METODO DE DETERMINACION DE LA LIPOFILIA.

Un método para determinar la lipofilia de un compuesto de interés que comprende

a) proporcionar una capa unida al fondo de un tubo,

b) proporcionar un solvente A y un solvente B, en el que el solvente A es no polar y el solvente B es polar, o el solvente A es polar y el solvente B es no polar

c) impregnar dicha capa con un solvente A, en el que el solvente A está unido a la capa y no se fuga en el solvente B,

d) aplicar un compuesto de interés en la capa impregnada,

e) añadir el solvente B en una placa e insertar el tubo en la placa de forma que la capa impregnada con el solvente A esté en contacto con el solvente B,

f) eliminar el solvente B tras alcanzar el equilibrio de distribución, y

g) determinar la cantidad del compuesto de interés en al menos una de las fases del solvente

Método de determinación de la lipofilia.

La presente invención proporciona un método para la determinación de valores de lipofilia altos, medios y bajos.

La lipofilia es una propiedad molecular importante en la investigación de fármacos. El conocimiento exacto de la lipofilia del fármaco es útil para la correlación con los procedimientos farmacéuticos como la permeabilidad de membrana, solubilidad, volumen de distribución, estabilidad metabólica y unión de proteínas. La lipofilia se expresa mediante log P (coeficiente de partición octanol-agua para especies neutrales) o log D (coeficiente de distribución octanol-agua para moléculas cargadas).

Normalmente, la lipofilia viene determinada por el método convencional de frasco agitado (M.M. Abraham, H.S. Chadha, J.P.Dixon, y A.J. Leo. Puentes de hidrógeno. Parte 9. La partición de solutos entre el agua y varios alcoholes. Phys. Org. Chem. 7:712-716 (1994). Cuando se realiza manualmente, este método es muy costoso en tiempo (sólo 2-5 compuestos por día). No obstante, el número de compuestos producidos en el descubrimiento de fármacos aumenta drásticamente gracias a la síntesis rápida de análogos y a la química combinatoria. Esta situación requiere de un método rápido y eficiente para determinar la lipofilia de los compuestos.

Además, los métodos anteriores de la técnica no funcionan con compuestos de baja solubilidad. Desde el año 2002 alrededor del 35% de las mediciones log D fallaron debido a la precipitación de compuestos en la solución de referencia o a concentraciones bajas de la muestra en la fase acuosa (fuente: RODIN y base de datos SPC, 2004). Por otro lado, existe una necesidad para las mediciones de alto rendimiento de log D > 4, especialmente para los fármacos diana en los que son necesarios una alta lipofilia.

La WO 2005/095950 (estado anterior de la técnica de acuerdo al Art. 54(3) EPC) describe un método para evaluar una composición farmacéutica que comprenden un fármaco. Este método comprende proporcionar una membrana microporosa con una serie de poros. Dicha membrana posee un lado de alimentación y un lado del permeado. Dicho lado de alimentación es hidrofílico y en comunicación fluida con una solución de alimentación acuosa y dicho lado del permeado está en comunicación fluida con una solución permeada (fluido orgánico). La composición farmacéutica que contiene el fármaco se administra en la solución acuosa y la concentración de dicho fármaco se mide en la solución permeada.

Por lo tanto, existe una necesidad para un método que sea rápido y que permite la determinación de lipofilia de compuestos de baja solubilidad.

La presente invención está relacionada con un método para determinar la lipofilia de un compuesto de interés que comprende:

a) proporcionar una capa unida al fondo de un tubo,

b) proporcionar un solvente A y un solvente B en el que el solvente A es no polar y el solvente B es polar, o el solvente A es polar y el solvente B es no polar

c) impregnar dicha capa con un solvente A, en el que el solvente A está unido a la capa y no se fuga en el solvente B,

d) aplicar un compuesto de interés en la capa impregnada,

e) añadir el solvente B en una placa e insertar el tubo en la placa de forma que la capa impregnada con el solvente A esté en contacto con el solvente B,

f) eliminar el solvente B tras alcanzar el equilibrio de distribución, y

g) determinar la cantidad del compuesto de interés en al menos una de las fases del solvente. Preferiblemente, la cantidad de compuesto de interés se determina en la fase de solvente pegada a la capa.

El compuesto de interés puede ser cualquier compuesto químico o biológico. El compuesto de interés puede ser por ejemplo un compuesto orgánico, una proteína, un péptido o un ácido nucleico. Un compuesto orgánico puede incluir también moléculas orgánicas-inorgánicas. El término molécula orgánica-inorgánica tal como se utiliza aquí se refiere a una molécula orgánica en la que al menos un átomo inorgánico está unido a un átomo de carbono. Un átomo inorgánico puede ser por ejemplo un átomo metálico como por ejemplo, silicio (Si) o germanio (organometálicos, es decir, bioisoéster de Si o Ge de moléculas orgánicas).

