MÉTODO PARA DETERMINAR UN ANALITO EN UNA MUESTRA LÍQUIDA Y DISPOSITIVO DE ANÁLISIS.

Método para determinar un analito en una muestra líquida, sobre todo de líquido corporal,

mediante un dispositivo de análisis en que -un equipo de valoración incluido en el dispositivo de análisis capta una primera señal de medición si (i = 0, 1, ...) y una segunda señal de medición sj (j = 1, 2, ...; j > i) de un sistema de ensayo formado por varias zonas de medición sucesivas que pueden ser atravesadas por una muestra líquida con un analito, una vez depositada sobre el sistema de ensayo, de modo que la primera señal de medición si indica la fijación de una parte del analito a una primera zona de medición y la segunda señal de medición sj la fijación de una parte del analito a una segunda zona de medición situada tras la primera en el sistema de ensayo, después de depositar en él la muestra líquida, y -a partir del equipo de evaluación se calcula un grado de concentración N, correlacionado con la concentración del analito en la muestra líquida, y se emite según un tratamiento posterior facultativo, caracterizado porque el grado de concentración N se calcula según la siguiente relación entre las señales medidas: **(Ver fórmula)**25

La presente invención se refiere a un método para determinar un analito en una muestra líquida, especialmente en una muestra de un líquido corporal, así como a un dispositivo de análisis y a un programa informático.

Antecedentes de la presente invención

Este tipo de métodos y dispositivos sirve para detectar analíticamente uno o varios analitos en una muestra líquida. De modo complementario o alternativo, la determinación de un analito en la muestra de líquido corporal, aparte de la detección básica del analito en sí, también puede comprender la medición de propiedades específicas del analito en dicha muestra. Para ello la muestra líquida analizada se coloca en un sistema o elemento de ensayo provisto de varias zonas de detección, también llamadas zonas de medición o análisis. En tal caso la muestra líquida depositada se mueve a la largo de una línea recta, por ejemplo, sobre la cual se han dispuesto varias zonas de medición o detección. En las zonas de medición, que pueden tener forma circular, rectangular o lineal, hay estructuras de captación específicas del analito que permiten fijar en las respectivas zonas de medición una parte del analito contenido en la muestra líquida.

Normalmente el o los analitos van marcados directamente

o mediante anticuerpos y por tanto están preparados para una subsecuente valoración óptica del sistema de ensayo. Dado el

caso, la preparación del sistema o elemento de ensayo también puede incluir el barrido o lavado con una solución tampón, de dilución o de lavado. Por último el sistema de ensayo, que es por ejemplo un componente químico seco, se puede valorar por exploración óptica, a fin de detectar la presencia de uno o más analitos determinados en las zonas de medición.

En la exploración óptica, también conocida como escaneo óptico, se capta mediante un dispositivo detector la radiación lumínica procedente de las zonas de medición exploradas. La radiación lumínica de medición se puede generar irradiando con luz proveniente de una fuente monocromática o policromática apropiada las zonas analíticas cargadas con sustancias ópticamente activas. En dichas zonas la luz incidente interactúa con las sustancias ópticamente activas y con la respectiva variación de sus características ópticas da lugar a la luz reflejada que mide el aparato. Las propiedades ópticas que se pueden examinar al irradiar con la luz del ensayo son la absorción, la transmisión, la reflexión o incluso la fluorescencia. La radiación medida también puede ser debida a una luminiscencia de las sustancias ópticamente activas en las zonas analíticas.

En la exploración óptica del elemento/sistema de ensayo dicho elemento y el detector que capta la radiación medida, o bien el elemento de ensayo y la fuente lumínica, se pueden desplazar uno respecto al otro para analizar ópticamente y de manera sucesiva las zonas de medición.

Con la ayuda de métodos ópticos de medición tales como absorción, fluorescencia, transmisión o reflexión se analizan

ópticamente las zonas de medición para detectar la fijación del analito a la zona correspondiente. En tal caso la luz de ensayo incidente interactúa en la zona de medición con marcadores ópticos unidos a las estructuras de captación específicas del analito, generando una radiación lumínica que se mide con la ayuda de un aparato detector. Como aparatos de detección óptica sirven, por ejemplo, un fotodiodo o una serie de ellos. Las señales correspondientes a la radiación lumínica medida sirven, por ejemplo, para determinar una concentración u otras características del analito en la muestra de líquido corporal.

