Un polipéptido que comprende una parte N-terminal y una parte C-terminal,

en el que dicha parte N-terminal comprende la secuencia distintiva QGP[P o L] y la secuencia de aminoácidos de dicha parte C-terminal tiene una identidad de al menos el 70% con la SEC ID Nº: 1

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere a derivados de citocinas que tienen actividades anti-VIH, anti-inflamatorias u otras.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

No se conoce ningún fármaco que sea capaz de curar las infecciones por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) y el Síndrome de la Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). Hasta la fecha no parece estar al alcance ninguna vacuna capaz de prevenir la infección por VIH.

Las infecciones por VIH existentes actualmente, en muchos casos, se pueden controlar mediante Terapia Antirretroviral Altamente Activa (HAART) que implica una combinación de tres o más fármacos retrovirales. Sin embargo, la aparición de cepas de VIH resistentes de clase único, doble o triple fármaco está aumentando constantemente bajo la presión selectiva de los inhibidores de transcriptasa inversa y proteasa (RTI y PI) empleados actualmente en la HAART.

Por lo tanto, existe una necesidad urgente de nuevos tipos de fármacos anti-VIH. Preferentemente, tales nuevos fármacos se dirigirían a aspectos del virus que son menos vulnerables al desarrollo de resistencia que la transcripción inversa y procesos de maduración vírica abordados por las RTI y PI que se han mencionado anteriormente. En ausencia de una vacuna de VIH existe adicionalmente una necesidad de agentes que sean capaces de prevenir la transmisión del VIH durante el contacto sexual.

Esta necesidad podría satisfacerse potencialmente mediante agentes que inhiben la entrada del VIH en células diana, es decir, agentes de la clase de los "inhibidores de entrada" (EI). Tales agentes se podrían aplicar, por ejemplo, por vía local y por vía tópica a los genitales humanos para prevenir la infección de células por VIH durante el contacto sexual. Los agentes que pueden prevenir la transmisión del VIH durante el contacto sexual se denominan con frecuencia (aunque de manera inapropiada) "microbicidas".

La entrada del VIH en células diana humanas depende de la unión del virión de VIH a la proteína de superficie celular humana CD4 y un denominado correceptor. Los correceptores principales usados por VIH incluyen los receptores acoplados a proteína G de siete dominios transmembrana CXCR4 y CCR5. Se observó que los ligandos de quimiocina naturales de CCR5, en particular RANTES (CCR5), inhibían la entrada de cepas de VIH trópicas para R5 (cepas de VIH que usan CCR5 como un correceptor) en células humanas [1]. RANTES es una citocina proinflamatoria que se sabe que promueve la acumulación y activación celular en enfermedades inflamatorias crónicas.

Ciertos derivados de RANTES con modificaciones en el extremo N presentaron actividad anti-VIH mejorada, por ejemplo, AOP-RANTES, la oxima de aminooxipentano de [glioxilil]1RANTES(2-68) [2] en la que "(268)" indica los restos de 2 a 68 del péptido RANTES de origen natural. Los derivados de RANTES modificados químicamente adicionales con actividad anti-VIH incluyen NNY-RANTES (n-nonanoil-RANTES(2-68) [3, 4]) y PSCRANTES [5].

Sin embargo, los derivados de RANTES modificados químicamente que se han mencionado anteriormente no inhiben solamente la entrada del VIH en las células, sino que también son agonistas relativamente fuertes de CCR5: AOP-, NNY- y PSC-RANTES provocan una cascada de señalización proinflamatoria que implica el flujo de entrada de calcio citosólico. El uso de agentes con tal actividad de señalización como fármacos anti-VIH podría conducir a efectos secundarios indeseados que implican, por ejemplo, inflamación. La inducción de inflamación es un efecto secundario altamente indeseable para agentes anti-VIH profilácticos y se ha reconocido que el riesgo de infección por VIH puede de hecho estar aumentado en tejido inflamado.

Los agentes tales como derivados de RANTES también pueden inducir señalización en células diana debido a la ausencia de selectividad o especificidad del agente por CCR5, es decir, debido a que el agente se une también a las proteínas receptoras CCR1 y CCR3.

Una desventaja de los polipéptidos modificados químicamente es que no se pueden producir mediante medios biotecnológicos directos (expresión y fermentación). También se han descrito derivados de RANTES anti-VIH completamente codificados, es decir, derivados que consisten solamente en aminoácidos codificados de manera natural [6, 7]. Sin embargo, la potencia anti-VIH de todos los derivados de RANTES codificados completamente descritos inicialmente era menor que la de la variante PSC-RANTES modificada químicamente [5].

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DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN

Moléculas de la invención

Ahora se han identificado agentes peptídicos codificados completamente con alta potencia anti-VIH. Estos agentes peptídicos pueden producirse de manera sencilla mediante procedimientos biotecnológicos convencionales, evitando el gasto y esfuerzo requeridos para la síntesis o modificación química. Inesperadamente se ha hallado que en realizaciones preferidas los agentes peptídicos de la presente invención combinan una alta potencia anti-VIH con una capacidad de provocar solamente un bajo grado de señalización proinflamatoria, evitando de este modo los efectos secundarios inflamatorios.

En realizaciones adicionales, los agentes de la invención conducen a la internalización de CCR5 en la célula (regulación negativa o modulación negativa por secuestro de receptor). Este mecanismo de acción sorprendente es ventajoso ya que (i) se puede conseguir la protección de duración comparativa larga mediante una única dosis del fármaco y (ii) las cepas de VIH trópicas para R5 resistentes es menos probable que evolucionen si ni CCR5 ni su forma unida a fármaco están accesibles sobre la superficie de la célula diana para la interacción con el virus.

