MEDICAMENTOS QUE COMPRENDEN UN INHIBIDOR DE LAS ALFA-MANOSIDASAS DE CLASE I PARA EL TRATAMIENTO DE SARCOGLICANOPATIAS.

Uso de un inhibidor de las & alpha ;-manosidasas de clase I para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de las sarcoglicanopatías

Medicamentos que comprenden un inhibidor de las -manosidasas a clase I para el tratamiento de sarcoglicanopatías. Campo técnico La presente invención se refiere al tratamiento de las sarcoglicanopatías. La invención preconiza el uso de inhibidores de la manosidasa I, como medicamentos para el tratamiento de ciertas formas de estas enfermedades. Estado anterior de la técnica Las sarcoglicanopatías son unas enfermedades musculares del grupo de las miopatías de cinturas (Limb Girdle Muscular Dystrophy o LGMD) y se transmiten en el modo autosómico recesivo. Se han identificado cuatro formas (LGMD 2C, LGMD 2D, LGMD 2E, LGMD 2F), debidas respectivamente a unos defectos en los genes de los -, -, ß- y -sarcoglicanos (11, 17). La LGMD 2C está particularmente extendida en la cuenca mediterránea y en las poblaciones gitanas que residen en Europa. La LGMD 2D ha sido identificada en el mundo en pacientes en Europa, África, Japón y Brasil. La LGMD 2E se ha encontrado particularmente en la comunidad amish y en el Magreb. La LGMD 2F se ha descrito hasta ahora sólo en 7 familias de origen brasileño, turco e italiano. Las sarcoglicanopatías se traducen por una deficiencia progresiva de los músculos de las cinturas pelvianas y escapulares asociada frecuentemente a una hipertrofia de las pantorrillas. El intelecto está todavía conservado. Una afección cardiaca de tipo cardiomiopatía se encuentra a veces en las LGMD 2C, LGMD 2E y LGMD 2F. A nivel histológico, los músculos presentan unas zonas de regeneración y de degeneración, unos infiltrados inflamatorios, fibrosis y una variabilidad del tamaño de las fibras. Las sarcoglicanopatías presentan una severidad variable, incluso en el seno de las descendencias. En las formas más graves, los pacientes pierden el andar antes de los 30 años y tienen una esperanza de vida reducida. Dos de las sarcoglicanopatías presentan unas mutaciones recurrentes. Para la LGMD 2C, la mutación del521T se encuentra frecuentemente en las poblaciones magrebíes, y la mutación C283Y en las poblaciones gitanas (4, 13). La mutación más frecuente presente en la LGMD 2D corresponde a una sustitución de la arginina en posición 77 por una cisteína (R77C). Esta mutación se encuentra en una tercera parte de los pacientes en Europa con la excepción de Finlandia en la que se encuentra en el 100% de los pacientes la mayoría de las veces en los dos alelos (5, 9). Los sarcoglicanos (SG) constituyen un grupo de glicoproteínas integradas en la membrana plásmica y que participan en el complejo asociado a la distrofina (12). Este complejo participa en la unión entre el citoesqueleto de actina y la matriz extracelular y, por consiguiente, en la estabilidad de la membrana de la fibra muscular (10). Los sarcoglicanos están compuestos por un pequeño dominio intracelular localizado en C-terminal (-sarcoglicano) o en N-terminal (-, ß- y -sarcoglicanos), un dominio transmembranario único y un amplio dominio extracelular que contiene unos sitios de N-glicosilación. El complejo de los sarcoglicanos se forma durante el tránsito de estas proteínas en el retículo sarcoplásmico y el aparato de Golgi (6, 16). El ß-sarcoglicano sirve de iniciador para la formación del complejo. Su asociación con el sarcoglicano posiciona el complejo en la membrana. Por último, la incorporación del -sarcoglicano y su interacción con el -sarcoglicano termina el ensamblaje. Unas mutaciones en cualquiera de los sarcoglicanos pueden impedir que el complejo se forme, provocando una deficiencia secundaria de los demás sarcoglicanos. Aunque en la actualidad se sabe diagnosticar las sarcoglicanopatías, e incluso identificar la componente mutada responsable del fenotipo (-, -, ß- o -sarcoglicano), así como la mutación en cuestión, los medios para ocuparse de esta enfermedad siguen siendo modestos. En la actualidad, no se conoce ningún tratamiento específico y la mayoría de los pacientes necesitan una quinesiterapia para prevenir la agravación de las contracturas. Sin embargo, varios equipos han aportado unos resultados positivos a nivel experimental mediante unos enfoques de transferencia de gen con la ayuda de vectores víricos o de terapia celular en unos modelos animales (1, 7, 14). Así, el documento WO 00/20582 preconiza una terapia mediante la sustitución de los genes de sarcoglicanos defectuosos, vehiculados en particular por unos AAV. Se ha propuesto asimismo, en la técnica anterior, un enfoque general de inhibición del proteasoma para el tratamiento de las patologías musculares, en particular de las distrofias musculares. Sin embargo, esta estrategia poco específica parece poco eficaz y plantea unos problemas de tolerancia. 