COMPUESTOS ANTI-ANGIOGÉNICOS.

La presente invención se refiere a nuevos compuestos que poseen actividad anti-angiogénica y procedimientos para preparar y usar estos compuestos. Antecedentes La angiogénesis es el proceso fundamental por el que se forman nuevos vasos sanguíneos y es esencial para una diversidad de actividades corporales normales tales como reproducción, desarrollo y reparación de heridas. Aunque la angiogénesis es un proceso altamente regulado en condiciones normales, muchas enfermedades (caracterizadas como enfermedades angiogénicas) están provocadas o agravadas por angiogénesis desregulada. Por ejemplo, la neovascularización ocular se ha implicado como la causa más habitual de ceguera. Ciertas afecciones existentes tales como artritis, vasos sanguíneos capilares de nueva formación invaden las articulaciones y destruyen el cartílago. En diabetes, nuevos capilares formados en la retina invaden el humor vítreo, sangran y provocan ceguera. El crecimiento y metástasis de tumores sólidos también son dependientes de angiogénesis (J. Folkman, Cancer Res., 46: 467-473 (1986), J. Folkman, J. Natl. Cancer Inst., 82: 4-6 (1989)). Se ha mostrado, por ejemplo, que los tumores que crecen a más de 2 mm obtienen su propio aporte sanguíneo induciendo el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos capilares. Una vez que estos nuevos vasos sanguíneos se incluyen en el tumor, proporcionan un medio para que las células tumorales entren en la circulación y realicen metástasis a sitios distantes tales como el hígado, pulmones y huesos (N. Weidner, y col., N. Engl. J. Med., 324: 1-8 (1991)). Se han identificado diversos péptidos que se unen al factor relacionado con angiogénesis angiopoyetina-2 (Ang-2) (Oliner, J. y col., Cancer Cell. 204(6). 507-516 (2004) documento WO 2004/092215). Se ha mostrado que los péptidos que se unen a Ang-2 poseen actividad anti-angiogénica. La referencia a cualquier técnica en la presente memoria descriptiva no es, y no debería interpretarse como, un reconocimiento de cualquier forma o sugerencia de que la técnica a la que se hace referencia forma parte del conocimiento general habitual. Breve sumario La presente invención proporciona compuestos de dirección antiangiogénicos (compuestos de dirección AA) basados en péptidos de unión a Ang-2 con especificidad única y propiedades biológicas que son útiles en muchas aplicaciones. Los compuestos de dirección antiangiogénicos de la invención se forman enlazando de forma covalente un agente de dirección anti-angiogénico con un sitio de combinación de un anticuerpo. También se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos diana de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, la presente invención proporciona un agente diana anti-angiogénico (AA) que comprende un péptido que comprende la siguiente secuencia: R 1 -Q 1 (ACK) 2 Y 3 Q 4 P 5 L 6 D 7 E 8 (ACK) 9 D 10 K 11 T 12 L 13 Y 14 D 15 Q 16 F 17 M 18 L 19 Q 20 Q 21 G 22 -R 2 (SEC ID Nº: 43) en la que R 1 es CH3, C(O)CH3, C(O)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3, C(O)CH(CH)CH3, C(O)CH2CH2CH2CH3, C(O) CH(CH3)CH2CH3, C(O)C6H5, C(O)CH2CH2(CH2CH2O)1-5Me, diclorobenzoílo (DCB), difluorobenzoílo (DFB), piridinil carboxilato (PyC) o amido-2-PEG, un grupo protector de amino, un grupo ácido graso lipídico o un carbohidrato; y R 2 es OH, NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3) CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3, NHOCH3, NHOCH2CH3, un grupo protector de carboxi, un grupo ácido graso lipídico o un carbohidrato. Los compuestos de la invención son útiles en la dirección de Ang2 y demuestran propiedades ventajosas frente a agentes que se dirigen a Ang2 existentes. En algunos aspectos