ANTAGONISTAS DE UN RECEPTOR ACOPLADO A LA PROTEINA G.

La invención se refiere al desarrollo de un antagonista de un receptor acoplado a la proteína G, que se une al receptor acoplado a la proteína G desde el lado extracelular, de una forma distinta a la del ligando natural. (b) Descripción de la técnica anterior Las prostaglandinas provienen de la oxigenación del ácido araquidónico mediante las prostaglandina sintetasas. Las prostaglandinas median una amplia variedad de acciones fisiológicas tales como vasomotricidad, ciclo sueño/vigilia, secreción intestinal, lipólisis, filtración glomerular, desgranulación de los mastocitos, neurotransmisión, agregación plaquetaria, luteólisis, contracción del miometrio y parto, inflamación y artritis, conducto arterial persistente, crecimiento y diferenciación celular (Coleman, R.A. et al., 1994, Pharmacol. Rev. 46:205-229; Goetzl, E.J. et al., 1995, FASEB J. 9: 1051-10585). Los prostanoides median sus acciones a través de la unión a distintos receptores, que pertenecen a la superfamilia de la rodopsina, como siete receptores helicoidales transmembranosos. Estos receptores se unen a las proteínas G heterotriméricas que comprenden subunidades , ß y que, después de su activación, provocan alteraciones en el calcio celular, inician la hidrólisis fosfoinosítida o la promoción o la represión de la síntesis del monofosfato cíclico de adenosina (Strader C.D. et al., 1994, Ann. Rev. Biochem. 63:101-132). De los cinco receptores prostanoides farmacológicamente distintos para PGE2, PGI2, PGD2, PGF2 y TxA2 y sus muchas isoformas, el receptor para PGF2, también denominado receptor FP, muestra una limitada distribución tisular, que se expresa predominantemente en los corpora lutea, miometrio uterino, red trabecular ocular, y, en menor medida, en el músculo liso vascular. La iniciación del parto es marcada por el gran aumento en los niveles de PGF2 y el aumento de la contractibilidad uterina. La utilización muy extendida de los análogos de PGF2 para inducir el parto en la industria veterinaria apunta al papel principal de PGF2 y de su receptor en el parto. Esto es subrayado por el hecho de que los ratones a los que les falta el receptor FP no experimentan el parto (Sugimoto et al., 1997, Science 277:81-83). En vista del aumento de los costes producido como resultado de los nacimientos prematuros y de las complicaciones asociadas para el neonato, tales como hemorragia intraventricular, displasia broncopulmonar y leucomalacia periventricular, que conducen a la parálisis cerebral, la prolongación de la gestación deteniendo el parto prematuro constituye una terapia preventiva efectiva. El éxito relativo de medicamentos antiinflamatorios no esteroideos como terapia a corto plazo para la prevención del parto prematuro, se basa en sus acciones inhibitorias sobre la síntesis de prostaglandinas, particularmente PGE2 y PGF2. Sin embargo, la inhibición de PGE2 se asocia a complicaciones graves en el feto, tales como el cierre del conducto arterial, fallo renal e hipertensión pulmonar. A otro nivel, a la PGF2 se le ha atribuido un papel importante en la dismenorrea, una situación que afecta a un 5-7% de las mujeres premenopáusicas. En la patogénesis de esta alteración, subyace un aumento premenstrual en los niveles de PGF2, lo que produce espasmos miometriales. La falta de antagonistas efectivos del receptor FP durante la terapia prolongada, ha impedido avances en la prevención del parto prematuro y en las secuelas asociadas, constituyendo el objeto de la presente solicitud el diseño de dichos antagonistas. El receptor humano FP es una glicoproteína integral de membrana de 45 kDa, formado por 359 aminoácidos y que sólo comparte una identidad secuencial del 47% con el receptor EP1, y, en menor grado, con otros receptores prostanoides (Abramovitz et al., 1994, J. Biol. Chem. 269:2632-2636). La unión de PGF2 al receptor FP, es seguida por la activación del complejo Gqß, el aumento de la unión de GTP por la subunidad Gq, la estimulación de la actividad de la fosfolipasa Cß, la liberación de inositol fosfatos, el aumento del calcio intracelular y el fenómeno subsiguiente de transducción señalética, que conduce finalmente a la contracción de los músculos lisos (Coleman, R.A. et al., 1994, Pharmacol. Rev. 46:205-229). El receptor FP es la única diana eficaz para el desarrollo de medicamentos terapéuticos, ya que algunas proteínas G catalizan