PROCEDIMIENTO DE INMOVILIZACION DE LIPASAS.
Sistema de inmovilización de lipasas sobre un soporte de polipropileno microporoso con una relación lipasa/soporte determinada,
con el cual se llevan a cabo eficazmente reacciones enzimáticas de interés, como por ejemplo la producción de ciertos lípidos estructurados beneficiosos para la salud, consiguiendo eliminar el fenómeno de acilmigración y aumentar el rendimiento de producción de los triglicéridos de interés
Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P200700673.
Solicitante: BIOGOLDEN, S.L.U.
Nacionalidad solicitante: España.
Provincia: ALMERÍA.
Inventor/es: RAMIREZ FAJARDO,ANTONIO.
Fecha de Solicitud: 27 de Febrero de 2007.
Fecha de Publicación: .
Fecha de Concesión: 17 de Septiembre de 2010.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N11/08 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 11/00 Enzimas fijadas sobre un soporte o inmovilizadas; Células microbianas fijadas sobre un soporte o inmovilizadas; Su preparación. › siendo el soporte un polímero sintético.
Clasificación PCT:
- C12N11/08 C12N 11/00 […] › siendo el soporte un polímero sintético.
Fragmento de la descripción:
Procedimiento de inmovilización de lipasas.
Sector de la técnica
La presente invención se encuadra en el sector técnico de sistemas de inmovilización de lipasas sobre soportes, de extendida aplicación en diversas reacciones enzimáticas.
Estado de la técnica
El empleo de lipasas aporta muchas ventajas en muchos procesos biotecnológicos. A pesar de ello, el uso de estos catalizadores no se ha generalizado en los procesos a escala industrial debido a que muchas lipasas no son suficientemente estables en las condiciones de trabajo. Por otra parte, muchas lipasas son muy solubles en agua, lo que dificulta su separación de los sustratos y productos para poder reutilizarlas. Además, en las aplicaciones industriales es imprescindible para la economía del proceso utilizar la lipasa repetidas veces. Con la inmovilización de estas enzimas se han podido superar estos inconvenientes y permitir recuperarlas con facilidad en los procesos discontinuos y utilizarlas en procesos continuos haciendo el proceso biotecnológico económicamente rentable.
Como ventajas del empleo de enzimas inmovilizadas se pueden destacar:
Los principales inconvenientes del proceso de inmovilización podrían ser:
Una de las reacciones catalizadas por lipasas de mayor interés actual es la producción de lípidos estructurados MLM (con ácidos grasos de cadena media en las posiciones 1 y 3, y ácidos grasos de cadena larga en la posición 2) beneficiosos para la salud. Para este fin se suelen utilizar lipasas 1,3-específicas inmovilizadas sobre diversos soportes.
Se ha comprobado que los soportes iónicos pueden catalizar fenómenos de acilmigración (paso de los ácidos grasos de cadena larga de la posición 2 a la 1 o a la 3.), disminuyendo considerablemente el rendimiento de producción de los lípidos estructurados de interés.
Por ejemplo, en diversos ensayos realizados con Lipozyme IM (enzima 1,3-específica) inmovilizada sobre una resina de intercambio fónico se comprobó el efecto del fenómeno de acilmigración (Camacho y col., 2002; González Moreno y col., 2004).
Por tanto, existe la necesidad de encontrar un sistema de inmovilización lipasa/soporte adecuado que proporcione alta actividad y elevada estabilidad a las enzimas empleadas, y que a su vez evite el fenómeno de acilmigración, con el fin de obtener un alto rendimiento de producción de lípidos estructurados de interés.
Breve descripción de la invención
La presente invención se refiere a un sistema de inmovilización de lipasas sobre un soporte de polipropileno microporoso con una relación lipasa/soporte determinada. Con este sistema se llevan a cabo eficazmente reacciones enzimáticas de interés, como por ejemplo la producción de ciertos lípidos estructurados beneficiosos para la salud.
Lo novedoso de la invención radica en la adecuada combinación lipasa-soporte, que proporciona una excelente actividad y estabilidad a la enzima inmovilizada. De esta manera se consiguen mejorar los procedimientos descritos hasta la fecha, resolviéndose los problemas planteados en el estado de la técnica: se elimina el fenómeno de acilmigración y aumenta el rendimiento de producción de los triglicéridos de interés.
El método de inmovilización de la presente invención se refiere a un sistema formado por las lipasas 1,3-específicas procedentes de Rhizopus oryzae (Lipasa D) y Rhizopus delemar (Lipasa Rd) inmovilizadas sobre un soporte de polipropileno microporoso, en una relación lipasa/soporte, en peso, está comprendida entre 1:1 y 1:2, preferentemente 1:1,5. Se ha comprobado la actividad de dichas lipasas inmovilizadas en reacciones de hidrólisis, alcoholisis y acidolisis, partiendo de aceite de pescado como sustrato de origen.
En una realización particular de la invención se hicieron ensayos de inmovilización con las lipasas Rd (Rhizopus delemar), D (Rhizopus oryzae) y AK (Pseudomonas florecens) sobre diferentes soportes (Celite y Accurel) y con distintas relaciones lipasa/soporte. Se comprobó así la actividad y estabilidad de las enzimas. Estos ensayos se aplicaron a reacciones de hidrólisis, alcoholisis y acidolisis, con aceite de pescado como sustrato.