de la invención, agentes y compuestos ventajosos de la invención proporcionan un equilibrio atractivo entre valores de CI50 y semivida. En algunas realizaciones de la invención al menos un resto de x 9 y x 11 es un resto de enlace que comprende un aminoácido cuya cadena lateral es capaz de unirse covalentemente a grupos químicos que comprenden electrófilos o nucleófilos respectivamente. La presencia del resto de enlace proporciona a los agentes de dirección de la invención gran flexibilidad para engarces a armazones, macromoléculas y otros restos. En particular, los restos de la invención pueden unirse covalentemente de forma fiable, segura y eficaz a armazones tales como un anticuerpo. 2   Resulta sorprendente que se ha descubierto que la localización del resto de enlace en ciertas posiciones claves en el péptido conduce a aumento de la estabilidad y/o unión del péptido. El resto de enlace es un resto aminoacídico disponible para enlace covalente a través del extremo amino terminal, el extremo carboxi terminal o la cadena lateral del resto de enlace. El resto de enlace puede ser K. En otras realizaciones, el resto de enlace puede ser Y. en otras realizaciones, el resto de enlace puede ser T. el resto de enlace puede ser Dab. El resto de enlace puede ser Dap. En algunas realizaciones, el resto de enlace se selecciona del grupo que consiste en K, Dab, Dap, Y y T. En otras realizaciones, el resto de enlace puede ser C. El resto de enlace puede ser R. El resto de enlace puede ser S. El resto de enlace puede ser N. El resto de enlace puede ser Q. El resto de enlace puede ser D. El resto de enlace puede ser E. El resto de enlace puede ser un residuo cualquiera. En algunas realizaciones, el resto de enlace puede ser x 9 . El resto de enlace puede ser x 11 . En algunas realizaciones, se ha descubierto que usar la cadena lateral de restos de lisina y lisina modificada como el resto de enlace proporciona ciertas ventajas, incluyendo permitir engarces covalentes químicos específicos, fiables, direccionales y eficaces en esa localización. En algunos aspectos de la invención, los agentes de dirección AA de la invención pueden comprender cualquier antagonista de Angiopoyetina 2. En algunos aspectos, la invención proporciona un agente diana AA de la fórmula: R 1 -Q(AcK)Y QPL DE(AcK) DKT LYD QFM LQQ G- R 2 ; (SEC ID Nº:43) en la que R 1 es CH3, C(O)CH3, C(O)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3, C(O)CH(CH3)CH3, C(O)CH2CH2CH2CH3, C(O) CH(CH3)CH2CH3, C(O)C6H5, C(O)CH2CH2(CH2CH2O)1-5Me, diclorobenzoílo (DCB), difluorobenzoílo (DFB), piridinil carboxilato (PyC) o amido-2-PEG, un grupo protector de amino, un grupo ácido graso lipídico o un carbohidrato; y R 2 es OH, NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3) CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3, NHOCH3, NHOCH2CH3, un grupo protector de carboxi, un grupo ácido graso lipídico o un carbohidrato. En algunos aspectos, la invención proporciona un conjugado agente diana AA-engarce que tiene la Fórmula I: en la que: L - [agente diana AA] (I) [agente diana AA] es un péptido de la fórmula: R 1 -Q(AcK)Y QPL DE(AcK) DKT LYD QFM LQQ G- R 2 ; (SEC ID Nº:43) en la que R 1 se refiere a la porción del grupo amino del resto terminal del amino de un agente diana y es NH2, NHC (O)CH3, NHC(O)CH2CH3, NHC(O)CH2CH2CH3, NHC(O)CH(CH3)CH3, NHC(O)CH2CH2CH2CH3, NHC(O) CH(CH3)CH2CH3, NHC(O)C6H5, NH(CH3)C(O)CH2CH2(CH2CH2O)1-5Me, un grupo protector de amino, un grupo ácido graso lipídico o un carbohidrato; R 2 se refiere a la porción del extremo carboxi del resto del extremo carboxi de un agente diana y es COOH, C(O)NH2, C(O)NH(CH3), C(O)NHCH2CH3, C(O)NHCH2CH2CH3, C(O)NHCH(CH3)CH3, C(O) NHCH2CH2CH2CH3, C(O)NHCH(CH3)CH2CH3, C(O)NHC6H5, C(O)NHCH2CH2OCH3, C(O)NHOCH3, C (O)NHOCH2CH3, un grupo protector de carboxi, un grupo ácido graso lipídico o un carbohidrato; y L es un resto de engarce que tiene la fórmula -X-Y-Z, en la que: X está presente opcionalmente, y es un polímero biológicamente compatible, copolímero de bloques C, H, N, O, P, S, halógeno (F, CI, Br, I), o una sal del mismo, un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, oxoalquilo, oxoalquenilo, oxoalquinilo, aminoalquilo, aminoalquenilo, aminoalquinilo, sulfoalquilo, sulfoalquenilo, sulfoalquinilo, fosfoalquilo, fosfoalquenilo, o fosfoalquinilo, fijado a uno de los restos que comprende un agente diana AA; Y es un grupo de reconocimiento opcionalmente presente, que comprende al menos una estructura de anillo; y Z es un grupo reactivo que es capaz de unirse covalentemente a una cadena lateral en un sitio de combinación de un anticuerpo; y 3   sales farmacéuticamente aceptables, estereoisómeros, y, solvatos del mismo. En los aspectos descriptivos de la invención como en el caso anterior, el grupo NH inicial o R 1 se proporciona mediante el resto aminoacídico N-terminal del péptido en cuestión: de esta manera, NHC(O)CH3 representa un grupo C(O)CH3 unido covalentemente al extremo N del péptido, y puede escribirse, en cualquier parte de esta memoria descriptiva y reivindicaciones como C(O)CH3, y así sucesivamente. Por consiguiente, R 1 puede escribirse como: R 1 es CH3, C(O)CH3, C(O)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3,... [Seguir leyendo]

1. Un agente diana (AA) anti-angiogénico que comprende un péptido que comprende la siguiente secuencia: R 1 -Q 1 (ACK) 2 Y 3 Q 4 P 5 L 6 D 7 E 8 (ACK) 9 D 10 K 11 T 12 L 13 Y 14 D 15 Q 16 F 17 M 18 L 19 Q 20 Q 21 G 22 -R 2 (SEC ID Nº: 43) en la que R 1 es CH3, C(O)CH3, C(O)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3, C(O)CH(CH)CH3, C(O)CH2CH2CH2CH3, C(O) CH(CH3)CH2CH3, C(O)C6H5, C(O)CH2CH2(CH2CH2O)1-5Me, diclorobenzoílo (DCB), difluorobenzoílo (DFB), piridinil carboxilato (PyC) o amido-2-PEG, un grupo protector de amino, un grupo ácido graso lipídico o un carbohidrato; y R 2 es OH, NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3) CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3, NHOCH3, NHOCH2CH3, un grupo protector de carboxi, un grupo ácido graso lipídico o un carbohidrato. 2. Un agente diana AA de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R 1 es C(O)CH3. 3. Un agente diana AA de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R 2 es NH2. 4. Un compuesto que tiene la fórmula: o   en la que: L - [agente diana AA] L' - [agente diana AA] el [agente diana AA] es un agente diana AA de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, y L es un resto de engarce, lineal o ramificado, que tiene una fórmula -X-Y-Z, y L' es un resto de engarce, lineal o ramificado, que tiene una fórmula -X-Y-Z', y en la que: X está fijado al agente diana AA a través de la cadena lateral de K 11 , y es una cadena de conexión biológicamente compatible, que incluye cualquier átomo seleccionado entre el grupo que consiste en C, H, N, O, P, S, F, CI, Br y I, y puede comprender un polímero o un co-polímero de bloques, Y es un grupo de reconocimiento opcionalmente presente, que comprende al menos una estructura de anillo; y Z es un grupo reactivo que es capaz de unirse covalentemente con una cadena lateral de un aminoácido en un sitio de combinación de un anticuerpo y Z' es un resto de fijación que comprende un enlace covalente a una cadena lateral de aminoácido en un sitio de combinación de un anticuerpo. 