incluyendo los productos génicos env, Gag, pol y tat codificados por VIH. También se ha descrito la inmunización con polinucleótidos que codifican VIH nativos y sintéticos, como se describe por ejemplo, en el documento PCT/US99/31245 del mismo propietario que la presente y referencias citadas en el mismo. Además, se han administrado polinucleótidos que codifican VIH en diversos intentos por identificar una vacuna. (Véase, por ejemplo, Bagarazzi y col. (1999) J. Inject. Dis. 180:1351-1355; Wang y col. (1997) Vaccine 15:821:825). Se ha administrado un vector del alfavirus de la encefalitis equina venezolana (VEE) competente para la replicación que porta el dominio matriz/cápsida de VIH que podía provocar respuestas CTL por vía subcutánea en animales (Caley y col. (1997) J. Virol. 71:3031-3038). Además, los vectores alfavirales derivados del virus Sindbis también han demostrado provocar respuestas específicas para gag de VIH en animales. (Gardner y col. (2000) J. Virol. 74:1184911857). Asimismo, también se han administrado péptidos VIH a sujetos animales (Staats y col. (1997) AIDS Res Hum Retroviruses 13:945-952; Belyakov (1998) J. Clin. Invest. 102:2072).

También se han descrito vectores alfavirales recombinantes y sistemas de vector eucariota estratificado basado en alfavirus. (Véanse, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos Nº 6.015.686; 6.015.694; 5.843.723). Hariharan y col. (1998) J. Virol. 72:950-958 informaron de que una única inmunización intramuscular con vectores pSIN que expresan la glucoproteína B del virus del herpes simple (VHS) tipo I inducía un amplio espectro de respuestas inmunes, incluyendo anticuerpos específicos de virus, células T citotóxicas, y protección contra la estimulación letal del virus en dos modelos murinos diferentes. Polo y col. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96:4598-4603 informaron de una protección similar en modelos de estimulación con VHS después de la inmunización con partículas de vectores del replicón SIN en lugar de vectores del plásmido pSIN. Tsuji y col. (1998) J. Virol. 72:690-697 informaron que la administración subcutánea de SIN recombinante que expresa un epítopo de 9 unidades restringido al complejo mayor de histocompatibilidad de clase I de la proteína del circumsporozoito Plasmodium yoelii o la nucleoproteína del virus de la influenza induce una gran respuesta de células T CD8(+) específicas de epítope y proporciona un alto grado de protección contra la infección con el virus de la malaria o el virus de la influenza A.

La técnica anterior también incluye Immunology Letters, vol. 69, 1999, página 174. Esto describe replicones VEE que contienen el gen antigénico del virus de la influenza (HA) empaquetados en VLP de VEE, que después del suministro intranasal conducían a protección contra la estimulación intranasal con virus de la influenza virulento.

Sin embargo, a pesar de estos y otros estudios, no se ha definido suficientemente la utilidad de vehículos de suministro génico deficientes en la replicación para estrategias de inmunización de las mucosas que puedan proteger contra la estimulación en las mucosas. Por tanto, sigue existiendo la necesidad de composiciones y procedimientos dirigidos al tratamiento y prevención de diversos patógenos transmitidos por vía sexual.

Sumario de la invención

La invención proporciona una partícula de replicón de alfavirus deficiente en la replicación que contiene una construcción de vector alfaviral que comprende un polinucleótido heterólogo que codifica al menos un primer antígeno o forma modificada del mismo, siendo capaz dicho primer antígeno o forma modificada del mismo de estimular una respuesta inmune en un sujeto cuando se administra por vía intranasal, donde dicha partícula de replicón de alfavirus deficiente en la replicación es una partícula alfaviral quimérica que contiene una construcción de vector del virus de la encefalitis equina venezolana (VEE) empaquetada con las glucoproteínas de envuelta del virus Sindbis (SIN), para su uso en un procedimiento terapéutico para tratar a un sujeto mamífero generando una respuesta inmune en un sujeto por administración intranasal. La invención también proporciona el uso de una partícula de replicón alfaviral deficiente en la replicación que contiene una construcción de vector alfaviral que comprende un polinucleótido heterólogo que codifica al menos un primer antígeno o forma modificada del mismo, siendo capaz dicho primer antígeno o forma modificada del mismo de estimular una respuesta inmune en un sujeto cuando se administra por vía intranasal, donde dicha partícula de replicón alfaviral deficiente en la replicación es una partícula alfaviral quimérica que contiene una construcción de vector del virus de la encefalitis equina venezolana (VEE) empaquetada con glucoproteínas de envuelta del virus Sindbis (SIN), en la fabricación de un medicamento para tratar terapéuticamente a un sujeto mamífero generando una respuesta inmune en el sujeto por administración intranasal.

Sumario de la divulgación

En este documento se describen sistemas de suministro de genes (por ejemplo, vectores alfavirales recombinantes) que son adecuados para su uso en una diversidad de aplicaciones, incluyendo, por ejemplo, inmunización de las mucosas. Indicado brevemente, la descripción se refiere a construcciones de vector y partículas que expresan antígenos asociados con uno o más patógenos de enfermedades de transmisión sexual, así como procedimientos para preparar y utilizar los mismos, particularmente en regímenes de inmunización protectores de las mucosas. Preferiblemente, los vectores son deficientes en la replicación, por ejemplo vectores alfavirales tales como los derivados de Sindbis. En este documento se demuestra que la protección específica de antígeno contra una estimulación después de la inmunización puede inducirse después de la administración a las mucosas de vehículos de suministro de genes (por ejemplo, vectores alfavirales) que expresan el antígeno.