En otra realización particular de la invención se comprobó la eficacia del sistema de inmovilización en reacciones de hidrólisis partiendo de aceite de hígado de bacalao y agua.
En otra realización particular de la invención se comprobó la eficacia del sistema de inmovilización en reacciones de alcoholisis partiendo de aceite de hígado de bacalao y etanol.
En otra realización particular de la invención se comprobó la eficacia del sistema de inmovilización en reacciones de acidolisis partiendo de aceites de pescado (atún e hígado de bacalao) y ácido caprílico.
En otra realización particular de la invención se comprobó la eficacia del sistema de inmovilización en reacciones de acidolisis en tanque agitado y en lecho empacado.
Las ventajas prácticas de este nuevo método de inmovilización de lipasas son:
Descripción detallada
Se comprobó que las lipasas de Rhizopus oryzae (Lipasa D) y Rhizopus delemar (Lipasa Rd) inmovilizadas sobre un soporte de propileno microporoso, en una relación lipasa/soporte 1:1,5 proporcionaban unos mejores resultados de actividad y estabilidad que otras combinaciones realizadas con otros soportes, lipasas o relaciones lipasa/soporte.
A continuación, a título explicativo pero no limitativo, se detallan los siguientes ejemplos que ilustran la presente invención.
Ejemplo 1
Preparación de las lipasas inmovilizadas sobre Accurel MP1000
Este método consiste en lavar el soporte (Accurel MP1000) con agua (Milli-Q) hasta que el pH sea igual a 6 y a continuación secarlo en una estufa a 80ºC durante una noche. Por otra parte se prepara una disolución tampón fosfato (pH =6).
1 g de lipasa y 1,5 g de Accurel MP1000 se suspenden en 25 ml de esta disolución fosfato y se agita a 150 rpm y 5ºC durante 8 h. A continuación se añaden 5 ml de etanol y se filtra a vacío...
Reivindicaciones:
1. Sistema de inmovilización de lipasas, caracterizado porque para esta inmovilización se emplea un soporte de polipropileno microporoso con el que se llevan a cabo eficazmente reacciones enzimáticas de interés, en particular la producción de ciertos lípidos estructurados beneficiosos para la salud.
2. Sistema de inmovilización de lipasas, según la reivindicación 1, caracterizado porque las lipasas a inmovilizar son lipasa D (de Rhizopus oryzae) o lipasa Rd (de Rhizopus delemar).
3. Sistema de inmovilización de lipasas, según la reivindicación 1, caracterizado porque el que el soporte empleado es Accurel.
4. Sistema de inmovilización de lipasas, según la reivindicación 1, caracterizado porque la relación lipasa/soporte, en peso, está comprendida entre 1:1 y 1:2, preferentemente 1:1,5.
5. Sistema de inmovilización de lipasas, según la reivindicación 1, caracterizado porque dichas lipasas son inmovilizadas en reacciones de hidrólisis, alcoholisis y acidolisis, partiendo de un sustrato lipídico, preferentemente, aceite de pescado como sustrato.
Patentes similares o relacionadas:
Proceso de preparación de agonistas beta-3 y productos intermedios, del 10 de Julio de 2019, de MERCK SHARP & DOHME CORP: Un proceso de preparación del compuesto I-6:**Fórmula** que comprende: (a-2) reducir el compuesto I-3:**Fórmula** en presencia de […]
Materiales y métodos para inmovilizar, aislar y concentrar células usando superficies carboxiladas, del 10 de Abril de 2019, de QIAGEN GAITHERSBURG, INC: Un método para determinar la presencia de un ácido nucleico diana en una muestra que comprende una célula de cuello uterino y un agente fijador que es […]
Endoproteasa específica de prolina inmovilizada, del 13 de Diciembre de 2018, de DSM IP ASSETS B.V.: Una endoproteasa específica de prolina inmovilizada, en donde la endoproteasa específica de prolina se inmoviliza reticulando a un vehículo de metacrilato […]
Procedimiento de preparación de aleación de polímero/entidades biológicas, del 18 de Abril de 2018, de CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (C.N.R.S.): Procedimiento para preparar una aleación de polímero sólido/entidades biológicas, que comprende las etapas según las cuales: - se selecciona un polímero de poli(caprolactona), […]
Matrices cromatográficas de afinidad y métodos de fabricación y utilización de las mismas, del 27 de Diciembre de 2017, de EMD Millipore Corporation: Método de acoplamiento de un ligando proteico a un soporte sólido, que comprende: a) hacer entrar en contacto el soporte sólido con un grupo asociativo […]
Bio-materiales formados por reacción de adición nucleófila a grupos insaturados conjugados, del 12 de Abril de 2017, de EIDGENOSSISCHE TECHNISCHE HOCHSCHULE ZURICH: Sistema de reacción química adecuado para formar un biomaterial polimérico, sistema de reacción química que comprende un primer componente precursor […]
Elementos portadores de flujo libre, del 12 de Octubre de 2016, de Veolia Water Solutions & Technologies Support: Elemento portador para el crecimiento de biopelícula sobre él, estando dichos elementos portadores diseñados para un […]
Producción de galacto-oligosacáridos, del 13 de Julio de 2016, de FrieslandCampina Nederland B.V: Un método para la preparación de galacto-oligosacáridos (GOS) a partir de lactosa, que comprende (i) el contacto de una alimentación de lactosa con beta-galactosidasa (EC […]