Método para inhibir la replicación viral in vivo.

Una composición que comprende una arginina deiminasa unida a polietilenglicol para su utilización en un método de tratamiento de la infección de la hepatitis C en un individuo

Mïtodo para inhibir la replicaciïn viral in vivo CAMPO DE LA INVENCIïN

La presente invenciïn se dirige a una composiciïn que comprende una arginina deiminasa unida a polietilenglicol para su utilizaciïn en un mïtodo para el tratamiento de la infecciïn de la hepatitis C en un individuo.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIïN

Las infecciones virales se encuentran entre las principales causas de muerte, con millones de fallecimientos cada aïo atribuibles directamente a varios virus, incluyendo la hepatitis y el VIH.

La hepatitis es una enfermedad del hïgado humano. Se manifiesta con la inflamaciïn del hïgado y estï causada generalmente por infecciones virales. Varios virus tales como la hepatitis A, B, C, D, E y G son conocidos por provocar la hepatitis viral. Entre ellos, los mïs graves son el VHB y el VHC.

El virus de la hepatitis C (VHC) es una pandemia con mïs de 170 millones de personas infectadas en todo el mundo. Entre las enfermedades virales, estï 5 veces mïs generalizada que el virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH – 1) , y aproximadamente 10.000 estadounidenses fallecerïn este aïo por cirrosis y carcinoma hepatocelular (CHC) resultante de la infecciïn crïnica por VHC (Sun CA, Wu DM, Lin CC, LU SN, You SL, Wang LY, Wu MH, Chen CJ. 2003. Incidence and cofactors of hepatitis C virus – related hepatocellular carcinoma: a prospective study of 12, 008 men in Taiwan. Am J Epidemiol 157: 674 – 682; Herrine SK. 2002. Approach to the patient with chronic hepatitis C virus infection. Ann Intern Med 136: 747 – 757; Hoofnagle JH. 2002. Course and outcome of hepatitis C. Hepatology 36: S21 – S29; Lauer GM, Walker BD. 2001 Hepatitis C virus infection. N Engl J Med 345: 41 – 52; Liang TJ, Rehermann B, Seeff LB, Hoofnagle JH. 2001. Pathogenesis, natural histor y , treatment, and prevention of hepatitis C. Ann Intern Med 132: 236 – 305) . Es mïs, la prevalencia del VHC continïa aumentando en EE.UU, Europa Occidental y Asia a pesar de la instituciïn de programas de cribado de donantes de sangre. La progresiïn a la enfermedad crïnica sucede en la mayorïa de los pacientes infectados por el VHC. Ademïs, el VHC causa, anualmente, CHC en el 1 -4 % de todos los individuos con infecciïn crïnica. Ademïs, el CHC puede ocurrir incluso en aquellos que no tienen cirrosis (Shiratori Y, Shiina S, Teratani T, Imamura M, Obi S, Sato S, Koike Y, Yoshida H, Omata M. 2003. Interferon theraphy alter tumor ablation improves prognosis in patients with hepatocellular carcinoma associated with hepatitis C virus. Ann Int Med 138: 299 – 306; Smith MW, Yue ZN, Geiss GK, Sadovnikova NY, Carter VS, Boix L, Lazaro CA, Rosenberg GB, Bumgarner RE, Fausto N, Bruix J, Katze MG. 2003. Identification of novel tumor markers in hepatitis C virus – associated hepatocellular carcinoma. Cancer Res 63: 859 – 864; Yoshizawa H. 2002. Hepatocellular carcinoma associated with hepatitis C virus infection in Japan: projection to other countries in the foreseeable future. Oncology 62 (Supl 1) : 8 – 17; Colombo M. 1999. Natural histor y and pathogenesis of hepatitis C virus related hepatocellular carcinoma. J Hepatology 31 (Supl 1) : 25 – 30) . Dado la prevalencia actual de la infecciïn por VHC entre personas de 30 a 50 aïos, se estima que se dupliquen las tasas de incidencia y mortalidad por VHC en los Estados Unidos durante los prïximos 10 – 20 aïos (El – Serag HB. 2002. Hepatocellular carcinoma and hepatitis C in the United States. Hepatology 36: S74 – S83) . Se estima que hay 500 millones de personas infectadas en todo el mundo. No se dispone en la actualidad de una inmunizaciïn efectiva, y la hepatitis C sïlo puede controlarse por otras medidas preventivas, tales como la mejora de la higiene y las condiciones sanitarias, y la interrupciïn de la vïa de transmisiïn.

