COMPUESTOS INMUNOMODULADORES QUE CONTIENEN GAMMA-GLUTAMILO Y BETA-ASPARTILO Y MÉTODOS CON ELLOS.

Un compuesto con al menos dos residuos de aminoácido y que tiene la estructura de Fórmula 1:

Fórmula 1 donde n es 1 ó 2, R es hidrógeno, un acilo que tiene 2 a 10 átomos de carbono o un alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos, y X es L-triptófano o D-triptófano, y en la que el carbono marcado con un asterisco en la Fórmula 1 tiene una estereoconfiguración, cuando n es 2, que es diferente de la estereoconfiguración de X

Campo de la Invención

La invención se refiere generalmente a compuestos inmunoestimulantes y más particularmente se refiere a compuestos inmunoestimulantes que incluyen un resto bien º-Lglutamilo, bien º-D-glutamilo, bien º-L-aspartilo o bien º-Daspartilo que estimula la maduración y la diferenciación de ciertas clases de glóbulos blancos dentro del cuerpo. Esta estimulación selectiva de la diferenciación y la proliferación de glóbulos blancos mejora las defensas del cuerpo contra organismos que provocan enfermedades y también modula y mejoras afecciones autoinflamatorias.

Antecedentes de la Invención

El sistema inmunitario es una red de células adaptadas para proteger al organismo contra patógenos y células que no son reconocidas como “propias”. Una vez que se activa el sistema inmunitario, recluta la participación de una variedad de células y moléculas para montar una función efectora diseñada para eliminar la entidad “no propia” del interior del cuerpo. Los linfocitos son células del sistema inmunitario que son capaces de reconocer específicamente y eliminar selectivamente entidades extrañas. En contraste con

linfocitos confieren especificidad, diversidad, memoria y reconocimiento propio/no propio a la respuesta inmunitaria.

Existen dos poblaciones principales de linfocitos: linfocitos B y linfocitos T. Los linfocitos B se originan y maduran dentro de la médula ósea y son responsables de la formación de moléculas de anticuerpo. Los linfocitos T también surgen de la médula ósea pero maduran en el timo. Existen dos subpoblaciones principales de células T: células T auxiliares y células T citotóxicas. Los dos tipos de células T pueden distinguirse por la presencia de una o dos glicoproteínas de membrana, bien CD4 o bien CD8. Las células T auxiliares (que expresan CD4) cuando son activadas por complejos antigénicos (moléculas extrañas acopladas a

proteínas especiales) responden secretando diversos factores de crecimiento conocidos colectivamente como citoquinas. Estas citoquinas son señales que activan otras células del sistema inmunitario, incluyendo las células T citotóxicas. Las células T citotóxicas (que expresan CD8), cuando se activan, proliferan y se diferencian en linfocitos T citotóxicos (CTL) que son capaces de controlar y eliminar del

normales de los linfocitos T se regulan mediante hormonas peptídicas secretadas por células tímicas. Una de tales hormonas es el péptido de 49 residuos de aminoácido timopoyetina. Los residuos 32-36 de la timopoyetina, Arg-Lys-Asp-Val-Tyr, retienen las actividades biológicas de la timopoyetina y son la base de un fármaco inmunomodulador llamado timopentina. Las aplicaciones terapéuticas de la timopentina incluyen el uso para artritis reumatoide, afecciones dermatológicas, infecciones por bacterias, virus y hongos, inversión de la depresión inmunitaria debida a cirugía o a la terapia del cáncer, potenciación de respuestas a la vacunación contra el virus de la hepatitis B y tratamiento del virus de inmunodeficiencia adquirida (sida), una afección en la que células T auxiliares (CD4) son atacadas específicamente por el virus (Christian, J.S., “A Review of the Pharmacology, Clinical Applications, and Toxicology of Thymopentin”, Transgenica: The Journal of Clinical Biotechnology, 1, pp. 23-34, 1994).