El compuesto de interés puede ser sólido o líquido. El compuesto de interés puede disolverse en un solvente adecuado como por ejemplo DMSO (dimetilsulfóxido). El compuesto de interés puede ser un compuesto lipofílico o un compuesto hidrofílico. Un solvente adecuado para un compuesto hidrofílico es preferiblemente un solvente polar; un solvente adecuado para un compuesto lipofílico es preferiblemente un solvente no polar.

El término "capa" tal como se utiliza aquí se refiere a un transportador para un solvente, en el que la capa es capaz de absorber completamente el solvente. El término "completamente absorbido" significa que el solvente aplicado a la capa (es decir, el Solvente A) está unido a la capa y no se traspasará a la otra fase (es decir, el Solvente B).

La capa posee huecos. Estos huecos pueden ser poros, cavidades, agujeros o ranuras. Los huecos pueden estar formados por el material transportador, como en el caso de las fibras que forman una malla. Los huecos pueden también crearse por ejemplo al penetrar la capa con iones. Preferiblemente, la capa es permeable.

La capa puede ser por ejemplo una malla o una membrana (por ejemplo, membrana de señal clara Westran (Whatman), Immobilon-P PVDF (Millipore), PVDF-Plus, membrana de transferencia (Koma Biotech)). Preferiblemente, la capa es una membrana. Si el solvente es no polar el material transportador es preferiblemente hidrofóbico como por ejemplo fluoruro de polivinilideno (PVDF), politetrafluoretileno (PTFE), copolímero de olefina cíclica (COC), polipropileno (PP) o policarbonato (PC). Si el solvente es polar el material transportador es preferiblemente lipofílico como por ejemplo acetato de celulosa, fibras de vidrio, fluoruro de polivinilideno hidrofílico (PVDF), policarbonato hidrofilizado y otro material de filtro hidrofilizado.

El solvente A puede ser un solvente no polar o polar. El solvente B puede ser un solvente no polar o polar. El solvente A es inmiscible o difícilmente miscible con el solvente B. Si el solvente A es un solvente no polar, el solvente B es un solvente polar, si el solvente A es un solvente polar, el solvente B es un solvente no polar.

El término "solvente no polar" tal como se utiliza aquí se refiere a un solvente hidrofóbico. Los solventes no polares son inmiscibles, o difícilmente miscibles con los solventes polares como por ejemplo el agua. Un compuesto lipofílico tiene la tendencia natural de ser más soluble en un solvente no polar que en un solvente polar. La constante dieléctrica de un solvente no polar es normalmente inferior a la del agua. Ejemplos de un solvente hidrofóbico son los solventes orgánicos como por ejemplo octanol o hidrocarburos alifáticos (dodecano, hexadecano o hidrocarburos halogenizados).

El término "solvente hidrofílico" o "solvente polar" tal como se utiliza aquí se refiere a un solvente que posee moléculas cuyas cargas eléctricas no están distribuidas equitativamente y están por lo tanto cargadas electrónicamente. Los solventes polares son inmiscibles o difícilmente miscibles con los solventes no polares o hidrofóbicos. Los compuestos polares o ionizables tienen la tendencia a ser más solubles en solventes polares. El solvente polar puede ser por ejemplo una solución de tampón hidrofílico que puede consistir de una sal tamponada (es decir, soluciones acuosas de fosfato o sales TAPSO tamponadas a pH 7,4) en agua con alta capacidad de tamponamiento dentro del rango de pH de interés. El pH de interés puede estar en el rango entre pH 0 y 14, preferiblemente el pH es alrededor de 7,4.

El término "equilibrio de distribución" tal como se utiliza aquí se refiere al equilibrio de distribución entre el solvente polar y el solvente no polar para los compuestos de interés tras un tiempo específico. Preferiblemente, los equilibrios de distribución se alcanzan entre 0,1-24 h., más preferiblemente se alcanzan a las 2 h.

La capa puede impregnarse aplicando el solvente a la capa mientras la capa sea capaz de absorbes el solvente por completo. El solvente puede aplicarse, por ejemplo, con un dispensador. Otros métodos con conocidos en la técnica como por ejemplo un sistema de manejo de líquidos robotizado, que permite dispensar entre...

1. Un método para determinar la lipofilia de un compuesto de interés que comprende

2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 en el que la cantidad del compuesto de interés se determina en la ase del solvente que se adhiere a la capa.

3. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 o 2 en el que la capa es una capa hidrofóbica.

4. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 o 2 el que la capa es una capa hidrofílica.

5. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que el solvente no polar es octanol.

6. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en el que la capa es una membrana.