En un aspecto, la descripción se refiere a un procedimiento para generar una respuesta inmune contra un antígeno. En ciertas realizaciones, el procedimiento comprende administrar a través de la mucosas a células diana de un sujeto, un vehículo de suministro de genes deficiente... [Seguir leyendo]

1. Una partícula de replicón alfaviral deficiente en la replicación que contiene una construcción de vector alfaviral que comprende un polinucleótido heterólogo que codifica al menos un primer antígeno o forma modificada del mismo, siendo capaz dicho primer antígeno o forma modificada del mismo de estimular una respuesta inmune en un sujeto cuando se administra por vía intranasal, donde dicha partícula de replicón alfaviral deficiente en la replicación es una partícula alfaviral quimérica que contiene una construcción de vector del virus de la encefalitis equina venezolana (VEE) empaquetada con glucoproteínas de envuelta del virus Sindbis (SIN), para su uso en un procedimiento terapéutico para tratar a un sujeto mamífero generando una respuesta inmune en el sujeto por administración intranasal.

2. Uso de una partícula de replicón alfaviral deficiente en la replicación que contiene una construcción de vector alfaviral que comprende un polinucleótido heterólogo que codifica al menos un antígeno o forma modificada del mismo, siendo capaz dicho primer antígeno o forma modificada del mismo de estimular una respuesta inmune en el sujeto cuando se administra por vía intranasal, donde dicha partícula de replicón alfaviral deficiente en la replicación es una partícula alfaviral quimérica que contiene una construcción de vector del virus de la encefalitis equina venezolana (VEE) empaquetada con glucoproteínas de envuelta del virus Sindbis (SIN), en la preparación de un medicamento para tratar de forma terapéutica a un sujeto mamífero generando una respuesta inmune en el sujeto por administración intranasal.

3. La partícula de replicón alfaviral de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2, en la que el al menos un antígeno se obtiene de un patógeno de transmisión sexual.

4. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 3, en la que el patógeno de transmisión sexual es una bacteria.

5. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 4, en la que la bacteria se selecciona entre el grupo que consiste en gonorrea, clamidia y sífilis.

6. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 3, en la que el patógeno de transmisión sexual es un virus.

7. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 6, en la que el virus se selecciona entre el grupo que consiste en VIH, VHB, VHS, VHC y VPH.

8. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 7, en la que el virus es VIH-1.

9. La partícula de replicón alfaviral de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2, en la que el al menos un primer antígeno es un antígeno gag del VIH.

10. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 9, en la que el al menos un primer antígeno comprende un epítope CTL p24 gag de VIH-1 restringido a H-2Kd.

11. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 10, en la que el epítope CTL p24 gag de VIH-1 restringido a H-2Kd consta de la secuencia AMQMLKETI.

12. La partícula de replicón alfaviral o uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 ó 6-11, para prevenir, inhibir, estabilizar o revertir el VIH.

13. La partícula de replicón alfaviral de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2, en la que el al menos un primer antígeno es un antígeno de hemaglutinina (HA) de la influenza.

14. La partícula de replicón alfaviral o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en la que el sujeto es un mamífero.

15. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 14, en la que el mamífero es un ser humano.

16. La partícula de replicón alfaviral o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en la que el vector alfaviral se suministra a células presentadoras de antígeno.

17. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 16, en la que las células presentadoras de antígeno son células dendríticas.

18. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 17, en la que las células dendríticas son humanas.

19. La partícula de replicón alfaviral o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, en la que las células diana se infectan in vivo.

20. La partícula de replicón alfaviral o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en la que el antígeno provoca una respuesta inmune restringida al HLA clase I.

21. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 20, en la que el antígeno provoca adicionalmente una respuesta inmune restringida al HLA clase II.

22. La partícula de replicón alfaviral o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, que incluye, antes o después de la etapa de administración a las células diana, introducir en las células diana una molécula de ácido 5 nucleico que codifica la proteína MHC de clase I o clase II, o combinaciones de las mismos, o una proteína seleccionada entre el grupo que consiste en CD3, ICAM-1, LFA-3 o análogos de las mismas.

23. La partícula de replicón alfaviral o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, que comprende adicionalmente la etapa de administrar al menos un segundo vehículo de suministro génico, comprendiendo dichos segundo vehículo de suministro génico polinucleótidos que codifican al menos un segundo antígeno o forma modificada del mismo o un factor inmunomodulador.

24. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 23, en la que el segundo vehículo de suministro génico se administra a las mucosas.

25. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 23, en la que el segundo vehículo de suministro génico se administra no a las mucosas. 26. La partícula de replicón alfaviral o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25, que comprende adicionalmente la etapa de administrar uno o polipéptidos al sujeto.

27. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 26, en la que los polipéptidos comprenden al menos un segundo antígeno o forma modificada del mismo.

28. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 26, en la que los polipéptidos comprenden un factor 20 inmunomodulador.

29. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 26, en la que al menos uno de los polipéptidos se administra a las mucosas.

30. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 26, en la que al menos uno de los polipéptidos se administra no a las mucosas. 31. La partícula de replicón alfaviral o uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30, en la que el medicamento es para administración con un mutante destoxificado de una toxina ADP-ribosilante bacteriana.

32. La partícula de replicón alfaviral o uso de la reivindicación 31, en la que el mutante destoxificado de una toxina ADP-ribosilante bacteriana se selecciona entre el grupo que consiste en la toxina colérica, la toxina pertussis y la toxina inestable al calor de E. coli.

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