INHIBIDORES DE CASPASA 3, 8, 9 Ó 10 EN COMBINACIÓN CON INHIBIDORES DE MEK PARA EL TRATAMIENTO DE LA GRIPE.

Preparación de combinación para su uso para el tratamiento de una enfermedad viral,

provocada por virus Influenza, que contiene al menos una sustancia activa, seleccionada del grupo que consiste en inhibidores de caspasa 3, concretamente Z-DEVD-FMK, Ac-DEVD-CHO, Ac-DMQD- CHO, Z-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK, Z-D(OMe)QMD(OMe)-FMK, e inhibidores de caspasas celulares, que pueden activar la caspasa 3, concretamente los inhibidores de caspasa 8 Z- LE(OMe)TD(OMe)-FMK, Ac-ESMD-CHO, Ac-IETD-CHO, Z-IETD-FMK, los inhibidores de caspasa 9 Z-LE(OMe)HD(OMe)-FMK, Z-LEHD-FMK, Ac-LEHD-CHO, y los inhibidores de caspasa 10 Ac-AEVD-CHO, Z-AEVD-FMK, que inhibe una caspasa celular de manera que se inhibe una multiplicación viral, caracterizada porque adicionalmente está contenida al menos una sustancia de acción antiviral, seleccionada del grupo que consiste en los inhibidores de MEK 2-(2-amino-3-metoxifenil)-4-oxo- 4H-(1)benzopirano, U0126, PD18453, PD98059

Inhibidores de caspasa 3, 8, 9 ó 10 en combinación con inhibidores de mek para el tratamiento de la gripe.

Campo de la invención.

La presente invención se refiere a una preparación de combinación según el preámbulo de la 5 reivindicación 1.

Antecedentes y estado de la técnica.

Las infecciones por virus de ARN o de ADN representan una amenaza significativa para la salud de seres humanos y animales. Por ejemplo, las infecciones por virus Influenza forman parte todavía de las grandes epidemias de la humanidad y año a año causan una multitud de víctimas mortales. Desde el 10 punto de vista de la macroeconomía, son un inmenso factor de coste, por ejemplo por la incapacidad laboral por enfermedad. Asimismo, tienen gran importancia económica, por ejemplo, infecciones por el virus de la enfermedad de Borna, (VEB), que afecta sobre todo a los caballos y a las ovejas, sin embargo se aisló también en seres humanos y en este caso se relacionó con enfermedades neurológicas.

El problema de la lucha contra, especialmente, virus de ARN, es la capacidad de transformación 15 de los virus provocada por una alta tasa de errores de las polimerasas virales, que hace muy difícil tanto la producción de vacunas adecuadas como el desarrollo de sustancias antivirales.

Además, se ha mostrado que la aplicación de sustancias antivirales que están dirigidas directamente contra funciones del virus, si bien al comienzo del tratamiento muestran una buena acción antiviral, en cambio, debido a la mutación, conduce muy rápidamente a la selección de variantes 20 resistentes. Un ejemplo de ello es el agente antigripal amantadina y sus derivados, el que o los que está dirigido o están dirigidos contra una proteína transmembrana del virus. En el plazo de un tiempo corto tras la aplicación se forman variantes resistentes del virus.

Un ejemplo adicional son los nuevos agentes terapéuticos para infecciones por Influenza, que inhiben la proteína de superficie del virus Influenza, neuraminidasa. A éstos pertenece por ejemplo 25 Relanza. Se encontraron ya variantes resistentes a Relanza en pacientes (Gubareva et al., J Infect Dis 178, 1257-1262, 1998). Por tanto, no pudieron cumplirse las esperanzas que se depositaron en este agente terapéutico.

Debido a su genoma la mayoría de las veces muy pequeño y a la capacidad de codificación limitada relacionada con ello para funciones necesarias para la replicación, todos los virus dependen en 30 gran medida de las funciones de sus células huésped. Mediante la influencia sobre tales funciones celulares que son necesarias para la replicación viral, es posible influir negativamente en la replicación del virus en la célula infectada. A este respecto, no existe la posibilidad para el virus, mediante adaptación, especialmente mediante mutaciones, de remplazar la función celular ausente, para huir de ese modo de la presión de selección. Esto pudo demostrarse ya en el ejemplo del virus Influenza A con inhibidores 35 relativamente inespecíficos contra metiltransferasas y cinasas celulares (Scholtissek y Müller, Arch Virol 119, 111-118, 1991).