2 ES 2 335 623 T3 Existe por lo tanto una necesidad crucial de desarrollar nuevas terapias, en particular medicamentosas, que permitan tratar específica y eficazmente las sarcoglicanopatías. Objeto de la invención La presente invención se basa en la demostración por los inventores de que: - ciertas mutaciones en los sarcoglicanos, asociadas a una sarcoglicanopatías, dan lugar a unas glicoproteínas que presentan un mal replegado; - estas proteínas plegadas erróneamente son asumidas por la vía de la degradación proteolítica de las glicoproteínas asociada al retículo endoplásmico; - unos inhibidores de esta vía bloquean la degradación de los sarcoglicanos mutados; - cuando no están degradados (en presencia de inhibidores), los sarcoglicanos mutados pueden ser correctamente translocados a la membrana plásmica e integrados en el complejo de sarcoglicanos, lo que se traduce por la restauración de un fenotipo normal. Para recordar, las glicosidasas del retículo endoplásmico (RE) desempeñan una función en el control de la calidad de la producción de las glicoproteínas. Aseguran que únicamente las replegadas correctamente son transportadas hacía su destino final. En particular, la escisión de los residuos manosa en el RE por las -manosidasas actúa como una señal para dirigir las glicoproteínas mal replegadas hacía una degradación por el proteasoma. Las -manosidasas se clasifican en dos grupos. Las de clase I (manosidasa I) son inhibidas por la 1-desoximanojirimicina y la kifunensina, mientras que las de la clase II son específicamente inhibidas por la swainsonina. En cuanto al proteasoma, éste es un complejo proteico implicado en la degradación de las proteínas intracelulares en el citosol y se puede inhibir por ejemplo mediante MG132 o el bortezomib. A priori, se puede usar cualquier inhibidor de esta vía de degradación (ERAD en inglés para Endoplasmic reticulum-associated degradation). Sin embargo, la presente invención se ha centrado en los inhibidores de la manosidasa I que resultan ser de una gran selectividad en su modo de acción y de una eficacia remarcable para el tratamiento de las sarcoglicanopatías. Clínicamente, esto se traduce en particular por unos efectos secundarios potencialmente menores. Por consiguiente, la invención se refiere al uso de inhibidores de las -manosidasas de clase I para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de las sarcoglicanopatías. Aparece claramente, en el contexto de la invención, que se prevé el uso de por lo menos un inhibidor de la manosidasa I. Evidentemente, no se excluye usar un cóctel de inhibidores, a saber, varios inhibidores de naturaleza diferente, que tienen unas actividades inhibidoras complementarias, en particular en términos de actividad/selectividad. Se prefieren muy particularmente la kifunensina (CAS 109944-15-2) y la 1-desoximanojirimicina (CAS 84444- 90-6), moléculas conocidas por ser unos inhibidores de la manosidasa I. Sin embargo, la invención no se limitará a estas moléculas. En efecto, cualquier molécula candidata se puede ensayar para su actividad inhibidora de la manosidasa I, gracias a la realización de un ensayo enzimático simple. Así, en la medida en la que se buscan soluciones terapéuticas para las sarcoglicanopatías humanas, la enzima ensayada es ventajosamente una alfa-manosidasa de clase I de origen humano, en particular la referenciada en las bases de dato con el número (Accession Number): NP_005898 (mannosidase, alpha, class 1A, member 1 [Homo sapiens]). Un ensayo enzimático adaptado para ensayar dichos inhibidores se describe, por ejemplo en la publicación J. Biol Chem. 8 de octubre de 2004; 279(41):42638-47. Epub 22 de julio de 2004. The twisted abdomen phenotype of Drosophila POMT1 and POMT2 mutants coincides with their heterophilic protein O-mannosyltransferase activity, Ichimiya T, Manya H, Ohmae Y, Yoshida H, Takahashi K, Ueda R, Endo T, Nishihara S. El modo de administración, la dosis administrada, así como la frecuencia de administración se determinan caso por caso, según unos protocolos habituales, conocidos por el experto en la materia. En efecto, estos parámetros pueden depender en particular de la mutación a tratar y del...

