Un dispositivo para determinar analitos en una mezcla acuosa que comprende:

una matriz (6) de flujo alargada, que es una membrana porosa, que permite el transpote lateral de fluídos a su través, en el que dicha matriz comprende una zona (3) de aplicación de la muestra y, aguas abajo de la misma, una zona (8) de detección que tiene inmovilizados agentes de captura capaces de unirse directa o indirectamente a dicho analitos, son detectados dichos analitos al permitir que un segundo agente ligante marcado se una directa o indirectamente a los analitos, y los agentes de captura inmovilizados están distribuidos en la zona (8) de detección como un conjuntos de pequeños puntos, permitiendo así la detección multianalito o/y multiespecificidad, los agentes de captura están anclados a la matriz a través de partículas inmovilizadas, y algunos de los puntos funcionan como control(es) positivo(s) y/o calibrador(es) interno(s), caracterizado porque A) el número de puntos por matriz de flujo es mayor de 100 B) los puntos que comprenden agentes de captura que tienen la capacidad de interreaccionar con analitos están dispuestos en distintas líneas de flujo de líquido, y C) los agentes de captura son alérgenos o autoantígenos o fragmentos inmunorreactivos de los mismos

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un dispositivo de ensayo en fase sólida que comprende una zona de detección multipuntos, y su uso para ensayos inmunocromatográficos.

Antecedentes de la invención 5

Un tipo de dispositivos de ensayo en fase sólida comprende una matriz de flujo con forma de plato de material altamente absorbente, generalmente una tira de membrana, tal como nitrato de celulosa o fibra de vidrio, en la que el líquido puede ser transportado lateralmente (es decir, en el plano de la tira) por fuerzas capilares de la membrana. La membrana suele tener una zona de aplicación de muestra y una zona de detección más allás de la zona de aplicación de la muestra. En la zona de detección, suele haber un reactivo de captura del analito inmovilizado. Para llevar a cabo el 10 ensayo, la zona de aplicación se pone en contacto con la muestra líquida que se va a someter al ensayo para el analito de interés. El dispositivo se mantiene bajo condiciones suficientes para permitir la capilaridad del líquido para transportar el analito de interés, si está presente en la muestra, a través de la tira de membrana hacia la zona de detección donde el analito es retenido. Una almohadilla absorbente o similar en el extremo posterior de la tira suele asegurar el flujo capilar del líquido. Un reactivo de detección, generalmente marcado, se añade entonces antes de la zona de detección e 15 interacciona con el analito retenido en la zona de detección, y la cantidad de analito retenido se mide. Frecuentemente, el reactivo de detección está predispuesto en la tira de mebrana o sobre ella, por ejemplo, en forma de partículas móviles por difusión que contienen grupos fluoróforos o cromógenos en un punto anterior a la zona de aplicación de la muestra o bien entre la zona de apliación de la muestra y la zona de detección.

Un gran inconveniente de estos dispositivos conocidos es que solo se pueden medir unos pocos analitos por 20 ensayo. En el documento de patente europea EP 191 694 (Syntex Inc.) se publica un dispositivo en el que más de un analito puede ser detectado. Sin embargo, el número de analitos que puede ser detectado es limitado y el problema de detectar analitos que reaccionan en reacción cruzada no se trata.

Sumario de la invención

El problema esencial de la presente invención era posibilitar la detección de varios analitos e incluso analitos 25 que reaccionan en reacciones cruzadas, tales como diferentes alérgenos reaccionando con las mismas IgEs.

Este problema se ha resuelto con un dispositivo multipuntos de acuerdo con la presente invención.

Así, en un primer aspecto la invención proporciona un dispositivo para determinar analitos en una muestra acuosa que comprende:

una matriz de flujo alargada siendo una membrana porosa que permite transporte lateral de un fluído a su 30 través, en el que dicha matriz comprende una zona de aplicación de muestra y, aguas abajo de la misma, una zona de detección que tiene agentes de captura inmovilizados capaces de unirse directa o indirectamente a dicho analitos, en el que dichos analitos son detectados permitiendo que un segundo agente ligante marcado se una directa o indirectamente a los analitos, en el que A) los agentes de captura inmovilizados están distribuidos en la zona de detección como numerosos puntos pequeños, permitiendo 35 así detección multianalito o multiespecificidad, y B) los agentes de captura están anclados a la matriz a través de partículas inmovilizadas, y C) el número de puntos por matriz de flujo es mayor de 100, y D) en el que algun(os) (de los) punto(s) funciona(n) como control(es) positivo(s) y/o calibrador(es) interno(s) donde los puntos que comprenden agentes de captura que tienen la capacidad de reaccionar en reacciones cruzadas con analitos están dispuestos en distintas líneas de flujo de líquido, y los agentes de 40 captura son alérgenos o autoantígenos o fragmentos inmunoreactivos suyos.

El número de puntos por matriz de flujo es preferiblemente 100-1000. Los puntos son preferiblemente de un diámetro menor de 1 mm, preferiblemente de un diámetro menor de 0,5 mm.

Los puntos están preferiblemente dispuestos en un patrón que permite la detección de analitos que reaccionan en reacción cruzada o especificidades cruzadas. Esto viene ejemplificado por alérgenos que reaccionan en reacción 45 cruzada con IgE, es decir, tales alérgenos no deberían ser dispuestos en la misma línea de flujo.

La matriz de flujo es una membrana porosa, tal como nitrocelulosa o una tira de material sólido.