las acciones de cientos de receptores unidos a proteínas G, por lo que las dianas por debajo del receptor se utilizan esencialmente poco. Los antagonistas de los receptores FP dirigidos al sitio de unión del ligando, podrían utilizarse de forma limitada, ya que los inhibidores basados en el ligando muestran reactividad cruzada con otros receptores prostanoides. Su eficacia se verá comprometida en vista del gran aumento en las concentraciones de PGF2 en el miometrio al comienzo del parto y en la menstruación. La intensa actividad basal de los receptores en ausencia del ligando, limita la utilización de inhibidores basados en el ligando. Sería muy deseable proporcionar un antagonista de los receptores FP, que no exhibiera reacción cruzada con otros receptores prostanoides y que fuera efectivo incluso en presencia de ligandos en exceso. Otras técnicas anteriores importantes incluyen (1) el documento WO 95/00551; (2) el documento WO 96/23225; (3) el documento WO 93/09104, (4) la patente US nº 5.688.938; (5) Kitanaka J et al., J. Neurochem., febrero 1993; 2   60(2): 704-8, PMID: 809348; (6) Sugimoto Y et al., Science, 1 agosto 1997; 277(5326); 681-3, PMID: 9235889; y (7) Griffin BW et al., J Pharmacol Exp Ther., septiembre 1999; 290 (3): 1278-84, PMID: 10454504. Sumario de la invención Un objetivo de la presente invención consiste en proporcionar un antagonista de los receptores FP, que no presente reacciones de cruzamiento con otros receptores prostanoides. Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar inhibidores de los receptores FP mediante una nueva estrategia para hacer diana en los dominios extracelulares de la proteína receptora. Según la presente invención, se proporciona un antagonista del receptor FP prostaglandínico, que comprende una secuencia aminoácida del receptor FP prostaglandínico seleccionada de entre el grupo constituido por: ilghrdyk (PCP-8; SEC ID nº:1); wedrfyll (PCP-10; SEC ID nº:2); YQDRFYLL (PCP-14; SEC ID nº:3); ILGHRDYK (PCP-13; SEC ID nº: 13); ILAHRDYK (PCP-13.7; SEC ID nº:4); ILaHRDYK (PCP13.8; SEC ID nº:14); ILGFRDYK (PCP-13.11; SEC ID nº:5); ILGHKDYK (PCP-13.13; SEC ID nº:6); ILGHRNYK (PCP-13.14; SEC ID nº:7); ILGHQDYK (PCP- 13.18; SEC ID nº:8); ILGHRDY-amida (PCP-13.20; SEC ID nº:9); ILGHRDYK-amida (PCP-13.21; SEC ID nº:15); ILGWRDYK (PCP-13.22; SEC ID nº:10); SNVLCSIF (PCP-15; SEC ID nº:12) y ILGXRDYK (PCP-13.24; SEC ID nº:11), en las que X es ciclohexil alanina, indicando las letras minúsculas L-aminoácidos y las mayúsculas, Daminoácidos. Asimismo, según la presente invención, se proporciona un péptido que posee actividad antagonista del receptor FP prostaglandínico, estando formado dicho péptido por una secuencia variante de SEC ID nº:1, o SEC ID nº:2, en la que uno o dos residuos de aminoácidos están sustituidos o eliminados, donde dicha secuencia variante contiene L- y/o D-aminoácidos, y donde el grupo C-terminal de dicho péptido es un grupo CO2H o un grupo CONH2. Según la presente invención, se proporciona asimismo el antagonista del receptor FP prostaglandínico o el péptido de la presente invención, para utilizarlos en la prevención de la aparición prematura de un feto. Preferentemente, el antagonista o el péptido utilizados se unen específicamente a la cara extracelular del receptor, impidiendo, por lo tanto, las contracciones uterinas. Asimismo, según la presente invención, se proporciona un antagonista del receptor FP prostaglandínico o el péptido de la presente invención, para utilizarlos en la prevención y/o tratamiento de la dismenorrea. Preferentemente, el antagonista o el péptido que se utilizan se unen específicamente a la cara extracelular del receptor, para impedir la transducción de una señal, reduciendo, por tanto, el dolor asociado con las contracciones. Asimismo, según la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende, por lo menos, un antagonista del receptor FP prostaglandínico, o, por lo menos, un péptido según la presente invención, asociado con un excipiente farmacéuticamente aceptable. Asimismo, según la presente invención, se proporciona un procedimiento para identificar un compuesto como un antagonista del receptor FP prostaglandínico o como el péptido según la presente invención, que puede unirse a los elementos extracelulares de dicho receptor, que comprende las etapas que consisten en: a) el cultivo de células que expresen dicho receptor o la identificación de tejidos animales... [Seguir leyendo]

