METODO PARA EL DIAGNOSTICO RAPIDO DE BLANCOS EN FLUIDOS CORPORALES HUMANOS.

Un método para la detección de un blanco, el cual se selecciona de patógenos y/o componentes asociados a una alergia en un fluido ocular que comprende las etapas:

(a) recolectar, de manera no-invasiva, una muestra de fluido ocular de 0.1-100 µl con un escobillón,

(b) transferir directamente la muestra del escobillón a una zona de detección en un dispositivo de análisis de muestras sin pre-tratamiento de la muestra en el escobillón, y

(c) análisis de la muestra

Método para el diagnóstico rápido de blancos en fluidos corporales humanos.

Campo técnico de la invención

La presente invención se relaciona con un método para la detección de blancos, por ejemplo, patógenos y/o componentes asociados a la alergia, en un fluido ocular humano en donde, una muestra de fluido ocular se recolecta con un escobillón. Las muestras se transfieren directamente del escobillón a un dispositivo de análisis de muestras, en el cual se puede realizar un análisis de los blancos, por ejemplo por medios inmunoquímicos o enzimáticos. Los resultados de la prueba, se pueden mostrar dentro un periodo de tiempo corto y se pueden leer directamente por el usuario. Además, se proporciona un kit de prueba para llevar a cabo el método de la invención.

Antecedentes de la invención

El análisis de punto de cuidado, rápido se está volviendo cada vez más importante en el diagnóstico y tratamiento de varios agentes virales y otros agentes microbiológiocs patogénicos (bacterias, otros). Especialmente en los estados agudos de una enfermedad infecciosa, los médicos tienen una necesidad para la detección inmediata del agente causal de los síntomas observados.

El oficio previo revela un ensayo rápido de los anticuerpos específicos del HIV en muestras de saliva. Una muestra de saliva se obtiene por medio de un bastón de muestreo. La muestra de saliva se diluye en una solución reguladora de la muestra y un inmunoensayo de flujo lateral se sumerge en la muestra de saliva diluida [United States Patent 5,714,341].

German Patent Nr. DE19622503 sugiere aplicar los inmunoensayos de flujo lateral para la detección de narcóticos ilegales en saliva o sudor.

La conjuntivitis, comúnmente conocida como ojos rojos o conjuntivitis, se puede causar por diferentes agentes incluyendo virus, bacterias y alérgenos. Diferentes etiologías necesitan diferentes tratamientos. La conjuntivitis infecciosa, usualmente es contagiosa. La conjuntivitis, por lo general se diagnostica clínicamente, mediante un examen macroscópico, y (durante un examen rutinario de la vista) biomicroscopia con lámpara de hendidura. Este método no proporciona información sobre el agente infeccioso específico. Si el diagnóstico específico (tipificación del patógeno) es necesario, hisopos del fórnix inferior se envían para un análisis de laboratorio, para determinar el tipo de patógeno. Los métodos preferidos para el análisis de laboratorio son, cultivo celular con inmunofluorescencia directa confirmatoria, ELISA o PCR. La desventaja de esta estrategia de diagnóstico, es que el análisis de laboratorio necesita por lo general entre dos y diez días, utiliza equipos de diagnóstico complejos, y puede necesitar conocimientos técnicos, tanto en la realización como en la interpretación de los resultados. Este periodo de tiempo, es problemático para un tratamiento apropiado de formas infecciosas, potencialmente de la conjuntivitis que no puede ser específicamente clasificado/conectado con un agente patogénico determinado.

Una publicación de Uchio et al. (Opthalmology 104 (1997), 1294-1299) revela un método para la detección de adenovirus en muestras de fluido ocular. El método comprende recolectar una muestra de fluido ocular y detectar el analito en un disco de papel, mediante inmunoadsorción enzimática. La detección, sin embargo, carece de especificidad y sensibilidad.

Por lo tanto, es el objetivo de la invención proporcionar un método sensible y rápido no-invasivo para la detección de patógenos, por ejemplo agentes infecciosos virales o bacterianos en fluidos corporales.

Resumen de la invención

En un primer aspecto, la presente invención se relaciona con un método para la detección de un blanco, el cual se selecciona de patógenos y/o componentes asociados a una alergia en un fluido ocular que comprende las etapas:

(a) recolectar, de manera no-invasiva, una muestra de fluido ocular de 0.1-100 µl con un escobillón,

(b) transferir directamente la muestra del escobillón a una zona de detección en un dispositivo de análisis de muestras sin pre-tratamiento de la muestra en el escobillón, y

(c) análisis de la muestra.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un método para diagnosticar la conjuntivitis, que comprende las etapas:

(a) recolectar, de manera no-invasiva, una muestra de fluido ocular de 0.1-100 µl con un escobillón,

(b) transferir directamente la muestra del escobillón a una zona de detección en un dispositivo de análisis de muestras, sin pre-tratamiento de la muestra en el escobillón, y

(c) análisis de la muestra.