Se sabe que las células disponen de una multitud de rutas de transmisión de señales, con ayuda de las cuales se transmiten al núcleo celular señales que actúan sobre la célula. De esta manera la célula puede reaccionar a estímulos externos y responder con proliferación celular, activación celular, 40 diferenciación o destrucción celular controlada.

Es común a estas rutas de transmisión de señales que contienen al menos una cinasa, que, mediante fosforilación activa al menos una proteína de transmisión de señales siguiente.

Considerando los procesos celulares que se inducen tras infecciones por virus, se encuentra que una multitud de virus de ADN y de ARN activan rutas de transmisión de señales definidas en la célula 45 huésped infectada, así como por ejemplo, la denominada ruta de transmisión de señales Raf/MEK/ERK-cinasa o la ruta de transmisión de señales MEKK/SEK/JNK. Datos más recientes muestran que la inhibición de la ruta de transmisión de señales Ras-Raf-MEK-ERK mediante sustancias activas, que inhiben de manera relativamente selectiva una o varias de las cinasas que participan en esta ruta de transmisión de señales, por ejemplo las MEK y/o las SEK, puede inhibir drásticamente la multiplicación 50 intracelular de virus de ARN de cadena negativa que se replican dentro del núcleo, por ejemplo del virus Influenza A y del virus de la enfermedad de Borna (VEB) (documento PCT/DE 01/01292; documento PCT /DE 02/02810).

Se sabe que los virus pueden inducir la apoptosis de la célula infectada. Esto pudo comprobarse por ejemplo para virus Influenza in vitro e in vivo (Fesq et al 1994; Hinshaw et al 1994; Mori et al 1995; 55

Takizawa et al 1993). Aún no se ha aclarado de manera inequívoca qué proteína viral actúa de manera proapoptótica a este respecto, posiblemente, la apoptosis de la célula huésped se induce mediante la formación de interferón (Balachandran et al 2000) o mediante proteínas virales proapoptóticas tales como por ejemplo PB1-F2 (Chen et al 2001).

No está clara qué influencia tiene la apoptosis inducida por el virus sobre la multiplicación viral. 5 En parte se cree que la liberación de proteínas virales puede llevar los linfocitos a la apoptosis y, a causa de ello, puede producirse una resistencia inmunitaria reducida contra las células infectadas por el virus y un favorecimiento de la multiplicación viral (van Campen et al 1989; Tumpey et al 2000). Otros suponen que la apoptosis de la célula huésped aumenta la reacción inmunitaria contra el virus a través de la fagocitosis reforzada con ello (Watanabe et al 2002). Por otro lado se sabe que una sobreexpresión de 10 Bcl-2 que actúa de manera antiapoptótica inhibe la multiplicación viral (Hinshaw et al 1994; Olsen et al 1996). En contraposición a esto existen hallazgos de que la inhibición de la apoptosis inducida por virus mediante un inhibidor de caspasa, no tenía ninguna influencia sobre la síntesis de proteínas virales (Takizawa et al 1999).

La apoptosis de una célula puede inducirse, aparte de mediante virus, también mediante otros 15 mecanismos proapoptóticos y proteínas distintos. Es común a estos mecanismos y proteínas diferentes que activan una serie de cascadas celulares proteolíticas de cisteinil-proteasas, denominadas caspasas. Las caspasas activadas inicialmente, tales como por ejemplo caspasa 8 y caspasa 9, activan a este respecto las cascadas efectoras tales como por ejemplo las caspasas 3 y 6. Éstas dividen a su vez una serie de sustratos celulares y provocan con ello la apoptosis de la célula afectada (resúmenes en Cohen 20 1997; Thornberry y Lazebnik 1998). El documento F. Takenari et al., Microbiology and Immunology, 43(3), 245-252 (1999) describe que la apoptosis inducida por virus se facilita mediante la actividad de caspasa 3.

