Anticuerpo purificado o fragmento funcional del mismo, en el que dicho anticuerpo o fragmento funcional se une específicamente a por lo menos una de las células HT-29 (n.

º de registro de la ATCC HTB-38; n.º de registro de la DSMZ ACC 299), CACO-2 (n.º de registro de la ATCC HBT-37; n.º de registro de la DSMZ ACC 169), COLO-320 (n.º de registro de la DSMZ ACC 144), COLO-206F (n.º de registro de la DSMZ ACC 21), o COLO-678 (n.º de registro de la DSMZ 194), dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo induce apoptosis o inhibe la proliferación de las células neoplásicas, y en el que dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo comprende una secuencia de región variable de cadena pesada que es por lo menos 95% idéntica a la SEC ID nº: 1 y una secuencia de región variable de cadena ligera que es por lo menos 95% idéntica a la SEC ID nº: 3

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere al campo del diagnóstico y del tratamiento del cáncer y, más específicamente, a la identificación de polipéptidos, tales como anticuerpos, útiles en el diagnóstico, la detección, la monitorización y el tratamiento de neoplasmas en un mamífero, por ejemplo, un ser humano.

En los Estados Unidos cada año se diagnostica con cáncer muy por encima de un millón de individuos. Aunque los avances recientes en el campo médico han mejorado significativamente la tasa de supervivencia entre los pacientes con cáncer, todavía podría evitarse un gran número de muertes relacionadas con el cáncer mediante el diagnóstico temprano del tumor. Por lo tanto, en el momento del diagnóstico inicial, un número alarmante de pacientes ya ha alcanzado estadios tardíos de la enfermedad.

Con respecto al cáncer colorrectal, el pronóstico es habitualmente escaso en el 50% de todos los casos porque el tumor a menudo no se detecta hasta que la enfermedad se ha expandido y alcanzado un estadio terminal. De manera similar, a aproximadamente un 75% de las mujeres se les diagnostica cáncer de ovario después que la enfermedad ya ha alcanzado un estadio avanzado (estadio III o IV) porque los síntomas del cáncer de ovario a menudo son imprecisos

o “silenciosos”. A pesar de la intervención quirúrgica agresiva y los nuevos regímenes quimioterápicos, la tasa de supervivencia global a 5 años para estas mujeres con cáncer de ovario en estadio avanzado ha permanecido constante durante los últimos 30 años, en aproximadamente 15%. Por el contrario, las mujeres a las que se les ha diagnosticado cáncer confinado en el ovario (estadio I) presentan una tasa de supervivencia global a 5 años de aproximadamente 90%.

El documento WO 01/93560 A1 describe un anticuerpo que reconoce un receptor TRAIL DR5 y que presenta una actividad inductora de la apoptosis frente a una célula que expresa DR5 in vivo. El documento WO 97/13844 A1 describe un elemento de unión específica que comprende un dominio de unión a antígeno de anticuerpo humano específico para TGF humano, que se une a las isoformas de TGF humano TGF1 o TGF2 y TGF1, preferentemente con respecto a TGF3. El documento EP 1 106 183 A2 describe la utilización de un anticuerpo antiErbB2 en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de un tumor o cáncer asociado con la sobreexpresión o activación de ErbB2, siendo dicho tumor o cáncer un tumor de hígado, tumor colorrectal, tumor de próstata, tumor pancreático, tumor vulvar, tumor de tiroides, tumor hepático, sarcoma, glioblastoma, tumor de cabeza y cuello, leucemia o neoplasia linfoide.

Claramente, existe una necesidad de la detección y el tratamiento tempranos y mejorados de neoplasmas (por ejemplo, un adenocarcinoma colorrectal, cáncer de ovario, carcinoma escamoso de pulmón, carcinoma lobulillar de mama, carcinoma de estómago, carcinoma de células escamosas de esófago, adenocarcinoma pancreático, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma uterino, o adenocarcinoma de próstata), ya que esto aumentaría la posibilidad del tratamiento del neoplasma, y conduciría así a un pronóstico mejorado para la supervivencia a largo plazo.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Se ha descubierto un anticuerpo que reacciona con un epítopo específico para células neoplásicas. Estos polipéptidos no son sólo excelentes herramientas de diagnóstico, sino que también puede inducir la apoptosis de las células neoplásicas a las que se unen. Esta última característica da lugar a un tratamiento para enfermedades neoplásicas que carece de los efectos secundarios de muchos agentes terapéuticos existentes.

La invención se refiere a un anticuerpo purificado o un fragmento funcional del mismo, uniéndose dicho anticuerpo o fragmento funcional específicamente a por lo menos una de las células HT-29 (n.º de registro de la ATCC HTB-38; n.º de registro de la DSMZ ACC 299), CACO-2 (n.º de registro de la ATCC HBT-37; n.º de registro de la DSMZ ACC 169), COLO-320 (n.º de registro de la DSMZ ACC 144), COLO-206F (n.º de registro de la DSMZ ACC 21), o COLO-678 (n.º de registro de la DSMZ 194), dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo induce la apoptosis o inhibe la proliferación de células neoplásicas, y comprendiendo dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo una secuencia de región variable de cadena pesada que es por lo menos 95% idéntica a la SEC ID nº: 1 y una secuencia de región variable de cadena ligera que es por lo menos 95% idéntica a la SEC ID nº: 3.