Incluso en otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de un kit de prueba en el método inventivo, en donde el kit de prueba comprende

(a) un escobillón para recolectar, de manera no-invasiva, una muestra de fluido ocular para la transferencia directa del escobillón a una zona de detección de un dispositivo de análisis de muestras sin pre-tratamiento de la muestra en el escobillón,

(b) un dispositivo de análisis de muestras que comprende una zona de detección, en donde la zona de detección contiene reactivos para determinar la presencia y/o cantidad de al menos un blanco, el cual se selecciona de patógenos y/o componentes asociados a una alergia, en donde el patógeno es un agente causal de las conjuntivitis o una pluralidad de dichos agentes causales y en donde un componente asociado a la alergia, es un agente causal o un mediador o conjuntivitis o una pluralidad de dichos agentes causales y/o mediadores.

Descripción de los dibujos

Figura 1, muestra un dispositivo de análisis de muestras, en la forma de una tira de ensayo cromatográfica, que comprende una pluralidad de diferentes materiales de la tira que construyen un relleno adsorbente (1), una zona de aplicación (2), una zona de detección (3) y una zona de residuos (4). Los materiales de la tira se disponen sobre un apoyo plástico adhesivo (5). El relleno adsorbente (1) se proporciona para adicionar un medio de elución, con el fin de facilitar la transferencia de la muestra a la zona de detección (3).

Figura 2, muestra un alojamiento plástico (6) que contiene la tira como se muestra en la Figura 1. Una ventana de aplicación de la muestra (7) se proporciona para poner en contacto el escobillón con la tira. El resultado de la prueba se muestra en la ventana de lectura (8).

Figura 3, muestra un escobillón o dispositivo de recolección para recolectar una muestra. El escobillón comprende un cuerpo plástico (9) con una material de recolección de la muestra (11) fijado en este y un orificio (10) que corresponde a una ventana de lectura cuando el escobillón está en contacto de una manera operativa con una tira de ensayo.

Figura 4, muestra un kit de prueba, que comprende un dispositivo de análisis de muestras de acuerdo con las Figuras 1 y 2 y un escobillón de acuerdo con la Figura 3.

Descripción detallada de las modalidades preferidas

La invención proporciona un método sensible y rápido, para la detección de blancos por ejemplo, patógenos y/o componentes asociados con la alergia, en muestras recolectadas por medios no-invasivos, de un fluido ocular. Los patógenos se seleccionan de virus, microorganismos, por ejemplo bacterias y parásitos, por ejemplo amebas o nemátodos. Los componentes asociados a una alergia se seleccionan de componentes anti-alergénicos y alérgenos. La detección comprende, la detección directa del blanco, por ejemplo del patógeno y/o la detección de anticuerpos contra el blanco, por ejemplo el patógeno que está presente en la muestra del fluido que será analizado. Preferiblemente, el método comprende una determinación en paralelo de una pluralidad de blancos.

El fluido corporal, es un fluido ocular de una superficie corporal seleccionada de fluidos de membrana de mucosa (de las cavidades oculares) o lagrimas. Una ventaja significante del método es que los resultados se proporcionan dentro del periodo de consulta médica, por ejemplo en pocos minutos. Preferiblemente, los resultados se proporcionan en un periodo de tiempo de hasta 20 minutos, más preferiblemente hasta 15 minutos. También, como la prueba no es invasiva, presume muy poco riesgo para el paciente. Por lo tanto, el mejor tratamiento disponible, se puede aplicar en forma oportuna, para un patógeno específico. Otra ventaja sobre métodos de oficios previos, es que solamente unos pocos mililitros de muestra se necesitan para realizar...

1. Un método para la detección de un blanco, el cual se selecciona de patógenos y/o componentes asociados a una alergia en un fluido ocular que comprende las etapas:

(a) recolectar, de manera no-invasiva, una muestra de fluido ocular de 0.1-100 µl con un escobillón,

(b) transferir directamente la muestra del escobillón a una zona de detección en un dispositivo de análisis de muestras sin pre-tratamiento de la muestra en el escobillón, y

(c) análisis de la muestra.

2. El método de la reivindicación 1, en donde el patógeno se selecciona de virus, microorganismos y parásitos.

3. El método de la reivindicación 2, en donde el patógeno se selecciona del grupo que consiste de adenovirus, virus del herpes, chlamydiae, citomegalovirus, pseudomonas, estreptococo, haemophilus, estafilococos, ameba y combinaciones de estos.

4. El método de la reivindicación 1, en donde el componente asociado a la alergia se selecciona de alérgenos y antialergenos.

5. El método de la reivindicación 1, en donde el blanco es un patógeno el cual es un agente causal de la conjuntivitis o una pluralidad de dichos agentes causales.

6. El método de la reivindicación 1, en donde el blanco es un componente asociado con la alergia, el cual es un agente causal o un mediador de la conjuntivitis o una pluralidad de dichos agentes causales y/o mediadores.