En la actualidad, no existe un tratamiento eficaz para el CHC, excepto la resecciïn quirïrgica (Ry der SD. 2003. Guidelines for the diagnosis and treatment of hepatocellular carcinoma (HCC) in adults. Gut 52 (Supl III) : iii1 – iii8; El – Serag HB. 2002. Hepatocellular carcinoma and hepatitis C in the United States. Hepatology 36: S74 – S83; El – Serag HB. 2001. Global epidemiology of hepatocellular carcinoma. Clin Liver Dis 5: 87 – 107; DiMaio M, DeMaio E, Perrone F, Pegnata S, Daniele B. 2002. Hepatocellular carcinoma: systemic treatments. J Clin Gastroenterol 35 (Supl. 2) : S109 – S114; Curley SA, Izzo F, Ellis LM, Vauthey JN, Vallone P. 2000. Radiofrequency ablation of hepatocellular cancer in 110 patients with cirrhosis. Ann Surg 232: 381 – 391; Watkins KT, Curley Sa. 2000. Liver and bile ducts. In Clinical Oncology, 2ï ed. Editores MD Abeloff, JO Armitage, AS Lichter, JE Niederhuber. Nueva York: Churchill Livingstone, pïg. 1681 – 1748) . Sin embargo, sïlo < 5 % de los pacientes con CHC son candidatos para la cirugïa y sïlo ~ 1 % se sometiï a resecciïn. Incluso entre los que se sometieron a resecciïn, la recidiva del CHC es comïn, especialmente en aquellos infectados con el VHC.

La terapia de privaciïn de aminoïcidos es un medio eficaz para el tratamiento de algunos cïnceres. Aunque las cïlulas normales no requieren arginina, muchas lïneas celulares cancerïgenas son auxotrïficas para estos aminoïcidos. De este modo, los cïnceres, que se incluyen pero no se limitan al CHC, pueden eliminarse de manera selectiva mediante la terapia de privaciïn de arginina (Ensor CM, Holtsberg FW, Bomalaski JS, Clark MA. 2002.

Pegylated arginine deiminase (ADI-SS PEG 200OO mw) inhibits human melanomas and hepatocellular carcinomas in vitro and in vivo. Cancer Res 62: 5443 -5440; Takaku, H, Misawa, S, Hayashi H and Miyazaki K. (1993) . Chemical modification by polyethylene glycol of the anti-tumor enzyme arginine deiminase from Mycoplasma arginini. Jpn. J. Cancer Res. 84:1195-1200; Takaku H, Takase M, Abe S, Hayashi H y Miyazaki K. (1992) . In vivo anti-tumor activity of arginine deiminase purified from Mycoplasma arginini. Int. J. Cancer 51 :244-249; Sugimura K, Ohno T, Kussyama T, Azuma I. 1992. High sensitivity of human melanoma cell lines to the growth inhibitor y activity of Mycoplasma

arginini deiminase in vitro. Melanoma Res. 2:191-196) . High sensitivity of human melanoma cell lines to the growth inhibitor y activity of Mycoplasma arginini deiminase in vitro. Melanoma Res. 2: 191 -196) . Esta terapia se tolera bien a pesar de que la arginina no es un aminoïcido esencial en los seres humanos (Rose WC. 1949. Amino acid requirements of man. Fed Proc 8: 546 -452, Sny derman, S., E., Boyer, A., y L.E. Holt 1959. The arginine requirement of the infant. J. Dis. Child. 97: 192, y para la revision vïase Rodgers QR. 1994. Species variation in arginine requirements. In Proceedings from a Symposium Honoring Willard J. Nisek -from Ammonia to Cancer and Gene Expression. Publicaciïn especial 86 -Abril 1994, Agriculture Experiment Station, Universidad de Illinois, 211 Mumford Hall, Urbana, IL 61801, pïg. 9 -21, ya que puede sintetizarse a partir de la citrulina. La ADI convierte la arginina extracellular en citrulina que puede absorberse por las lïneas normales y convertirse en arginina intracelular aunque no mediante las cïlulas cancerosas, en especial las cïlulas de CHC, ya que que carecen de la enzima limitante argininosuccinato sintetasa (Ensor CM, Holtsberg FW, Bomalaski JS, Clark MA. 2002. Pegylated arginine deiminase (ADI-SS PEG 2O00 mw) inhibits human melanomas and hepatocellular carcinomas in vitro and in vivo.

Cancer Res 62: 5443 -5440) . Esta incapacidad para expresar la argininosuccinato sintetasa ha sido recientemente confirmada por otros (Shen LJ, Lin WC, Beloussow K, Shen WC. 2003. Resistance to the anti-proliferative activity of recombinant arginine deiminase in cell culture correlates with the endogenous enzyme, argininosuccinate synthetase. Cancer Lett 191: 165 -170) . Se ha ampliado este studio de la deficiencia de la argininosuccinato sintetasa a otros tumores (Dillon B J, Prieto NG, Curley S A, Ensor CM, Holtsberg FW, Bomalaski JS, Clark MA. 2003. The method incidence and distribution of argininosuccinate synthetase deficiency in human cancers: a method for identifying cancers sensitive to arginine deprivation. Cancer (en prensa) . Los resultados preliminares de los ensayos clïnicos en humanos de la ADI – SS PEG 20.000 mw indican que este tratamiento es seguro y efectivo como tratamiento contra el cïncer.