En un tercer aspecto, la invención muestra un polipéptido purificado que comprende un anticuerpo, o un fragmento funcional del mismo que se une específicamente a por lo menos una de las células HT-29 (n.º de registro de la ATCC HTB-38; n.º de registro de la DSMZ ACC 299), CACO-2 (n.º de registro de la ATCC HBT-37; n.º de registro de la DSMZ ACC 169), COLO-320 ((n.º de registro de la DSMZ ACC 144), COLO-206F (n.º de registro de la DSMZ ACC 21), o COLO-678 (n.º de registro de la DSMZ 194)), y en el que dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo comprende una secuencia de aminoácidos que es sustancialmente idéntica a una secuencia de región variable de cadena pesada expuesta como SEC ID nº 1 y sustancialmente idéntica a la secuencia de región variable de cadena ligera expuesta como SEC ID nº: 3.

El anticuerpo purificado, o un fragmento funcional del mismo, de la invención, inhibe la proliferación celular cuando se une a una célula neoplásica, pero no inhibe la proliferación celular de una célula que no es neoplásica, uniéndose el anticuerpo específicamente a una célula de adenocarcinoma colorrectal, cáncer de ovario, carcinoma escamoso de pulmón, carcinoma lobulillar de mama, carcinoma de estómago, carcinoma de células escamosas de esófago, adenocarcinoma pancreático, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma uterino, o adenocarcinoma de próstata y no a una célula que no es neoplásica.

**(Ver fórmula)**

En las formas de realización preferidas de los primeros cuatro aspectos de la invención, el anticuerpo purificado incluye una secuencia que es sustancialmente idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEC ID nº: 1 y/o la SEC ID nº: 3. Además, esta secuencia de aminoácidos del polipéptido purificado puede ser idéntica a la secuencia de la SEC ID nº: 1 y/o la SEC ID nº: 3. En otras formas de realización preferidas, el anticuerpo purificado es un anticuerpo monoclonal humano. Además, el fragmento funcional puede ser un fragmento Fab, Fab', o F(ab')2. Un fragmento funcional de este tipo puede incluir un fragmento que es sustancialmente idéntico, o que es idéntico, a la secuencia de la SEC ID nº: 1 o la SEC ID nº: 3. De manera preferida, la función de un fragmento de este tipo es la capacidad para inducir la apoptosis de una célula neoplásica y no de una célula que no es neoplásica o para inhibir la proliferación de una célula neoplásica y no de una célula que no es neoplásica.

Además, la invención se refiere a una célula que produce el anticuerpo o fragmento funcional de la invención. Dicha célula puede ser una célula de hibridoma. También puede ser una célula de levadura o bacteria.

En una forma de realización preferida, la invención muestra un procedimiento de generación de la célula reivindicada en este aspecto. Este procedimiento implica las etapas que consisten en (a) poner en contacto linfocitos con una línea celular de heteromieloma en condiciones que dan lugar a la fusión de un linfocito con una célula de heteromieloma, dando lugar a esta fusión un hibridoma y (b) determinar si el hibridoma produce un polipéptido, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal, que se une específicamente a por lo menos una de las células HT-29 (n.º de registro de la ATCC HTB-38; n.º de registro de la DSMZ ACC 299), CACO-2 (n.º de registro de la ATCC HBT-37; n.º de registro de la DSMZ ACC 169), COLO-320 (n.º de registro de la DSMZ ACC 144), COLO-206F (n.º de registro de la DSMZ ACC 21) o COLO-678 (n.º de registro de la DSMZ 194).

En otra forma de realización preferida, la invención se refiere a un procedimiento de diagnóstico de un neoplasma, tal como un adenocarcinoma colorrectal, cáncer de ovario, carcinoma escamoso de pulmón, carcinoma lobulillar de mama, carcinoma de estómago, carcinoma de células escamosas de esófago, adenocarcinoma pancreático, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo purificado o fragmento funcional del mismo, en el que dicho anticuerpo o fragmento funcional se une específicamente a por lo menos una de las células HT-29 (n.º de registro de la ATCC HTB-38; n.º de registro de la DSMZ ACC 299), CACO-2 (n.º de registro de la ATCC HBT-37; n.º de registro de la DSMZ ACC 169), COLO-320 (n.º de registro de la DSMZ ACC 144), COLO-206F (n.º de registro de la DSMZ ACC 21), o COLO-678 (n.º de registro de la DSMZ 194), dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo induce apoptosis o inhibe la proliferación de las células neoplásicas, y en el que dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo comprende una secuencia de región variable de cadena pesada que es por lo menos 95% idéntica a la SEC ID nº: 1 y una secuencia de región variable de cadena ligera que es por lo menos 95% idéntica a la SEC ID nº: 3.

2. Anticuerpo purificado o fragmento funcional según la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo o fragmento funcional comprende una secuencia de región variable de cadena pesada que es por lo menos 98% idéntica a la SEC ID nº: 1 y una secuencia de región variable de cadena ligera que es por lo menos 98% idéntica a la SEC ID nº: 3.