La radiación lumínica registrada depende normalmente de la eficiencia con que un complejo del analito se fija en las estructuras de captación de la zona de medición o detección al pasar por ella. A su vez la eficiencia de la unión depende generalmente de diversas propiedades, como la clase de substrato (membrana) utilizado para la zona medición, la muestra líquida individual, las estructuras de captación específicas del analito o la temperatura. Por tanto la eficiencia de la unión difiere mucho según las diversas condiciones de medición o análisis, lo cual significa que las variaciones en la eficiencia de fijación influyen directamente en el resultado del análisis.

El documento EP 0 690 306 A1 describe un método y un dispositivo para analizar fijaciones específicas. Basándose en una reacción de fijación específica, un generador de sustancias señalizadoras produce una sustancia señalizadora que

junto con una muestra líquida fluye en una cierta dirección a

través de un canal. La sustancia señalizadora se analiza con diversos medios de detección en diferentes posiciones de la dirección de flujo.

El documento J. J. Holbrook “Protein Fluorescence of Lactate Dehydrogenase” [“Fluorescencia proteica de la lactato deshidrogenasa”] (Biochem. J. vol. 128, p. 921 (1972)) describe un descenso no lineal de la fluorescencia proteica de la lactato deshidrogenasa con un aumento de la proporción de sitios de fijación del coenzima ocupados con NADH (nicotinaamida adenina dinucleótido). La fluorescencia proteica relativa de moléculas con j ligandos forma una serie geométrica.

Resumen de la presente invención

La presente invención tiene por objeto proporcionar un método para determinar un analito en una muestra líquida, así como un dispositivo de análisis que permita mejorar el examen del analito.

Este objetivo se resuelve, según la presente invención, mediante un método para determinar un analito en una muestra líquida, sobre todo en una muestra de líquido corporal, según la reivindicación independiente 1, y mediante un dispositivo de análisis, según la reivindicación independiente 4. Además se crea un programa informático en un dispositivo de evaluación para determinar un analito en una muestra líquida, según la reivindicación independiente 10. Las formas de ejecución ventajosas de la presente invención son objeto de las reivindicaciones dependientes.

La presente invención incluye la idea de un método para

determinar un analito en una muestra líquida, sobre todo en

una muestra de líquido corporal, con un dispositivo de análisis que, mediante un equipo de evaluación, capta una primera señal de medición si (i = 0, 1, ...) y una segunda señal de medición sj (j = 1, 2, ...; j > i) para un sistema de ensayo 5 formado por varias zonas de medición sucesivas que pueden ser atravesadas por una muestra líquida con un analito, una vez depositada sobre el sistema de ensayo. La primera señal de medición si indica la fijación de una parte del analito a una primera zona de medición y la segunda señal de medición sj la 10 fijación de una parte del analito a una segunda zona de medición situada tras la primera en el sistema de ensayo, después de depositar en él la muestra líquida. A partir de dichas señales el equipo de evaluación calcula un grado de concentración N, correlacionado con la concentración del analito en la 15 muestra líquida, según la siguiente relación con las señales

medidas:

**(Ver fórmula)**

y emite el grado de concentración N según un tratamiento posterior facultativo.

20 Según otro aspecto de la presente invención se establece un dispositivo de análisis para determinar un analito en una muestra líquida, particularmente en una muestra de líquido corporal, con un equipo de evaluación configurado para recibir una primera señal de medición si (i = 0, 1, ...) y una

25 segunda señal de medición sj (j = 1, 2, ...; j > i) para un

sistema de ensayo formado por varias zonas de medición suce

sivas que pueden ser atravesadas por una muestra líquida con un analito, una vez depositada sobre el sistema de ensayo, de manera que la primera señal de medición si indica la fijación de una parte del analito a una primera zona de medición y la 5 segunda señal de medición sj la fijación de una parte del analito a una segunda zona de medición dispuesta tras la primera en el sistema de ensayo, después de depositar en él la muestra líquida, y de manera que el equipo de evaluación también está configurado para calcular y emitir un grado de concentración N, correlacionado con la concentración del analito en la muestra líquida, según la siguiente relación con...