Un segundo compuesto con propiedades similares a la timopentina es el dipéptido Glu-Trp denominado timógeno. La secuencia -Glu-Trp-también está presente en la molécula que es precursora para la síntesis de timopoyetina, pero -GluTrp-no es parte de la hormona de 49 aminoácidos ni es el dipéptido reconocido como un contribuyente a la actividad biológica de las timopoyetinas. El timógeno fue descubierto y se usó principalmente en Rusia para la profilaxis y el tratamiento de infecciones. El timógeno se usó para la mejora de la función inmunitaria después del daño de los linfocitos

por exposición accidental a irradiación como resultado del incidente de Chernobyl. (Khavinson et ál., documentos WO 92/17191 y WO 93/08815, “Pharmaceutical Dipeptide Compositions and Methods of Use Thereof”).

Péptidos derivados de º-L-glutamilo se presentan naturalmente en el cuerpo, siendo el ejemplo mejor conocido el tripéptido glutationa. Moléculas de º-L-glutamilo se han usado como fármacos “candidato”. Estos candidatos se denominan “profármacos” debido a que el resto de º-Lglutamilo se usa como un vehículo para la porción activa de la molécula. Por ejemplo, el º-L-glutaminil-4-hidroxi-3yodobenceno demuestra actividad antitumoral en ser humano y en líneas celulares de melanoma de ratón. Se cree que las actividades antitumorales de este compuesto se deben a la liberación enzimática de 4-hidroxi-3-yodobenceno cerca de las células tumorales (Prezioso et ál., “º-Glutamyltranspeptidase Expression Regulates the Growth Inhibitory Activity of the Anti-tumor Prodrug º-glutaminyl-4-hydroxy-3-iodobenzene,” International Journal of Cancer, 56, pp. 874-879, 1994). Además, la º-L-glutamildopamina y el º-L-glutamil-5hidroxitriptófano se han descrito como profármacos que podrían transportar y suministrar dopamina y 5hidroxitriptófano a neuronas cerebrales (Likamwa et ál., “The Antinatriuretic Action of º-L-glutamyl-5-hydroxy-L-tryptophan is Dependent on its Decarboxylation to 5-hydroxytroptamine in Normal Brain,” British Journal of Clinical Pharmacology, 387:265-269, 1994).

En el documento PCT WO 96/40740, publicado el 19 de diciembre de 1996, los inventores Deigin y Korotkov describen péptidos de fórmula X-A-D-Trp-Y (I), donde: A = D-Glu o ácido D-isoglutámico (D-iGlu); X = H, Gly, Ala, Leu, Ile, Val, Nva, Pro, Tyr, Phe, Trp, D-Ala, D-Leu, D-Ile, D-Val, D-Nva, D-Pro, D-Tyr, D-Phe, D-Trp, ácido º-aminobutírico o ácido ºaminocaproico; Y = Gly, Ala, Leu, Ile, Val, Nva, Pro, Try, Phe, Trp, D-Ala, D-Leu, D-Ile, D-Val, D-Nva, D-Pro, D-Try, D-Phe, D-Trp, ácido º-aminobutírico, ácido º-aminocaproico, OH

o amino sustituido con 1-3C. Se dice que los compuestos (I) tienen actividad inmunosupresora (por ej., inhibiendo la

proliferación de células del bazo) y son útiles en medicina humana y veterinaria y bioquímica experimental.