5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, en el que la estructura de anillo Y tiene la estructura opcionalmente sustituida: en las que a, b, c, d, y e son, independientemente, carbono o nitrógeno; f es carbono, nitrógeno, oxígeno, o azufre; Y está fijado a X y Z independientemente, en dos posiciones cualquiera del anillo de valencia suficiente; y no más de cuatro de a, b, c, d, e, o f son simultáneamente nitrógeno y, preferentemente, cada uno de a, b, c, d, y e en la estructura de anillo es carbono, e Y puede ser fenilo. 6. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4-5, en el que Z, si está presente, tiene la estructura: y en la que Z', si está presente, tiene la estructura: o   en las que q = 0-5 y Anticuerpo-N-, si está presente, es un enlace covalente a una cadena lateral en un sitio de combinación de un anticuerpo. 7. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4-6, en el que: X es: en la que cada v y w es, independientemente, 1, 2, 3, 4 ó 5 y se seleccionan de manera que la longitud de la estructura básica de X es 6-12 átomos, y R b es hidrógeno, alquilo C1-10 sustituido o no sustituido, cicloalquilo C3-7alquilo C0-6 sustituido o no sustituido, o aril-alquilo C0-6 sustituido o no sustituido. 8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 7, en el que X-Y es: v = 1 ó 2; w = 1 ó 2; R b es hidrógeno. 9. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4-8, que tiene la fórmula 256   10. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4-9, en el que el grupo Z está unido covalentemente al sitio de combinación de un anticuerpo, y puede tener la estructura: 11. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 10, en el que el Anticuerpo es un anticuerpo catalítico, y es preferentemente un anticuerpo de aldolasa catalítica. 12. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 12-13, en el que dicho Anticuerpo es un anticuerpo de longitud completa, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, dsFv, scFv, VH, diacuerpo, o minicuerpo que comprende dominios VH y VL de h38c2, o es un anticuerpo que comprende los dominios VH y VL de h38c2 y un dominio constante seleccionado entre el grupo que consiste en lgG1, lgG2, lgG3, y lgG4, o es h38c2 lgG1. 13. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 ó 12, en el que el Anticuerpo comprende la SEC ID Nº: 189 y la SEC ID Nº:190, 14. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 4-13 o un agente diana AA de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, y opcionalmente comprende adicionalmente una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes quimioterapéuticos, siendo el agente quimioterapéuticos, preferentemente, un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en 5-flurouracilo, irinotecano, oxilaplatino, bevacizumab, y cetuximab. 15. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4-13, o una composición de acuerdo con la reivindicación 14, o un agente diana anti-angiogénico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, para el tratamiento de un trastorno angiogénico, particularmente angiogénesis anormal o una afección mediada por angiogénesis en un sujeto, incluyendo artritis, psoriasis, angiogénesis del ojo asociada con infección o intervención quirúrgica, degeneración macular, retinopatía diabética, y cáncer; incluyendo carcinomas de mama, colon, recto, pulmón, orofaringe, hipofarigne, esófago, estómago, páncreas, hígado, vesícula biliar y conductos biliares, intestino delgado, tracto urinario, tracto genital femenino, tracto genital masculino, glándulas endocrinas, y piel; hemangiomas; melanomas; sarcomas; tumores del cerebro, nervios, ojos y meninges; leucemia; o linfoma. 257   258   259     261   262   263   264     266   267   268   269     271   272   273   274     276   277   278   279     281   282   283   284     286   287   288   289     291   292