Los agentes de captura son alérgenos o autoantígenos o un fragmento inmunorreactivo suyo. En el dispositivo algún(os) (de los) punto(s) actúa(n) como contol (es) positivo(s) y/o calibrador(es) internos.

La muestra es sangre completa, suero, plasma, saliva u orina. 50

El marcador del segundo reactivo ligante marcado es, por ejemplo, un fluoróforo o un cromóforo.

El dispositivo puede ser utilizado para el rastreo de analitos desconocidos así como para la detección de

inmunoglobulinas específicas. Depositando muchos puntos con material conocido, por ejemplo proteína, es posible rastrear rápidamente qué ligante(s) hay en una muestra que se une(n) específicamente al material de puntos concretos. Un ejemplo es la determinación de muestrsas de IgE específicas, en la que los puntos contienen alérgenos diferentes.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 es una vista en perspectiva de una realización de un dispositivo de acuerdo a la presente 5 invención.

La Figura 2 es una vista de sección lateral del dispositivo de la Figura 1,

La Figura 3 es una vista en despiece correspondiente a la vista lateral de la Figura 2.

Descripción detallada de la invención

Como se muestra en la Figura 1 el dispositivo comprende una cubierta 1 superior y una cubierta 2 inferior de 10 un material que es inerte con respecto a la muestra y cualquier reactivo empleado en los ensayos que sean realizados con el dispositivo, por ejemplo, poliestireno o polipropileno. La cubierta 1 superior tiene una abertura 3 al pocillo de la muestra (cónico aquí) y una ventana 4 de detección.

La cubierta 2 inferior tiene montada sobre ella una tira 6 de membrana de material altamente absorbente (es decir, un material poroso susceptible de ser atravesado por un medio acuoso por capilaridad), por ejemplo nitrocelulosa 15 en un soporte de poliéster. Cerca del extremo anterior de la tira 6 (a la izquierda en las figuras), se dispone sobre la tira una pieza 7 filtrante que contiene agente de detección móvil por difusión (segundo reactivo ligante marcado). Dicho reactivo de detección puede, por ejemplo, ser un conjugado entre una partícula marcada y un reactivo capaz de unirse al analito. En un punto posterior y situado debajo y dentro de la ventana 4 de detección, hay una zona 8 de reacción multipuntos en la tira que contiene varios agentes o reactivos de captura inmovilizados en un patrón concreto sobre la 20 tira. Los agentes de captura son capaces de unirse a los analitos para su ensayo. La zona 8 de reacción (Firguras 2-3) puede ser menor o mayor que en las fiuras que se muestran y puede contener 100-1000 agentes de captura. Algo muy importante es que los agentes de captura que tengan analitos que reaccionan en reacción cruzada no serán dispuestos en la misma línea, es decir, no en la misma línea de flujo de líquido.

La cubierta 1 superior contiene en el extremo anterior de la tira 6 de membrana, una almohadilla 11 de 25 material absorbente de líquidos que sirve para contener el flujo de líquido, o amortiguadora. La abertura 3 de la cubierta 1 está prevista para la introducción de la muestra en la membrana 6. En el caso que se ilustra, un elemento 12 de filtado (que opcionalmente puede consistir en dos o más filtros), se dispone bajo la abertura 3 para ensayos donde el líquido de la muestra requiera ser filtrado, por ejemplo cuando la muestra es sangre completa y las células sanguíneas han de ser separadas. La almohadilla 11 amortiguadora constituye así un contenedor amortiguador de líquidos, referido más 30 adelante como almohadilla amortiguadora, y el espacio definido por la abertura 3 para la muestra y el elemento 12 de filtrado constituyen un pocillo para la muestra o contenedor de la muestra.

Opcionalmente, una película 5 extraíble está presente y su finalidad... [Seguir leyendo]

1. Un dispositivo para determinar analitos en una mezcla acuosa que comprende: una matriz (6) de flujo alargada, que es una membrana porosa, que permite el transpote lateral de fluídos a su través, en el que dicha matriz comprende una zona (3) de aplicación de la muestra y, aguas abajo de la misma, una zona (8) de detección que tiene inmovilizados agentes de captura capaces de unirse directa o indirectamente a dicho analitos, son 5 detectados dichos analitos al permitir que un segundo agente ligante marcado se una directa o indirectamente a los analitos, y

los agentes de captura inmovilizados están distribuidos en la zona (8) de detección como un conjuntos de pequeños puntos, permitiendo así la detección multianalito o/y multiespecificidad, los agentes de captura están anclados a la matriz a través de partículas inmovilizadas, y 10

algunos de los puntos funcionan como control(es) positivo(s)

y/o calibrador(es) interno(s),

caracterizado porque

A) el número de puntos por matriz de flujo es mayor de 100

B) los puntos que comprenden agentes de captura que tienen la capacidad de interreaccionar con 15 analitos están dispuestos en distintas líneas de flujo de líquido, y

C) los agentes de captura son alérgenos o autoantígenos o fragmentos inmunorreactivos de los mismos.

2. Un dispositivo según la reivindicación 1, en el que los puntos tienen un diámetro menor de 1 mm, preferiblemente un diámetro menor de 0,5 mm. 20

3. Un dispositivo según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la muestra es sangre completa, suero, plasma, saliva u orina.

4. Un dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el marcador es un fluoróforo o un cromóforo.

5. El uso del dispositivo según una o más de las reivindicaciones anteriores 1 a 4 para rastrear analitos 25 desconocidos.

6. El uso del dispositivo según una o más de las reivindicaciones anteriores 1 a 4 para rastrear inmunoglobulinas específicas.