El documento W097119691 describe una clase de moléculas inmunomoduladoras sintéticas que tienen la estructura:

**(Ver fórmula)**

5 en la que R es hidrógeno, acilo o alquilo y X es un aminoácido aromático o heterocíclico o su derivado. Compuestos ejemplares incluyen º-L-glutamil-L-triptófano (Bestim), N-metil-º-L-glutamiltriptófano, N-acetil-º-L10 glutamil-L-triptófano, º-L-glutamil-Nin-formil-L-triptófano y º-L-glutamil-º-tienil-D-alanilamida. De acuerdo con la presente invención, se proporciona un compuesto con al menos dos residuos de aminoácido y que tiene la estructura de Fórmula 1: 15 Fórmula 1

**(Ver fórmula)**

donde n es 1 ó 2, R es hidrógeno, un acilo que tiene 2 a 10 átomos de carbono o un alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos y

20 X es L-triptófano o D-triptófano, y en la que el carbono º marcado con un asterisco en la Fórmula 1 tiene una estereoconfiguración, cuando n es 2, que es diferente de la estereoconfiguración de X. Los presentes inventores han descubierto que están incluidos como miembros de la nueva clase los compuestos en los que R = hidrógeno y X = L-triptófano y D-triptófano, tales como º-D-glutamil-L-triptófano, º-L-glutamil-Dtriptófano, º-L-aspartil-L-triptófano y º-D-aspartil-Ltriptófano. El carbono º marcado con un asterisco en la Fórmula 1 tiene una estereoconfiguración, cuando n es 2, que es diferente de la estereoconfiguración de X. Una realización

particularmente preferida es º-D-glutamil-L-triptófano. Los péptidos de Fórmula 1 pueden formar sales farmacéuticamente aceptables con cualquier ácido orgánico o inorgánico atóxico. Sales de los grupos carboxílicos incluyen las sales de ácido carboxílico atóxicas formadas con cualesquiera bases inorgánicas u orgánicas adecuadas.

Bestim tiene una potente actividad inmunoestimulante cuando se prueba en diversos sistemas de ensayo experimentales...

1. Un compuesto con al menos dos residuos de aminoácido y que tiene la estructura de Fórmula 1:

Fórmula 1

**(Ver fórmula)**

donde n es 1 ó 2, R es hidrógeno, un acilo que tiene 2 a 10 átomos de carbono o un alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos, y X es L-triptófano o D-triptófano, y en la que el carbono º marcado con un asterisco en la Fórmula 1 tiene una estereoconfiguración, cuando n es 2, que es diferente de la estereoconfiguración de X.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que X es L-triptófano.

15 3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que X es D-triptófano.

4. Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable.

20 5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es º-D-glutamil-L-triptófano.

6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es º-L-aspartil-L-triptófano.

7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 25 que es º-D-aspartil-L-triptófano.

8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es acetil-gamma-D-glutamil-L-triptófano.

9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es gamma-D-glutamil-L-triptofanoamida.

30 10. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación precedente mezclado con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

11. El uso de un compuesto en una forma

farmacéuticamente aceptable que tiene la estructura de 35 Fórmula 1:

Fórmula 1

**(Ver fórmula)**

donde n es 1 ó 2, R es hidrógeno, un acilo que tiene 2 a 10 átomos de carbono o un alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos y 5 X es L-triptófano o D-triptófano, y en la que el carbono º marcado con un asterisco en la Fórmula 1 tiene una estereoconfiguración, cuando n es 2, que es diferente de la estereoconfiguración de X, para la fabricación de un medicamento para tratamiento terapéutico inmunomodulador para administrar a un paciente una dosis en el intervalo de aproximadamente 1 ng a aproximadamente 1000 ºg por kg de peso corporal de dicho compuesto Fórmula 1.

12. El uso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que el medicamento está en una forma para la administración como una sola dosis o una pluralidad de dosis suministradas intermitentemente.

13. El uso de acuerdo con la reivindicación 11 o la reivindicación 12, en el que el medicamento está en una forma para la administración mediante inyección parenteral, inhalación oral o nasal o ingestión oral.

14. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, en el que el compuesto de Fórmula 1 es como se define en la reivindicación 3.

15. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, en el que el compuesto de Fórmula 1 es º-D-glutamil-L-triptófano.

16. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15, en el que la administración es eficaz para modular el sistema inmunitario de un paciente.