Método de reducción de la pigmentación de la piel para efectos cosméticos en un mamífero,

que comprende administrar al mamífero una cantidad eficaz de un compuesto definido por la estructura (I), o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo: **(Ver fórmula)**en la cual: a. R1 es H o una valencia para formar un enlace; b. R2 es S o SH; c. una de las líneas de puntos (----) representa un enlace; d. R4, R5, R6 y R7 son independientemente CR8 o N; e. R8 es (i) hidrógeno, (ii) halógeno, (iii) NO2, (iv) -CN, (v) -NHSO2-alquilo C1-3, (vi) -NHCO-alquilo C1-5, (vii) oxima, (viii) hidrazina, (ix) -NR9R10, (x) HSO2, (xi) HSO3, (xii) tioalquilo C1-5, (xiii) aciloxi C1-5, (xiv) H2PO3, (xv) tiol, (xvi) -COOR9, (xvii) alquinilo C1-5 o (xviii) alquilo C1-5, alquenilo C1-5, arilo, heteroarilo o heterociclo, opcionalmente sustituido con uno o más -OH, -SH, C(O)H, COOR9, aciloxi C1-5, halógeno, NR9R10, tioéter C1-5 o alcoxi C1-5; f. R9 es hidrógeno o alquilo C1-3; g. R10 es hidrógeno o alquilo C1-5 opcionalmente sustituido con -OH; h. R es CH y no forma un enlace con R'; i. R' es CH3

