COMPUESTOS NOVEDOSOS.

Una composición inmunogénica que comprende un polipéptido CASB7439 el cual comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos identidad del 70% en relación a la secuencia de aminoácidos SEC ID N.

º: 2 o SEC ID N.º: 10 a lo largo de la longitud total de SEC ID N.º: 2 o SEC ID N.º: 10, o un fragmento inmunogénico de CASB7439 en el que el fragmento comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º: 16 a la SEQ ID N.º: 33, y un vehículo farmacéuticamente aceptable, para su uso en medicina

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas y procedimientos para inducir respuestas inmunológicas contra antígenos relacionados con tumores. Más específicamente, la revelación se refiere a polinucleótidos, en el presente documento referidos como polinucleótidos CASB7439, polipéptidos codificados por ellos (referidos en el presente documento como polipéptidos CASB7439), materiales recombinantes y procedimientos para su 5 producción. En otro aspecto, la revelación se refiere a procedimientos para utilizar tales polipéptidos y polinucleótidos, que incluyen el tratamiento del cáncer, más particularmente cáncer colorectal, y enfermedades autoinmunológicas y otras afecciones relacionadas. En otro aspecto, la revelación se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen polipéptidos y polinucleótidos CASB7439, a procedimientos de elaboración de tales composiciones y a su uso en medicina. En un aspecto adicional, la revelación se refiere a los procedimientos para identificar agonistas y 10 antagonistas/inhibidores que utilizan los materiales proporcionados por la revelación, y que tratan afecciones asociadas con el desequilibrio de polipéptido CASB7439 con los compuestos identificados. En un aspecto adicional, la revelación se refiere a pruebas de diagnóstico para detectar enfermedades asociadas con actividad o niveles inapropiados de polipéptido CASB7439.

Se cree que los polipéptidos y polinucleótidos de la presente revelación son inmunógenos importantes para la 15 inmunización profiláctica o terapéutica específica contra tumores, porque se expresan específicamente o se sobre-expresan altamente en tumores en comparación con células normales y por consiguiente puede seleccionarse como objetivo por mecanismos inmunes específicos de antígeno que conducen a la destrucción de la célula tumoral. Pueden utilizarse también para diagnosticar la aparición de células tumorales. Además, su expresión inapropiada en algunas circunstancias puede ocasionar una inducción de respuestas inmunes inapropiadas, autoinmunes, las cuales podrían 20 corregirse a través de vacunación apropiada utilizando los mismos polipéptidos o polinucleótidos. A este respecto, las actividades biológicas más importantes para nuestro propósito son las actividades antigénicas e inmunogénicas del polipéptido de la presente revelación. Un polipéptido de la presente revelación puede exhibir también al menos otra actividad biológica de un polipéptido CASB7439, que podría calificarlo como un objetivo para la intervención terapéutica o profiláctica diferente a la relacionada con la respuesta inmune. 25

En un primer aspecto, la presente revelación se refiere a polipéptidos CASB7439. Tales péptidos incluyen polipéptidos aislados, que comprenden una secuencia de aminoácidos la cual tiene una identidad de al menos el 70%, preferentemente una identidad de al menos el 80%, más preferentemente una identidad de al menos el 90%, aún más preferentemente una identidad de al menos el 95%, lo más preferentemente una identidad de al menos el 97-99%, a la SEC ID N.º: 2, SEC ID N.º: 10, SEC ID N.º: 12, o SEC ID N.º: 14 a lo largo de la longitud completa de la SEC ID N.º: 2, 30 SEC ID N.º: 10, SEC ID N.º: 12, o SEC ID N.º: 14 respectivamente, con la condición de que dicho polipéptido aislado no sea SEC ID N.º: 2, SEC ID N.º: 12, o SEC ID N.º: 14. Tales polipéptidos incluyen aquellos que comprenden el aminoácido de la SEC ID N.º: 10.