La infecciïn por el virus de la hepatitis B puede dar lugar a un amplio espectro de lesiones hepïticas. Ademïs, la infecciïn de la hepatitis B crïnica se ha relacionado con el desarrollo posterior del carcinoma hepatocelular, principal causa de muerte. La prevenciïn actual de la infecciïn por VHB es... [Seguir leyendo]

1. Una composiciïn que comprende una arginina deiminasa unida a polietilenglicol para su utilizaciïn en un mïtodo de tratamiento de la infecciïn de la hepatitis C en un individuo.

2. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que el mïtodo comprende ademïs el paso de administrar a dicho individuo uno o mïs compuestos seleccionados del grupo formado por antibiïticos, antivirales, antifïngicos y fïrmacos antiprotozoarios.

3. La composiciïn para su utilizaciïn en la reivindicaciïn 2, en la que uno o mïs compuestos son otros compuestos antivirales.

4. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en las reivindicaciones 2 o 3, en la que dichos compuestos antivirales son uno o mïs de azodivudina (AZT) , didanosina (didesoxiinosina, ddI) , d4T, zalcitabina (didesoxicitosina, ddC) , nevirapina, lamivudina (epivir, 3TC) , saquinavir (Invirase) , rinotavir (Norvir) , indinavir (Crixivan) , delavirdina (Rescriptor) , pegilado (PEG) , interferïn – α (IFN) , o ribavirina.

5. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que dicho compuesto se administra por vïa intramuscular, intradïrmica, o intraperitoneal.

6. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que dicha composiciïn es eficaz en una concentraciïn menor a 1 mM para inhibir la replicaciïn del virus de la hepatitis C en, al menos, el 50 % de mïs del 50 % de las cïlulas en un ensayo para medir la replicaciïn del virus de la hepatitis C.

7. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que la cantidad de arginina deiminasa unida al polietilenglicol eficaz para inhibir la replicaciïn viral oscila entre 40 UI / m2 y 160 UI / m2 por semana.

8. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que la cantidad de arginina deiminasa unida al polietilenglicol eficaz para inhibir la replicaciïn viral oscila entre 160 UI / m2 por semana.

9. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que la cantidad de arginina deiminasa unida al polietilenglicol eficaz para inhibir la replicaciïn viral disminuye los niveles de arginina plasmïtica a menos de 5 μM.

10. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que la arginina deiminasa estï covalentemente unida al grupo de enlace en polietilenglicol, en el que cada una de las molïculas de polietilenglicol tiene un peso molecular entre 10.000 y 30.000, y en el que el grupo de enlace es succinimidil succinato.

11. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que las molïculas de 7 a 15 polietilenglicol estïn unidas a la arginina deiminasa.

12. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que las molïculas de 9 a 12 polietilenglicol estïn unidas a la arginina deiminasa.

13. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que dicha arginina deiminasa se deriva de un microorganismo del gïnero Mycoplasma, y en el que dicho microorganismo se selecciona del grupo formado por Mycoplasma arginini, Mycoplasma hominis, Mycoplasma arthritidis y combinaciones de los mismos.

14. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que la arginina deiminasa tiene una secuencia de aminoïcidos de las SECs ID Nï 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 21.

15. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que la arginina deiminasa tiene una secuencia de aminoïcidos de las SECs ID Nï 1 o 4.

16. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que el virus de la hepatitis C es VHC1b.

17. Una composiciïn que comprende una arginina deiminasa unida a polietilenglicol para su utilizaciïn en el tratamiento de un individuo sospechoso de haber estado expuesto al virus de la hepatitis C.

18. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que un individuo estï en riesgo por uno o mïs virus seleccionados del grupo formado por VIH, gripe, polio, herpes simple, hepatitis, sarcoma de Kaposi, rinovirus, virus del Nilo Occidental, viruela y vaccinia virus .

19. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que se ha identificado un individuo

de haber sido infectado uno o mïs virus seleccionados del grupo formado por VIH, gripe, polio, herpes simple, hepatitis, sarcoma de Kaposi, rinovirus, virus del Nilo Occidental, viruela y vaccinia virus .

20. Un mïtodo para determinar la sensibilidad de la replicaciïn del virus de la hepatitis C para modular los niveles de la arginina u ïxido nïtrico que comprende:

a) poner en contacto una muestra que comprende el virus de la hepatitis C con una composiciïn que comprende arginina deimnasa unida a polietilenglicol; y b) comparar los niveles de la replicaciïn del virus de la hepatitis C en presencia y ausencia de la composiciïn que comprende arginina deiminasa unida a polietilenglicol; en la que disminuyï la replicaciïn del virus de la hepatitis C en muestras en contacto con arginina deiminasa que es indicativa de la sensibilidad del virus de la hepatitis C en arginina u ïxido nïtrico.

21. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en las reivindicaciones 2 o 3, en la que dicho (s) compuesto (s) se administra (n) de forma simultïnea a un individuo con la arginina deiminasa unida a polietilenglicol.

22. La composiciïn para su utilizaciïn reivindicada en la reivindicaciïn 1, en la que la composiciïn inhibe de forma selectiva la replicaciïn del virus de la hepatitis C en el individuo.