CAMPO DE LA INVENCIÓN

[0001]La presente invención se refiere a compuestos y métodos para inhibir la actividad de la tirosinasa de melanocitos en la piel de mamíferos, para reducir la expresión y producción de pigmentación de la piel y, de este modo, aclarar el color de la piel de mamíferos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN [0002]La melanogénesis es el proceso de producción y posterior distribución de melanina por melanocitos dentro de la piel y los folículos pilosos [1, 2]. Los melanocitos tienen orgánulos similares a lisosomas especializados denominados melanosomas que contienen varias enzimas que median la producción de melanina. La enzima tirosinasa que contiene cobre cataliza la oxidación del aminoácido tirosina en DOPA y, posteriormente, DOPAquinona. Al menos dos enzimas melanosómicas adicionales están implicadas en la ruta de la eumelanogénesis, que produce pigmentos marrones y negros, incluyendo TRP-1 (DHICA oxidasa) y TRP-2 (DOPAcromo tautomerasa). Dependiendo de la incorporación de un reactivo que contiene azufre (por ejemplo, cisteína o glutatión) en los productos, la ruta de melanogénesis diverge para producir feomelaninas (pigmentos ámbar y rojos). [0003]El color percibido de la piel y del pelo está determinado por la proporción de eumelaninas respecto a feomelaninas y en parte por la sangre dentro de la dermis. El equilibrio en los matices de la piel está regulado genéticamente por muchos factores, incluyendo, pero sin limitación: (a) los niveles de expresión de tirosinasa, TRP-2 y TRP-1; (b) la conjugación con tiol (por ejemplo, con glutatión o cisteína) que conduce a la formación de feomelaninas; (c) la hormona estimulante de melanocitos  (-MSH) y el receptor de melanocortina, que está acoplado a la ruta de la adenilato ciclasa/proteína quinasa A; [15] (d) el producto del locus agutí, la proteína señal de agutí, que se ha documentado que regula negativamente la pigmentación de los melanocitos del pelo en roedores; [16] y (e) mecanismos todavía desconocidos que regulan la captación y distribución de melanosomas en queratinocitos de la matriz del pelo y epidérmica de receptores. [2, 13, 14]. [0004]Las anomalías de la pigmentación cutánea humana se producen como resultado de factores tanto genéticos como ambientales. La exposición de la piel (especialmente caucásica) a radiación ultravioleta, particularmente en las longitudes de onda de UVB (es decir, intermedias), regula positivamente la síntesis de tirosinasa de melanocitos, dando como resultado una melanogénesis aumentada y, por lo tanto, el bronceado. Sin embargo, la exposición aguda o persistente a UVB puede dar como resultado la formación de lesiones o regiones de la piel hiperpigmentadas, incluyendo cáncer de piel por melanoma maligno. [17] Tanto los daños actínicos como las anomalías constitucionales pueden producir regiones afectadas tales como melasma, manchas de la edad, manchas parduzcas, pecas y otros léntigos. [3, 18, 19]. [0005]El vitíligo es la inversa de la hiperpigmentación, en el cual los melanocitos cutáneos se han destruido o no producen suficiente pigmento. [17, 18, 20] Aunque sería deseable restaurar la pigmentación perdida en la piel afectada por vitíligo con terapias tópicas, esto ha demostrado ser muy difícil de conseguir en una alta proporción de sujetos. Como alternativa a la terapia con PUVA o al camuflaje cosmético con lociones autobronceantes de dihidroxiacetona, [18] se podría reducir la pigmentación normal de la piel no afectada para reducir el contraste. Además, se ha desarrollado una demanda comercial global de agentes aclaradores de la piel como productos cosmeticéuticos de “tocador”, ya que algunos individuos de piel oscura de muchos países y razas prefieren un color de piel más blanco por razones psicológicas o sociológicas. [4, 5]. [0006]Todavía no se ha demostrado que algunos agentes supuestamente “activos” o “funcionales” para aclarar el color de la piel (por ejemplo, arbutina, ácido kójico, niacinamida, regaliz, ascorbil fosfato de magnesio, entre otros) sean clínicamente beneficiosos cuando se analizan críticamente en estudios cuidadosamente controlados [5, 6, 25]. Los productos farmacéuticos autorizados por la FDA de los Estados Unidos que contienen hidroquinona (“HQ”) al 2-4% son de mínimamente a moderadamente eficaces. Sin embargo, la HQ ha demostrado ser citotóxica para melanocitos de mamífero cultivados y mutagénica en Salmonella y células de mamífero V79 de hámster chino, [3-6, 10, 11, 25]. La HQ parece ser un intermedio importante en la bioactivación del carcinógeno benceno [12]. Aunque en la bibliografía dermatológica se ha afirmado repetidamente durante muchos años sin subsanarse que la HQ es un inhibidor de la tirosinasa, este compuesto no es un inhibidor eficaz de la enzima de mamíferos [5, 6, 25]. El mecanismo de acción in vitro de la hidroquinona parece ser principalmente un efecto citotóxico melanocítico. Su mecanismo de acción clínico sobre piel completa continúa siendo desconocido. [0007]En vista de estas desventajas bioquímicas del agente blanqueador de la piel convencional, la HQ, es altamente deseable identificar otros compuestos con características de eficacia y seguridad mejoradas. El gentisato de metilo (“MG”), el éster metílico del ácido gentísico (GA; ácido 2,5-dihidroxibenzoico) es un inhibidor moderadamente potente de la acumulación de melanina en un tamiz primario de cultivo de células melanocíticas murinas [6, 25]. El GA es un producto natural de la raíz del género Gentiana, denominado así en honor a Gentius, un rey ilirio (grecorromano) del siglo 2º a. C. que se dice que descubrió por primera vez las propiedades medicinales de la planta [7]. Se cree que la sal sódica del GA es un analgésico y un agente antiinflamatorio. El GA es un metabolito ubicuo producido, no sólo por plantas, sino también por Penicillium patulum y Polyporus tumulosus, y se excreta en la orina de mamíferos después de la ingestión de salicilatos [8, 9]. El MG y el GA son compuestos fenólicos simples estructuralmente similares a la HQ, aunque carecen de la actividad mutagénica de la HQ [25]. El MG no se ha desarrollado como un producto aclarador de la piel tópico disponible en el mercado hasta la fecha. [0008]Dos publicaciones de patente de Sansei Seiyaku también describen varios compuestos que supuestamente son activos como inhibidores de la tirosinasa o como agentes aclaradores de la piel, la JP 5-124925 y la JP 5124922. Los compuestos son diversos bencimidazoltioles, pero no se han desarrollado como productos aclaradores de la piel tópicos disponibles en el mercado hasta la fecha. Además, la feniltiourea (PTU) se ha descrito como un inhibidor de la tirosinasa [30-32]. [0009]Un objeto es proporcionar métodos y composiciones para tratar afecciones médicas relacionadas con la hiperpigmentación tales como melasma, manchas de la edad, pecas, ocronosis, hiperpigmentación postinflamatoria, léntigo y otras imperfecciones de la piel pigmentadas. [0010]Otro objeto de la presente invención es proporcionar métodos y composiciones para inhibir la tirosinasa de melanocitos de mamíferos, la enzima limitante de la velocidad en la producción de melanina a partir de tirosina y DOPA. [0011]Otro objeto más de la invención es proporcionar métodos y composiciones para absorber radiación ultravioleta (UVR) y, por lo tanto,