Los péptidos adicionales de la presente invención incluyen polipéptidos aislados, en los cuales la secuencia de aminoácidos tiene una identidad de al menos el 70%, preferentemente una identidad de al menos el 80%, más 35 preferentemente una identidad de al menos el 90%, aún más preferentemente una identidad de al menos el 95%, lo más preferentemente una identidad de al menos el 97-99%, a la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N.º: 2, SEC ID N.º: 10, SEC ID N.º: 12, o SEC ID N.º: 14, a lo largo de la longitud completa de la SEC ID N.º: 2, SEC ID N.º: 10, SEC ID N.º: 12, o SEC ID N.º: 14 respectivamente, con la condición de que dicho polipéptido no sea SEC ID N.º: 2, SEC ID N.º: 12, o SEC ID N.º: 14. Tales polipéptidos incluyen los polipéptidos de la SEC ID N.º: 10. 40

Preferentemente los polipéptidos anteriormente mencionados se producen de manera recombinante. Lo más preferentemente, los polipéptidos de acuerdo con la invención se purifican, y están substancialmente libres de cualesquiera otras proteínas o material contaminante de origen de huésped.

Los péptidos adicionales de la presente invención incluyen polipéptidos aislados codificados por un polinucleótido que comprende la secuencia contenida en SEC ID N.º: 1. 45

La revelación proporciona también una fragmento inmunogénico de un polipéptido CASB7439, que es una porción contigua del polipéptido CASB7439 que tiene las mismas propiedades inmunogénicas o similares que el polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N.º: 2, SEC ID N.º: 10, SEC ID N.º: 12, o SEC ID N.º: 14. Es decir, el fragmento (si es necesario cuando se acopla a un portador o como parte de una proteína de condensación más grande) es capaz de provocar una respuesta inmune que reconozca al polipéptido CASB7439. Un fragmento 50 inmunogénico tal puede incluir, por ejemplo, el polipéptido CASB7439 que carece de una secuencia líder N-terminal, un dominio de transmembrana o un dominio de aseguramiento C-terminal. En un aspecto preferido del fragmento inmunogénico de CASB7439 de acuerdo con la invención comprende substancialmente todo el dominio extracelular de un polipéptido que tiene una identidad de al menos el 70%, preferentemente una identidad de al menos el 80%, más preferentemente una identidad de al menos el 90%, aún más preferentemente una identidad de al menos el 95%, lo 55 máspreferentemente una identidad de al menos el 97-99%, a aquella de la SEC ID N.º: 2, SEC ID N.º: 10, SEC ID N.º: 12, o SEC ID N.º: 14, a lo largo de la longitud completa de la SEC ID N.º: 2, SEC ID N.º: 10, SEC ID N.º: 12, o SEC ID

N.º: 14 respectivamente. Preferentemente, un fragmento inmunogénico de acuerdo con la invención comprende al menos un epitope.

Los fragmentos de péptido que incorporan un epitope de CASB7439 comprenderán típicamente al menos 7, preferentemente 9 ó 10 aminoácidos contiguos derivados de la SEC ID N.º: 2. Los epitopes preferidos se muestran en las SEC ID N.º: 16 a SEC ID N.º: 33. 5

Los péptidos que incorporan estos epitopes forman un aspecto preferido de la presente revelación. Los mimotopes que tienen las mismas características que estos epitopes, y los inmunógenos que comprenden tales mimotopes que generan una respuesta inmune que reacciona de forma cruzada con un epitope en el contexto de la molécula CASB7439, forman parte también de la presente revelación.

Por lo tanto, la presente invención incluye péptidos aislados que abarcan estos epítopes por si mismos, y cualquier 10 mimotope de los mismos. El significado de mimotope se define como una entidad que es lo suficientemente similar al epitope CASB7439 nativo de modo que sea capaz de reconocerse por anticuerpos que reconocen la molécula nativa; (Gheysen, H.M., y col., 1986, Synthetic peptides as antigens. Wiley, Chichester, Ciba foundation symposium 119, p130-149; Gheysen, H.M.. 1986, Molecular Immunology, 23, 7, 709-715); o son capaces de producir anticuerpos, cuando se acoplan a un portador adecuado, cuyos anticuerpos reaccionan con la molécula nativa. 15

Los mimotopes de péptido de los epítopes anteriormente identificados pueden diseñarse para un propósito particular por adición, eliminación o substitución de los aminoácidos elegidos. Consecuentemente, los péptídos de la presente invención pueden modificarse para los propósitos de facilidad de conjugación a un portador de proteína. Por ejemplo, puede ser deseable para algunos procedimientos de conjugación química el incluir una cisteina terminal al epitope. Además puede ser deseable para los péptidos conjugados a un portador de proteína incluir un extremo hidrofóbo distal 20 del extremo conjugado del péptido, de manera tal que el extremo no conjugado libre del péptido permanece asociado con la superficie de la proteína transportadora. Esto reduce los grados conformacionales de libertad del péptido, y aumenta así la probabilidad de que el péptido se presente en una conformación que se parezca estrechamente a aquella del péptido como se encuentra en el contexto de la molécula completa. Por ejemplo, los péptidos pueden alterarse para tener una cisteina...

1. Una composición inmunogénica que comprende un polipéptido CASB7439 el cual comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos identidad del 70% en relación a la secuencia de aminoácidos SEC ID N.º: 2 o SEC ID N.º: 10 a lo largo de la longitud total de SEC ID N.º: 2 o SEC ID N.º: 10, o un fragmento inmunogénico de CASB7439 en el que el fragmento comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º: 16 a la SEQ ID N.º: 33, y un vehículo farmacéuticamente aceptable, para su uso en medicina. 5

2. Una composición inmunogénica que comprende un polinucleótido que codifica CASB7439 o un fragmento del mismo de acuerdo con la reivindicación 1; en la que el polinucleótido está seleccionado del grupo que comprende SEC ID N.º: 8 y SEC ID N.º: 9; y un vehículo farmacéuticamente aceptable, para su uso en medicina.

3. Una composición inmunogénica que comprende una cantidad efectiva de células presentadoras de antígeno, modificadas mediante carga in vitro con un polipéptido CASB7439 de acuerdo con la reivindicación 1, o modificadas 10 genéticamente in vitro para expresar un polipéptido CASB7439 de acuerdo con la reivindicación 1, y un vehículo farmacéuticamente efectivo.

4. Una composición farmacéutica que comprende un polipéptido CASB7439 que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos identidad del 70% en relación a la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º: 2 o SEC ID N.º: 10 a lo largo de la longitud total de SEC ID N.º: 2 o SEC ID N.º: 10, o un fragmento inmunogénico de CASB7439 15 en el que el fragmento comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID N.º: 16 a la SEQ ID Nº: 33, y un vehículo farmacéuticamente aceptable, para su uso en medicina.

5. Una composición farmacéutica que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido CASB7439 o un fragmento del mismo de acuerdo con la reivindicación 4; en el que el polinucleótido está seleccionado del grupo que comprende SEC ID N.º: 8 o SEC ID N.º: 9 y un vehículo farmacéuticamente aceptable, para su uso en medicina. 20

6. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de células presentadoras de antígeno, modificadas mediante carga in vitro con un polipéptido CASB7439 de acuerdo con la reivindicación 4, o modificadas genéticamente in vitro para expresar un polipéptido CASB7439 de acuerdo con la reivindicación 4 y un vehículo farmacéuticamente efectivo.

7. Una composición farmacéutica o inmunogénica como se reivindica en la reivindicación 1 ó 4 que 25 adicionalmente comprende un adyuvante que induce TH-1.

8. Una composición farmacéutica o inmunogénica como se reivindica en la reivindicación 7 en la que el adyuvante que induce TH-1 se selecciona del grupo de adyuvantes que comprende: 3D-MPL, QS21, una mezcla de QS21 y colesterol, y un oligonucleótido CpG o una mezcla de dos o más de dichos adyuvantes.

9. El uso de una composición inmunogénica o farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30 8, en la fabricación de una vacuna para tratar inmunoterapéuticamente un paciente que sufre de o es susceptible a, carcinoma en el que el carcinoma es cáncer de colon, u otros padecimientos asociados con el colon u otras enfermedades asociadas con el colon.

10. Una composición farmacéutica o inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para su uso en el tratamiento inmunoterapéutico de un paciente que sufre de, o es susceptible, a carcinoma en el cual el 35 carcinoma es cáncer de colon u otros padecimientos asociados con el colon u otras enfermedades asociadas con el colon.

Figura 1: datos de PCR en tiempo real usando la sonda de Taqman