1. Método para determinar un analito en una muestra líquida, sobre todo de líquido corporal, mediante un dispositivo de análisis en que -un equipo de valoración incluido en el dispositivo de análisis capta una primera señal de medición si (i = 0, 1, ...) y una segunda señal de medición sj (j = 1, 2, ...; j > i) de un sistema de ensayo formado por varias zonas de medición sucesivas que pueden ser atravesadas por una muestra líquida con un analito, una vez depositada sobre el sistema de ensayo, de modo que la primera señal de medición si indica la fijación de una parte del analito a una primera zona de medición y la segunda señal de medición sj la fijación de una parte del analito a una segunda zona de medición situada tras la primera en el sistema de ensayo, después de depositar en él la muestra líquida, y -a partir del equipo de evaluación se calcula un grado de concentración N, correlacionado con la concentración del analito en la muestra líquida, y se emite según un

tratamiento posterior facultativo, caracterizado porque el grado de concentración N se calcula según la siguiente relación entre las señales medidas:

**(Ver fórmula)**

25 2. Método según la reivindicación 1, caracterizado porque

como primera señal de medición se registra una primera señal

óptica y como segunda señal de medición se registra una segunda señal óptica.

3. Método según la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque la primera y la segunda zona analítica son zonas contiguas del sistema de ensayo, de manera que j = i+1, y el grado de concentración N es calculado por el equipo de valoración según la siguiente relación simplificada entre las señales medidas:

**(Ver fórmula)**

10 4. Dispositivo de análisis para determinar un analito en una muestra líquida, sobre todo de líquido corporal, con un equipo de valoración configurado para registrar una primera señal de medición si (i = 0, 1, ...) y una segunda señal de medición sj (j = 1, 2, ...; j > i) de un sistema de ensayo formado por varias zonas de medición sucesivas que pueden ser atravesadas por una muestra líquida con un analito, una vez depositada sobre el sistema de ensayo, de modo que la primera señal de medición si indica la fijación de una parte del analito a una primera zona de medición y la segunda señal de medición sj la fijación de una parte del analito a una segunda zona de medición situada tras la primera en el sistema de ensayo, después de depositar en él la muestra líquida, y también configurado para calcular y emitir un grado de concentración N, correlacionado con la concentración del analito en la muestra líquida, caracterizado porque el equipo de valoración está configurado para calcular el grado de concentración N según la siguiente relación entre las señales medidas:

**(Ver fórmula)**

5. Dispositivo de análisis según la reivindicación 4, caracterizado porque el equipo de valoración también está configurado para captar una primera señal óptica como la primera señal de medición y una segunda señal óptica como la segunda señal de medición.

6. Dispositivo de análisis según la reivindicación 4 o 5, caracterizado porque el equipo de valoración también está configurado para calcular el grado de concentración N según la siguiente relación simplificada entre las señales medidas:

**(Ver fórmula)**

cuando la primera y la segunda zona analítica son zonas contiguas del sistema de ensayo, de manera que j = i+1.

7. Dispositivo de análisis según al menos una de las reivindicaciones 4 a 6, caracterizado porque lleva un detector configurado para registrar la primera y la segunda señal de medición y emitirlas al equipo de valoración.

8. Dispositivo de análisis según la reivindicación 7, caracterizado porque el detector es una unidad óptica configurada para registrar la primera y la segunda señal óptica de medición según un tipo de señal escogido del siguiente grupo: fluorescencia, transmisión, absorción y reflexión.

9. Dispositivo de análisis según al menos una de las reivindicaciones 4 a 8, caracterizado porque lleva un sistema de ensayo integrado.

10. Programa informático para determinar un analito de una muestra líquida, sobre todo de líquido corporal, en un equipo de valoración, que incluye los siguientes medios:

- medios grabados en una memoria electrónica para recibir una primera señal de medición si (i = 0, 1, ...) y una segunda señal de medición sj (j = 1, 2, ...; j > i) de un sistema de ensayo constituido por varias zonas de medición sucesivas que pueden ser atravesadas por una muestra líquida con un analito, una vez depositada sobre el sistema de ensayo, de modo que la primera señal de medición si indica la fijación de una parte del analito a una primera zona de medición y la segunda señal de medición sj la fijación de una parte del analito a una segunda zona de medición situada tras la primera en el sistema de ensayo, después de depositar en él la muestra líquida, -medios grabados en la memoria electrónica para calcular un grado de concentración N, correlacionado con la concentración del analito en la muestra líquida, y -medios grabados en la memoria electrónica para emitir el grado de concentración N según un tratamiento posterior facultativo,

caracterizado porque los medios grabados en la memoria electrónica para el cálculo del grado de concentración N están configurados para determinarlo según la siguiente relación entre las señales medidas: