ANTICUERPO RECOMBINANTE PARA TUMOR ESPECÍFICO Y SU UTILIZACIÓN.

Proteína de fusión anticuerpo-IL2 anti-MAC Epitelial recombinante que comprende la cadena pesada de la SEQ ID No.

:41 y la cadena ligera de la SEQ ID No.:42

Campo de la invención

La presente invención hace referencia en general a los anticuerpos recombinantes. Más específicamente, la invención hace referencia a anticuerpos recombinantes que específicamente se unen a la molécula de adhesión celular epitelial humana, y a su utilización como agentes de diagnóstico, prognosis y terapéuticos.

Antecedentes de la invención

Ha habido un progreso significativo en el desarrollo de terapias basadas en anticuerpos a lo largo de los años. Por ejemplo, los investigadores han identificado no sólo una variedad de marcadores específicos de cáncer, sino también un variedad de anticuerpos que se unen específicamente a dichos marcadores. Los anticuerpos pueden utilizarse para distribuir ciertas moléculas, por ejemplo, una toxina o una fracción inmunoestimulante, por ejemplo, una citoquina, a una célula cancerígena que expresa el marcador para destruir en forma selectiva la célula cancerígena (véase, por ejemplo las Patentes estadounidenses Nº 5541087 y 5650150).

El anticuerpo KS-1/4 es un anticuerpo monoclonal de ratón dirigido contra la Molécula de Adhesión Celular Epitelial (MAC Epitelial, del inglés EpCAM) La MAC epitelial se expresa a niveles muy bajos en la superficie apical de ciertas células epiteliales. Por ejemplo, la MAC epitelial se expresa en células intestinales en la superficie celular enfrentada a los alimentos ingeridos y lejos de la circulación, donde no sería accesible para la mayoría de las proteínas y células del sistema inmunológico (Balzar et al. [1999] J. Mol. Med. 77: 699-712).

EP 0338 767 (Beavers et al.) revela diferentes versiones de anticuerpos KS 1/4 quiméricos y murinos. Beiboer et al.

(J. Mol. Biol, (2000) 296, 833-849) revela un anticuerpo humano dirigido a una MAC epitelial obtenido mediante la técnica de expresión en fago llamada “phage display” utilizando “selección guiada” para mejorar la afinidad.

Sin embargo, en ciertas circunstancias, la MAC epitelial se expresa en un alto grado en ciertas células, por ejemplo, células tumorales de origen epitelial. Normalmente, estas células tumorales han perdido su polaridad; como consecuencia, la MAC epitelial se expresa sobre toda la superficie de la célula. De este modo, la MAC epitelial es un conveniente marcador tumoral específico para dirigir fracciones inmunoestimulantes basadas en anticuerpos a células tumorales (Simon et al. [1990] Actas de la Academia Nacional de Ciencia de EEUU. 78:2755-2759; Perez et al. [1989] J Immunol. 142:3662-3667).

Sin embargo, los anticuerpos pueden tener una inmunogenicidad asociada en el mamífero huésped. Es más probable que esto ocurra cuando los anticuerpos no son autoanticuerpos. En consecuencia, la efectividad de las terapias basadas en anticuerpos a menudo es por una respuesta inmunogénica dirigida contra el anticuerpo. La respuesta inmunogénica normalmente se incrementa cuando el anticuerpo es en su totalidad o en parte derivado de un mamífero distinto del mamífero huésped, por ejemplo, cuando el anticuerpo es derivado de ratón y el receptor es un ser humano. Por consiguiente, puede ser útil modificar los anticuerpos derivados de ratón para ser más similares a los anticuerpos humanos, con el propósito de reducir o minimizar la inmunogenicidad del anticuerpo derivado de ratón.

Si bien se ha desarrollado una variedad de enfoques, incluyendo, por ejemplo, los anticuerpos quiméricos, la humanización de anticuerpos y modificación superficial (veneering), en consecuencia, existe una necesidad en el arte de anticuerpos que se unan a marcadores de cáncer específicos y que tengan inmunogenicidad reducida al ser administrados a humanos. Además, existe una necesidad en el arte de anticuerpos que distribuyan toxinas o fracciones inmunoestimulantes, por ejemplo, como las proteínas de fusión o los inmunoconjugados a un marcador de cáncer específico para destruir la célula tumoral en forma selectiva.