Los agentes peptídicos particularmente preferidos combinan una alta potencia anti-VIH con una alta actividad de secuestro de receptor y una baja actividad de señalización. Los agentes peptídicos preferidos adicionales de la invención combinan al menos una propiedad deseable seleccionada entre el grupo que consiste en alta potencia anti-VIH, alta actividad de secuestro de receptor y baja actividad de señalización con una alta selectividad de receptor, es decir, unión preferente a CCR5 con respecto a CCR1 y/o CCR3.

Los agentes peptídicos de la invención comprenden una secuencia distintiva que comprende QGP[P o L], es decir, la cuarta posición de la secuencia distintiva puede ser P o L. Preferentemente, esta secuencia distintiva está localizada cerca del extremo N del polipéptido. Preferentemente, la secuencia distintiva está localizada de tal forma que el comienzo de la secuencia distintiva se encuentra dentro de 15 restos del extremo N del polipéptido, más preferentemente dentro de 12, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2, 1 restos del extremo N. En el presente documento, la expresión "el comienzo de la secuencia distintiva" se refiere al extremo N de la secuencia distintiva. La secuencia distintiva también puede estar localizada en el extremo N final del polipéptido, es decir, los extremos N del polipéptido como una totalidad y la secuencia distintiva pueden coincidir.

Por tanto, la invención se refiere a un polipéptido que comprende una parte N-terminal y una parte C-terminal, en el que dicha parte N-terminal comprende la secuencia distintiva QGP[P o L] y la secuencia de aminoácidos de dicha parte C-terminal tiene una identidad de al menos el 70% con la SEC ID Nº: 1.

Preferentemente, dicha secuencia distintiva es

QGP[P o L][L o G o S o M][M o D o S o Q o G] o en una realización preferida adicional,

QGP[P o L][L o G][M o D o S].

Más preferentemente, dicha secuencia distintiva es

QGP[P o L][L o G o S o M][M o D o S o Q o G]XX[Q o G o L o A o T o S]X, o en una realización preferida adicional,

QGP[P o L][L o G][M o D o S]XX[Q o L]X, en la que X indica cualquier aminoácido natural o modificado.

Más preferentemente, dicha secuencia distintiva es QGP[P o L] LM o QGPPG[D o S].

Más preferentemente, dicha secuencia distintiva es QGPPLM o QGPPGD.

En una realización, dicha secuencia distintiva es

QGP[P o L][L o M][M o Q][A o W o G o Q o N]X[Q o G o L][S o V o T o G], o en realizaciones preferidas adicionales,

QGP[P o L][L o M][M o Q][A o W o G o Q o N][L o T o M o S o G o Q o R o Y][Q o G o L][S o V o T... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido que comprende una parte N-terminal y una parte C-terminal, en el que dicha parte N-terminal comprende la secuencia distintiva QGP[P o L] y la secuencia de aminoácidos de dicha parte C-terminal tiene una identidad de al menos el 70% con la SEC ID Nº: 1.

2. Un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la secuencia distintiva es QGP[P o L][L o G o S

o M][M o D o S o Q o G].

3. Un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la secuencia distintiva es QGP[P o L][L o G][M

o D o S].

4. Un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la secuencia distintiva es QGP[P o L][L o G o S

o M][M o D o S o Q o G]XX[Q o G o L o A o T o S]X, en la que X indica cualquier aminoácido natural o modificado.

5. Un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la secuencia distintiva es QGP[P o L][L o G][M

o D o S]XX[Q o G o L]X, en el que X indica cualquier aminoácido natural o modificado.

6. Un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como un medicamento.

7. Una molécula de ácido nucleico que comprende uno o más segmentos/secuencias que codifican los polipéptidos de las reivindicaciones 1 a 6.

8. Un ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como un medicamento.

9. Una célula huésped que comprende un ácido nucleico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 8.

10. Una composición farmacéutica que comprende un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; un ácido nucleico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o la célula huésped de la reivindicación 9.

11. Un polipéptido como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o un ácido nucleico como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 8 o una célula huésped como se define en la reivindicación 9 para su uso en el tratamiento o prevención de infecciones por VIH, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA)

o transmisión del VIH.

12. Uso de un polipéptido como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o un ácido nucleico como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 8 o una célula huésped como se define en la reivindicación 9 para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir infecciones por VIH, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) o la transmisión del VIH.

13. Un polipéptido como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o un ácido nucleico como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 8 o una célula huésped como se define en reivindicación 9 para su uso en el tratamiento o prevención de inflamación, enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, infecciones bacterianas y víricas, enfermedad inflamatoria intestinal, artritis reumatoide, ateroma o arteriosclerosis, asma, rinitis alérgica o dermatitis atópica, el rechazo de órganos, tejidos o células trasplantados, esclerosis múltiple y/u otras enfermedades desmielinizantes, neuropatía periférica, enfermedades malignas, cánceres o cánceres metastatizantes.

14. Uso de un polipéptido como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o un ácido nucleico como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 8 o una célula huésped como se define en la reivindicación 9 para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir inflamación, enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, infecciones bacterianas y víricas, enfermedad inflamatoria intestinal, artritis reumatoide, ateroma o arteriosclerosis, asma, rinitis alérgica o dermatitis atópica, el rechazo de órganos, tejidos o células trasplantados, esclerosis múltiple y/u otras enfermedades desmielinizantes, neuropatía periférica, enfermedades malignas, cánceres o cánceres metastatizantes.

15. Kit que comprende un polipéptido como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, un ácido nucleico como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 8 o una célula huésped como se define en la reivindicación 9.