1. Antagonista del receptor FP prostaglandínico, que comprende una secuencia de aminoácidos del receptor FP prostaglandínico seleccionado de entre el grupo constituido por: ilghrdyk (PCP-8; SEC ID nº:1); wedrfyll (PCP-10; SEC ID nº:2); YQDRFYLL (PCP-14; SEC ID nº:3); ILGHRDYK (PCP-13; SEC ID nº:13); ILAHRDYK (PCP-13.7; SEC ID nº:4); ILaHRDYK (PCP13.8; SEC ID nº:14); ILGFRDYK (PCP-13.11; SEC ID nº:5); ILGHKDYK (PCP-13.13; SEC ID nº:6); ILGHRNYK (PCP-13.14; SEC ID nº:7); ILGHQDYK (PCP-13.18; SEC ID nº:8); ILGHRDY-amida (PCP- 13.20; SEC ID nº:9); ILGHRDYK-amida (PCP-13.21; SEC ID nº:15); ILGWRDYK (PCP-13.22; SEC ID nº:10); SNVLCSIF (PCP-15; SEC ID nº:12) y ILGXRDYK (PCP-13.24; SEC ID nº:11), en el que X es la ciclohexil alanina, en el que las letras minúsculas indican L-aminoácidos y las letras mayúsculas D-aminoácidos. 2. Péptido que presenta actividad antagonista del receptor FP prostaglandínico, estando dicho péptido constituido por una secuencia variante de SEC ID nº:1, o SEC ID nº:2, en la que uno o dos residuos de aminoácidos están sustituidos o eliminados, en el que dicha secuencia variante contiene L- y/o D-aminoácidos, y en el que el grupo Cterminal de dicho péptido es un grupo CO2H o un grupo CONH2. 3. Antagonista del receptor FP prostaglandínico según la reivindicación 1 o péptido según la reivindicación 2, para su utilización en la prevención de un parto prematuro del feto. 4. Antagonista del receptor FP prostaglandínico según la reivindicación 1 o péptido según la reivindicación 2, para su utilización en la prevención y/o en el tratamiento de la dismenorrea. 5. Composición farmacéutica que comprende por lo menos un antagonista del receptor FP prostaglandínico según la reivindicación 1 o por lo menos un péptido según la reivindicación 2, en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable. 6. Procedimiento para identificar un compuesto como un antagonista del receptor FP prostaglandínico según la reivindicación 1 o el péptido según la reivindicación 2 que puede unirse a los elementos extracelulares de dicho receptor, que comprende las etapas que consisten en: a) cultivar las células que expresan dicho receptor o identificar los tejidos animales ex vivo en los que las consecuencias fisiológicas dependen de dicho receptor; b) poner en contacto dichos células o tejidos con dicho compuesto a una concentración de 10 -10 a 10 -3 M, para ser examinados con respecto a la actividad antagonista en dicho receptor; y c) medir una respuesta para alterar la transducción de una señal que dé lugar a las consecuencias fisiológicas seleccionadas de entre el grupo constituido por aumentos en el calcio celular, hidrólisis de fosfoinosítida, crecimiento y/o diferenciación celular, expresión génica alterada, y contracción o dilatación del músculo liso, en el que dicha respuesta indica una actividad antagonista. 7. Procedimiento para determinar la actividad del antagonista según la reivindicación 1 o del péptido según la reivindicación 2 como un antagonista del receptor FP prostaglandínico que puede unirse a los elementos extracelulares de dicho receptor, que comprende las etapas que consisten en: a) cultivar las células que expresen dicho receptor o identificar los tejidos animales ex vivo en los que las consecuencias fisiológicas dependen de dicho receptor; b) poner en contacto dichos células o tejidos con dicho antagonista o péptido a una concentración de 10 -10 a 10 -3 M, para ser examinados con respecto a la actividad antagonista en dicho receptor; y c) medir una respuesta para alterar la transducción de una señal que dé lugar a las consecuencias fisiológicas seleccionadas de entre el grupo constituido por aumentos en el calcio celular, hidrólisis fosfoinosítida, crecimiento y/o diferenciación celular, expresión génica alterada, y contracción o dilatación del músculo liso. 8. Utilización de una cantidad terapéuticamente eficaz del antagonista del receptor FP prostaglandínico según la reivindicación, 1 o del péptido según la reivindicación 2, para la preparación de un medicamento para la prevención del parto prematuro del feto. 9. Utilización de una cantidad terapéuticamente eficaz del antagonista del receptor FP prostaglandínico según la reivindicación 1 o del péptido según la reivindicación 2, para la preparación de un medicamento para la prevención y/o el tratamiento de la dismenorrea. 11   12   13   14     16