1. Uso de un inhibidor de las -manosidasas de clase I para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de las sarcoglicanopatías. 2. Uso de un inhibidor según la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor es una molécula que posee una actividad inhibidora de las -manosidasas de clase I. 3. Uso de un inhibidor según la reivindicación 2, caracterizado porque el compuesto es la kifunensina o 1-desoximanojirimicina, ventajosamente la kifunensina. 4. Uso de un inhibidor según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la sarcoglicanopatía está relacionada con la mutación R77C en el -sarcoglicano humano. 5. Uso de un inhibidor según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la sarcoglicanopatía está relacionada con la mutación E262K en el -sarcoglicano humano. 6. Uso de un inhibidor según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la sarcoglicanopatía está relacionada con la mutación Q11E en el ß-sarcoglicano humano. 7. Procedimiento de evaluación in vitro de la eficacia de un inhibidor de las -manosidasas de clase I sobre las sarcoglicanopatías, que comprende las siguientes etapas: - co-transfectar en unas células los cuatro genes que codifican los sarcoglicanos (-, -, ß- o -), siendo uno de los genes portador de la mutación; - incubar durante varias horas en presencia de un inhibidor tal como se define en una de las reivindicaciones 1 a 3; - localizar el complejo de los sarcoglicanos. 8. Procedimiento de evaluación in vitro de la eficacia de un inhibidor según la reivindicación 7, caracterizado porque el procedimiento se lleva a cabo en paralelo sobre unas células cotransfectadas por los genes no mutados que codifican los cuatro sarcoglicanos. 9. Procedimiento de evaluación in vitro de la eficacia de un inhibidor según la reivindicación 7 u 8, caracterizado porque el procedimiento se lleva a cabo en paralelo sobre unas células incubadas en ausencia del inhibidor. 10. Procedimiento de evaluación in vitro de la eficacia de un inhibidor según una de las reivindicaciones 7 a 9, caracterizado porque la localización del complejo se realiza mediante marcado inmunohistoquímico. 11 ES 2 335 623 T3 12 ES 2 335 623 T3 13 ES 2 335 623 T3 14 ES 2 335 623 T3 ES 2 335 623 T3 16 ES 2 335 623 T3 17 ES 2 335 623 T3 LISTA DE SECUENCIAS <110> GENETHON Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) <120> MEDICAMENTOS PARA EL TRATAMIENTO DE LAS SARCOGLICANOPATÍAS <130> G143-B-23358 PCT <150> FR 06/53020 <151> 18/07/2006 <160> 8 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 29 <212> ADN. <213> Secuencia artificial <220> <223> H77c (1) <400> 1 gcccaggtgg ctgtgctaca cacagcgca 29 <210> 2 <211> 29 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> H77C (2) <400> 2 tgcgctgtgt gtagcacagc cacctgggc 29 <210> 3 <211> 20 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> a-sarcoQ5 <400> 3 tataaccctg gcttcctcta 20 <210> 4 <211> 24 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> testNeol 1 <400> 4 ES 2 335 623 T3 cgaattcgcc aatgacaaga cgct 24 <210> 5 <211> 20 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> a-sarcoQ3 <400> 5 tagtggctca tgcctttaat 20 <210> 6 <211> 20 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> KIgenoseq2.s <400> 6 tgtgtttggg acttatgggg 20 <210> 7 <211> 20 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> KIgenoseq2.as <400> 7 caatcagcag cagcagcctc 20 <210> 8 <211> 28 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> R77C <400> 8 gccccggtgg ctctgctaca cccagcgc 28 2