Problema técnico de la invención.

La invención se basa en el problema técnico de exponer preparaciones de combinación que muestran una acción antiviral mejorada. 25

Rasgos fundamentales de la invención así como formas de realización.

Para solucionar el problema técnico, la invención enseña el objeto de la reivindicación 1, así como el objeto de la reivindicación 2. Se encontró que i) los virus Influenza necesitan las caspasas celulares para su multiplicación, en especial la caspasa 3 y que en células sin caspasa 3 los complejos de virus-genoma-ribonucleoproteína no pueden difundirse a través de los poros de la membrana nuclear 30 hacia el citoplasma, sino que permanecen en el núcleo, ii) la inhibición de al menos una caspasa celular, en particular la inhibición de la caspasa 3 lleva a una clara inhibición de la multiplicación de los virus de ARN de cadena negativa, en especial de los virus Influenza y iii) la combinación de un inhibidor para una caspasa, en particular de caspasa 3, con otra sustancia de acción antiviral, concretamente con un inhibidor para una cinasa celular, presenta un efecto sinérgico sobre la inhibición de la multiplicación viral. 35

La acción de los inhibidores de caspasa sobre la multiplicación de virus, en especial de virus de ARN de cadena negativa, por ejemplo de los virus Influenza se aclara porque esta inhibición de la multiplicación viral mediante inhibición de la caspasa no está relacionada con una inhibición de la síntesis de proteínas virales tempranas y tardías (por ejemplo NP o NS1 (tempranas)...

1. Preparación de combinación para su uso para el tratamiento de una enfermedad viral, provocada por virus Influenza, que contiene al menos una sustancia activa, seleccionada del grupo que consiste en inhibidores de caspasa 3, concretamente Z-DEVD-FMK, Ac-DEVD-CHO, Ac-DMQD-CHO, Z-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK, Z-D(OMe)QMD(OMe)-FMK, e inhibidores de caspasas 5 celulares, que pueden activar la caspasa 3, concretamente los inhibidores de caspasa 8 Z-LE(OMe)TD(OMe)-FMK, Ac-ESMD-CHO, Ac-IETD-CHO, Z-IETD-FMK, los inhibidores de caspasa 9 Z-LE(OMe)HD(OMe)-FMK, Z-LEHD-FMK, Ac-LEHD-CHO, y los inhibidores de caspasa 10 Ac-AEVD-CHO, Z-AEVD-FMK, que inhibe una caspasa celular de manera que se inhibe una multiplicación viral, 10

caracterizada porque adicionalmente está contenida al menos una sustancia de acción antiviral, seleccionada del grupo que consiste en los inhibidores de MEK 2-(2-amino-3-metoxifenil)-4-oxo-4H-(1)benzopirano, U0126, PD18453, PD98059.

2. Uso de al menos un inhibidor de caspasa, seleccionado del grupo que consiste en inhibidores de caspasa 3, concretamente Z-DEVD-FMK, Ac-DEVD-CHO, Ac-DMQD-CHO, Z-15 D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK, Z-D(OMe)QMD(OMe)-FMK, e inhibidores de caspasas celulares, que pueden activar la caspasa 3, concretamente los inhibidores de caspasa 8 Z-LE(OMe)TD(OMe)-FMK, Ac-ESMD-CHO, Ac-IETD-CHO, Z-IETD-FMK, los inhibidores de caspasa 9 Z-LE(OMe)HD(OMe)-FMK, Z-LEHD-FMK, Ac-LEHD-CHO, y los inhibidores de caspasa 10 Ac-AEVD-CHO, Z-AEVD-FMK y un inhibidor de una o varias cinasas celulares, 20 seleccionado del grupo que consiste en los inhibidores de MEK 2-(2-amino-3-metoxifenil)-4-oxo-4H-(1)benzopirano, U0126, PD18453, PD98059 para la producción de una preparación de combinación según la reivindicación 1 para el tratamiento de una infección por Influenza.