Resumen de la invención

La presente invención se basa en parte en la identificación de un anticuerpo recombinante que se une específicamente a la MAC epitelial humana, pero es menos inmunogénico en humanos que el anticuerpo anti-MAC epitelial del modelo murino. En particular, la invención hace referencia con una proteína de fusión inmunocitoquina que comprende dicho anticuerpo como se indicó el cual se fusiona con una molécula IL2. De este modo, en particular, la invención proporciona un anticuerpo KS recombinante con una cadena ligera con región variable modificada como especifica SEQ ID NO: 9 y una cadena pesada con región variable modificada como especifica SEQ ID NO: 18, y una proteína de fusión recombinante KS – IL2 que tiene una cadena ligera como especifica SEQ ID NO: 42 y una cadena pesada como especifica SEQ ID NO: 41.

Como se utilizan en la presente invención, los términos "anticuerpo" e “inmunoglobulina” hacen referencia a (i) un anticuerpo intacto (por ejemplo, un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo policlonal), (ii) regiones de unión al antígeno de éste, que incluyen, por ejemplo, un fragmento Fab, un fragmento, un fragmento Fab', un fragmento (Fab')2, un fragmento Fv, un sitio de unión al anticuerpo de cadena sencilla, un sFv, (iii) anticuerpos biespecíficos y regiones de unión al antígeno de éstos, y (iv) anticuerpos multiespecíficos y regiones de unión al antígeno de éstos.

**(Ver fórmula)**

Como se utilizan en la presente invención, los términos “unir específicamente”, “une(n) específicamente” y “unión específica” significan que el anticuerpo tiene una afinidad de unión hacia un antígeno en particular de al menos aproximadamente 106 M-1, más preferentemente de al menos aproximadamente 107 M-1, mas preferentemente aún de al menos aproximadamente 108 M-1, y más preferentemente de al menos aproximadamente 1010 M-1.

Como se utilizan en la presente invención, los términos “Regiones Determinantes de Complementariedad” y “región/regiones CDR” significan las regiones de hipervariabilidad o curvas de regiones variables de inmunoglobulina que interactúan principalmente con un antígeno. La región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina (VH) y la región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina (VL), ambas contienen tres regiones CDR interpuestas entre las regiones variables (regiones FW), como se muestra en la Figura 1. Por ejemplo, con referencia a la secuencia de aminoácidos que define la región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina del anticuerpo KS1/4 como se muestra en SEQ ID NO: 1, las regiones CDR se definen por las secuencias de aminoácidos desde Ser24 hasta Leu33 (región CDR1), de Asp49 a Ser55 (región CDR2), y de His88 a Thr96 (región CDR3). Con referencia a la secuencia de aminoácidos que define la variable de la cadena pesada de inmunoglobulina del anticuerpo KS-1/4 como se muestra en SEQ ID NO: 2, las regiones CDR se definen por las secuencias de aminoácidos desde Gly24 hasta Asn35 (región CDR1), de Trp50 a Gly66 (región CDR2), y de Phe99 a Tyr105 (región CDR3). Las correspondientes regiones CDR de los otros anticuerpos descriptos en la presente invención se muestran en las Figuras 1A-1C después de alinearse con la correspondiente secuencia de cadena pesada o ligera del KS-1/4.

Como se utilizan en la presente invención, los términos “Regiones Variables” y “Regiones FW” significan las regiones de una región variable de inmunoglobulina adyacente a las Regiones Determinantes de Complementariedad. Tanto la región variable (VH) de la cadena pesada de inmunoglobulina como la región variable de la cadena ligera (VL) de inmunoglobulina contienen cuatro regiones FW, como se muestra en la Figura 1. Por ejemplo, con referencia a la secuencia de aminoácidos que define la variable de la cadena ligera de inmunoglobulina del anticuerpo KS-1/4 como se muestra en SEQ ID NO: 1, las regiones FW se definen por las secuencias de aminoácidos desde Gln1 hasta Cys23 (región FW1), de Trp34 a Phe 48 (región FW2), de Gly56 a Cys87 (región FW3), y de Phe97 a Lys106 (región FW4). Con referencia a la secuencia de aminoácidos que define la variable de la cadena pesada de inmunoglobulina del anticuerpo KS-1/4 como se muestra en SEQ ID NO: 2, las regiones FW se definen por las secuencias de aminoácidos de Gln1 a Ser25 (región FW1), de Trp36 a Gly49 (región FW2), de Arg67 a Arg98 (región FW3), y desde Trp106 hasta Ser116 (región FW4). Las regiones FW de los otros anticuerpos descriptos en la presente... [Seguir leyendo]

1. Proteína de fusión anticuerpo-IL2 anti-MAC Epitelial recombinante que comprende la cadena pesada de la SEQ ID No.:41 y la cadena ligera de la SEQ ID No.:42.

2. Utilización de la proteína de fusión anticuerpo según la reivindicación 1 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer.

3. Proteína de fusión anticuerpo-IL2 anti-MAC Epitelial recombinante según la reivindicación 1 para su utilización para el tratamiento del cáncer.