proteger la piel de la UVR y del fotoenvejecimiento.

[0012]Un objeto adicional de la invención es proporcionar composiciones antioxidantes que protejan la piel de daños oxidativos y/o prevenir la descomposición oxidativa de formulaciones de productos. [0013]Otro objeto es facilitar el descubrimiento de compuestos que inhiban la tirosinasa de mamíferos en extractos acelulares de melanocitos o células de melanoma de mamífero, usando una oxidación de DOPA colorimétrica o un ensayo de sustrato de DOPA o tirosina radiomarcado (CI50  300 M). [0014]Otro objeto es facilitar el descubrimiento de compuestos que inhiban la producción de pigmento de novo (síntesis y/o acumulación) en células de melanoma o melanocitos de mamífero cultivados (CI50  300 M). [0015]Otro objeto es facilitar la evaluación de compuestos para determinar su toxicidad en melanocitos, melanomas u otros cultivos celulares de mamíferos (CI50  300 M). [0016]Otro objeto es proporcionar una composición de la materia y/o identidad de compuestos que son eficaces y/o muestran una toxicidad reducida usando uno o más de los bioensayos descritos en otros objetos, con características bioquímicas equivalentes a o superiores a la hidroquinona o al gentisato de metilo. [0017]Otro objeto más es proporcionar...

1. Método de reducción de la pigmentación de la piel para efectos cosméticos en un mamífero, que comprende administrar al mamífero una cantidad eficaz de un compuesto definido por la estructura (I), o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo:

**(Ver fórmula)**

en la cual:

a. R1 es H o una valencia para formar un enlace; 10 b. R2 es S o SH;

c. una de las líneas de puntos (----) representa un enlace;

d. R4, R5, R6 y R7 son independientemente CR8 o N;

e. R8 es (i) hidrógeno, (ii) halógeno, (iii) NO2, (iv) -CN, (v) -NHSO2-alquilo C1-3, (vi) -NHCO-alquilo C1-5, (vii) oxima, (viii) hidrazina, (ix) -NR9R10, (x)

15 HSO2, (xi) HSO3, (xii) tioalquilo C1-5, (xiii) aciloxi C1-5, (xiv) H2PO3, (xv) tiol, (xvi) -COOR9, (xvii) alquinilo C1-5 o (xviii) alquilo C1-5, alquenilo C1-5, arilo, heteroarilo o heterociclo, opcionalmente sustituido con uno o más -OH, -SH, C(O)H, COOR9, aciloxi C1-5, halógeno, NR9R10, tioéter C1-5 o alcoxi C1-5; f. R9 es hidrógeno o alquilo C1-3;

g. R10 es hidrógeno o alquilo C1-5 opcionalmente sustituido con -OH;

h. R" es CH y no forma un enlace con R';

i. R' es CH3.

25 2. El método de la reivindicación 1, en el cual R4, R5, R6 y R7 son iguales o diferentes y se seleccionan de CR8, en el que R8 es H y en el cual 2 ó 3 de R4, R5, R6 y R7 son CH.

3. El método de la reivindicación 1, en el que el compuesto tiene una CI50 frente a la actividad tirosinasa de mamífero de menos de o igual a 300 M y una CI50 de citotoxicidad en células melanocíticas de mamífero superior a 500 M.