3. Anticuerpo purificado o fragmento funcional según la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho anticuerpo o fragmento funcional comprende las secuencias de aminoácidos de las SEC ID nº: 1 y 3.

4. Anticuerpo purificado o fragmento funcional según la reivindicación 1 a 3, en el que dicho anticuerpo o fragmento funcional es humano.

5. Anticuerpo purificado o fragmento funcional según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho anticuerpo o fragmento funcional es monoclonal.

6. Anticuerpo purificado o fragmento funcional según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho anticuerpo o fragmento funcional es seleccionado de entre el grupo constituido por Fv, Fab, Fab' y F(ab')2.

7. Célula que produce un anticuerpo o fragmento funcional según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

8. Célula según la reivindicación 7, en la que dicha célula es una célula de hibridoma.

9. Célula según la reivindicación 7, en la que dicha célula es una célula de levadura o E. coli.

10. Procedimiento de generación de la célula según la reivindicación 8, comprendiendo dicho procedimiento las etapas que consisten en:

(a) poner en contacto los linfocitos con una línea celular de heteromieloma en condiciones que dan lugar a la fusión de un linfocito con una célula de heteromieloma, dando dicha fusión lugar a un hibridoma, y

(b) determinar si dicho hibridoma produce un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une específicamente a por lo menos una de las células HT-29 (n.º de registro de la ATCC HTB-38; n.º de registro de la DSMZ ACC 299), CACO-2 (n.º de registro de la ATCC HBT-37; n.º de registro de la DSMZ ACC 169), COLO-320 (n.º de registro de la DSMZ ACC 144), COLO-206F (n.º de registro de la DSMZ ACC 21), o COLO-678 (n.º de registro de la DSMZ 194).

11. Utilización del anticuerpo purificado o fragmento funcional según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en un procedimiento de diagnóstico in vitro de un neoplasma en un mamífero, comprendiendo dicho procedimiento las etapas que consisten en:

(a) poner en contacto una célula o muestra de tejido de dicho mamífero con dicho anticuerpo purificado o fragmento funcional y

(b) detectar si dicho anticuerpo purificado o fragmento funcional se une a dicha célula o muestra de tejido, en la que la unión de dicho anticuerpo purificado o fragmento funcional a dicha célula o muestra de tejido es indicativa de que dicho mamífero presenta un neoplasma.

12. Utilización según la reivindicación 11, en la que dicho mamífero es un ser humano.

13. Utilización según la reivindicación 11, en la que dicho neoplasma es un adenocarcinoma colorrectal, un cáncer de ovario, un carcinoma escamoso de pulmón, o un carcinoma lobulillar de mama.

14. Utilización según la reivindicación 11, en la que dicho anticuerpo o fragmento funcional está conjugado con un agente detectable seleccionado de entre el grupo constituido por un radionúclido, un marcador fluorescente, una enzima, una citotoxina, una citocina y un inhibidor del crecimiento.

15. Utilización según la reivindicación 11, en la que dicho anticuerpo o fragmento funcional está conjugado con una etiqueta de purificación de proteína.

16. Utilización según la reivindicación 15, en la que dicha etiqueta de purificación de proteína puede escindirse.

**(Ver fórmula)**

17. Anticuerpo purificado o fragmento funcional según las reivindicaciones 1 a 6 para su utilización como medicamento destinado al tratamiento de un trastorno proliferativo en un mamífero, en el que la unión de dicho anticuerpo purificado o fragmento funcional a una célula o tejido da lugar a la inducción de la apoptosis de dicha célula o tejido.

18. Utilización según la reivindicación 17, en la que dicho mamífero es un ser humano.

19. Utilización según la reivindicación 17, en la que dicho trastorno proliferativo es un adenocarcinoma colorrectal, un cáncer de ovario, un carcinoma escamoso de pulmón o un carcinoma lobulillar de mama.

20. Utilización según la reivindicación 17, en la que dicho anticuerpo o fragmento funcional está conjugado con un agente detectable seleccionado de entre el grupo constituido por un radionúclido, un marcador fluorescente, una enzima, una citotoxina, una citocina y un inhibidor del crecimiento.

21. Utilización según la reivindicación 20, en la que dicho agente detectable puede inducir la apoptosis de dicha célula o tejido.

22. Utilización según la reivindicación 17, en la que dicho anticuerpo o fragmento funcional está conjugado 15 con una etiqueta de purificación de proteína.

23. Utilización según la reivindicación 21, en la que dicha etiqueta de purificación de proteína puede escindirse.

24. Utilización del anticuerpo purificado o fragmento funcional según cualquiera de las reivindicaciones 17 a

23, en la que la unión de dicho anticuerpo purificado o fragmento funcional a una célula o tejido da lugar a una reducción 20 en la proliferación de dicha célula o de una célula en dicho tejido.

25. Medicamento que comprende el anticuerpo purificado o fragmento funcional según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en un vehículo farmacéuticamente aceptable.

26. Agente de diagnóstico que comprende el anticuerpo purificado o fragmento funcional según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.