7. El método de la reivindicación 1, en donde el blanco comprende al menos un patógeno y al menos un componente asociado a la alergia.

8. El método de la reivindicación 1, en donde la muestra es aproximadamente 0.2 µl a aproximadamente 20 µl.

9. El método de la reivindicación 8, en donde la muestra es aproximadamente 0.5 µl a aproximadamente 10 µl.

10. El método de la reivindicación 1, en donde la etapa de recolección (a) comprende el barrido o frotamiento del escobillón sobre una superficie del cuerpo que contiene el fluido ocular que será analizado.

11. El método de la reivindicación 1, en donde el escobillón es estéril.

12. El método de la reivindicación 1, en donde el escobillón es una parte separada del dispositivo de análisis de muestras y la etapa de transferencia (b) comprende el contacto del dispositivo de análisis de muestras con el escobillón, bajo condiciones en donde al menos una parte de la muestra en el escobillón se transfiere al dispositivo de análisis de muestras.

13. El método de la reivindicación 1, en donde el escobillón es una parte integrada del dispositivo de análisis de muestras y la etapa de transferencia (b) comprende pasar al menos una parte de la muestra en el escobillón a la zona de detección en el dispositivo de análisis de muestras.

14. El método de la reivindicación 1, en donde la etapa de transferencia (b) comprende fijar el escobillón en una posición de contacto con el dispositivo de análisis de muestras.

15. El método de la reivindicación 1, en donde la etapa de transferencia (b) comprende una elución de la muestra a partir del escobillón con un medio de elución, por ejemplo, una solución reguladora o agua.

16. El método de la reivindicación 15, en donde el medio de elución se adiciona de una fuente externa o se proporciona dentro del dispositivo de análisis.

17. El método de la reivindicación 1, en donde el dispositivo de análisis de muestras comprende una tira de ensayo cromatográfica.

18. El método de la reivindicación 1, en donde el dispositivo de análisis de muestras comprende:

(i) una zona de aplicación de la muestra,

(ii) una zona de detección,

(iii) opcionalmente una zona de residuos y

(iv) opcionalmente un soporte.

19. El método de la reivindicación 18, en donde el dispositivo de análisis de muestras además comprende al menos uno de:

(v) un alojamiento, y

(vi) un orificio para leer los resultados.

20. El método de la reivindicación 1, en donde la etapa de análisis (c) comprende una detección inmunológica o enzimática.

21. Un método para diagnosticar la conjuntivitis, que comprende las etapas:

(a) recolectar, de manera no-invasiva, una muestra de fluido ocular de 0.1-100 µl con un escobillón,

(b) transferir la muestra del escobillón a una zona de detección en un dispositivo de análisis de muestras sin un pre-tratamiento de la muestra en el escobillón, y

(c) análisis de la muestra para la presencia de un patógeno, el cual es un agente causal de la conjuntivitis o una pluralidad de dichos agentes causales.

22. El método de la reivindicación 21, en donde la muestra se analiza para la presencia de un patógeno seleccionado del grupo, que consiste de adenovirus, virus del herpes, chlamydiae, citomegalovirus, amebas y combinaciones de estos.

23. El método de la reivindicación 21, en donde la muestra se analiza para la presencia de un componente asociado a la alergia, el cual es un agente causal o un mediador de la conjuntivitis o una pluralidad de dichos agentes causales y/o mediadores.

24. El método de la reivindicación 21, en donde la muestra se analiza para la presencia de un patógeno, el cual es un agente causal de la conjuntivitis o una pluralidad de dichos agentes causales y al menos un componente asociado a la alergia, el cual es un agente causal o un mediador de la conjuntivitis o una pluralidad de dichos agentes causales y/o mediadores.

25. Uso de un kit de prueba, en un método de acuerdo con las reivindicaciones 1-24, en donde el kit de prueba comprende

(a) un escobillón para recolectar, de manera no-invasiva, una muestra de fluido ocular para la transferencia directa del escobillón a una zona de detección de un dispositivo de análisis de muestras sin pre-tratamiento,

(b) un dispositivo de análisis de muestras que comprende una zona de detección, en donde la zona de detección contiene reactivos para determinar la presencia y/o cantidad de al menos un blanco, el cual se selecciona a partir de patógenos y/o componentes asociados con la alergia, en donde el patógeno es un agente causal de la conjuntivitis o una pluralidad de dichos agentes causales y en donde un componente asociado a la alergia, es un agente causal o un mediador de la conjuntivitis o una pluralidad de dichos agentes causales y/o mediadores.

26. El uso de la reivindicación 25, en donde el patógeno se selecciona del grupo que consiste de adenovirus, virus del herpes, chlamydiae, citomegalovirus, estreptococo, pseudomonas, estafilococos, haemophilas, ameba y combinaciones de estos.

27. El uso de la reivindicación 26, en donde el componente asociado con la alergia se selecciona de los grupos de alérgenos o antialergenos.