4. El método de la reivindicación 1, en el que el compuesto tiene una CI50 frente a la producción de melanina en células melanocíticas de mamífero de menos de o igual a 300 M y una CI50 de citotoxicidad en células melanocíticas de mamífero superior a 500 M.

5. El método de la reivindicación 1, en el que el compuesto absorbe radiación ultravioleta.

6. El método de la reivindicación 1, en el que el compuesto es un 10 antioxidante.

7. El método de la reivindicación 1, en el que el mamífero es un ser humano.

8. El método de la reivindicación 1, en el que la administración es mediante 15 formulación tópica o un parche oclusivo.

9. El método de la reivindicación 1, en el que el método es para aclarar la pigmentación de la piel.

10. El método de la reivindicación 1, en el que el compuesto es tioacetanilida [CH3CSNHC6H5].

11. Compuesto definido por la estructura (I), o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo:

**(Ver fórmula)**

en la cual:

a. R1 es H; o una valencia para formar un enlace;

b. R2 es S o SH;

c. una de las líneas de puntos (----) representa un enlace;

d. R4, R5, R6 y R7 son independientemente CR8 o N;

e. R8 es (i) hidrógeno, (ii) halógeno, (iii) NO2, (iv) -CN, (v) -NHSO2-alquilo C1-3, (vi) -NHCO-alquilo C1-5, (vii) oxima, (viii) hidrazina, (ix) -NR9R10, (x)

HSO2, (xi) HSO3, (xii) tioalquilo C1-5, (xiii) aciloxi C1-5, (xiv) H2PO3, (xv) tiol, (xvi) -COOR9, (xvii) alquinilo C1-5 o (xviii) alquilo C1-5, alquenilo C1-5, arilo, heteroarilo o heterociclo, opcionalmente sustituido con uno o más -OH, -SH, C(O)H, COOR9, aciloxi C1-5, halógeno, NR9R10, tioéter C1-5 o alcoxi C1-5;

f. R9 es hidrógeno o alquilo C1-3;

g. R10 es hidrógeno o alquilo C1-5 opcionalmente sustituido con -OH;

h. R" es CH y no forma un enlace con R';

i. R' es CH3. para su uso en un método terapéutico para aclarar la piel o para tratar tipos de piel desiguales.

12. El compuesto para el uso de la reivindicación 11, en el cual R4, R5, R6 y R7 son iguales o diferentes y se seleccionan de CR8, en el que R8 es H y en el que 2 ó 3 de R4, R5, R6 y R7 son CH.

13. El compuesto para el uso de la reivindicación 11, en el cual el compuesto tiene una CI50 frente a la actividad de tirosinasa de mamífero de menos de o igual a 300 M y una CI50 de citotoxicidad en células melanocíticas de mamífero superior a 500 M.

14. El compuesto para el uso de la reivindicación 11, en el cual el compuesto tiene una CI50 frente a la producción de melanina en células melanocíticas de mamífero de menos de o igual a 300 M y una CI50 de citotoxicidad en células melanocíticas de mamífero superior a 500 M.

15. El compuesto para el uso de la reivindicación 11, en el que el compuesto absorbe radiación ultravioleta.

16. El compuesto para el uso de la reivindicación 11, en el que el compuesto es un antioxidante.

17. El compuesto para el uso de la reivindicación 11, en el que el mamífero es un ser humano.

18. El compuesto para el uso de la reivindicación 11, en el que la administración es mediante una formulación tópica o un parche oclusivo.

19. El compuesto para el uso de la reivindicación 11, que es para aclarar la pigmentación cutánea.

20. El compuesto para el uso de la reivindicación 11, en el que el uso es

5 para tratar afecciones médicas relacionadas con hiperpigmentación tales como melasma, manchas de la edad, pecas, ocronosis, hiperpigmentación postinflamatoria y léntigo.

21. El compuesto para el uso de la reivindicación 11, en el que el compuesto 10 es tioacetanilida [CH3CSNHC6H5].

22. El método de la reivindicación 1 o el compuesto para el uso de la reivindicación 11, en el cual R2 es S.