Conjugados de ácido hialurónico, en forma tanto de ácido como de sal,

en los que los grupos hidroxilo primarios de la unidad de N-acetil-D-glucosamina del ácido hialurónico se esterifican ambos con el grupo carboxílico de un compuesto A seleccionado de entre:

(i): Un ácido alifático seleccionado de entre el grupo que consiste en el ácido acético, el ácido butírico, el ácido propiónico, el ácido retinoico, el ácido n-propilacético, el ácido succínico, el ácido ciclohexanocarboxílico, el ácido ciclohexanoacetílico y el ácido ciclopropanocarboxílico;

(ii) un aminoácido seleccionado de entre el grupo que consiste en alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, glicina, serina, cisteína, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutámico, prolina, histidina fenilalanina, triptófano y tirosina;

(iii) Un ácido arilalifático seleccionado de entre el grupo que consiste en el ácido fenilacético, el ácido fenoxiacético, el ácido naftilacético, el ácido 2-(4-isobutilfenil) propiónico, el ácido 2-(6-metoxi-2-naftil) propiónico y el ácido cinámico;

(iv) ácido benzoico sustituido o sin sustituir.

y con

Fármaco antiproliferativo.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a conjugados esterificados del ácido hialurónico que presentan actividad antiproliferativa.

Técnicas anteriores

Se han analizado diversas moléculas orgánicas y se conoce que son útiles como agentes antiproliferativos, pero muchas de las mismas presentan una capacidad de utilización clínica limitada debido a su elevada toxicidad, baja solubilidad y/o parámetros farmacocinéticos inapropiados.

Entre dichos compuestos se encuentran los N-derivados del ácido glutámico con actividad inhibidora sobre la dihidrofolato reductasa (DHFR), que constituyen una familia de agentes antiproliferativos que presentan el metotrexato como compuesto original.

Dichos fármacos resultan efectivos en el tratamiento de diversas enfermedades tales como las neoplasias, la soriasis y la artritis reumatoide. Sin embargo, su utilización terapéutica se ve muy limitada debido a su elevada toxicidad sistémica.

En el documento WO 01/68105 se da a conocer que el problema de los inhibidores de la DHFR mencionados anteriormente se puede resolver conjugándolos con polisacáridos. De hecho, los conjugados obtenidos de este modo realizan todavía una actividad antiproliferativa pero, al mismo tiempo tienen la ventaja de presentar una toxicidad sorprendentemente baja.

El documento JP 09188705 da a conocer un conjugado que comprende ácido hialurónico unido mediante un enlace amida a uno de los grupos carboxilo del metotrexato.

El documento JP 2004018750 da a conocer unos conjugados unidos enlazando grupos amida del ácido hialurónico con grupos carboxilo del metotrexato.

Sumario de la invención

Los presentes inventores han descubierto que cuando los conjugados entre el ácido hialurónico y los N-derivados del ácido glutámico descritos en el documento WO 01/68105, se esterifican adicionalmente en los grupos hidroxilo primarios residuales del ácido hialurónico con un aminoácido, un péptido, un ácido alifático, un ácido arilalifático y/o un ácido arílico se observa un aumento significativo e inesperado de su actividad antiproliferativa y un descenso de su toxicidad.

Descripción de las figuras

La figura 1 representa el espectro de ¹³C-NMR del HA-6-Br obtenido en el Ejemplo 4.

La figura 2 representa el espectro de ¹³C-NMR del HA-Cl obtenido en el Ejemplo 5.

La figura 3 representa el espectro de ¹³C-NMR del HA-MTX obtenido en el Ejemplo 19.

Descripción detallada de la invención

Un primer objetivo de la presente invención son unos nuevos conjugados de ácido hialurónico en los que los grupos hidroxilos primarios de la unidad de N-acetil-D-glucosamina del ácido hialurónico se esterifican tanto con el grupo carboxílico de un compuesto A seleccionado de entre el grupo que consiste en aminoácidos, péptidos, ácidos alifáticos, ácidos arilalifáticos y ácidos arílicos con el grupo a- o ?-carboxílico de un N-derivado el ácido glutámico de fórmula (I):

en la que:

R₂ y R₄, independientemente entre sí, representan: -NH₂, -OH, -OCH₃, alquilo C₁ - C₅, =O;

X e Y representan: -C(R₅)=, -CH(R₅)-, -NH-, -N=, en la que R₅ representa: -H, alquilo C₁ - C₅;

Z representa: -CH(R₁₀)-, -N(R₁₀)-, -O-, en la que R₁₀ representa: -H, alquilo C₁ - C₅, alquenilo C1 - C5, alquinilo C1 - C5, un anillo heterocíclico con un número de miembros comprendido entre 5 y 6 con 1 a 3 heteroátomos seleccionados de entre el grupo que consiste en nitrógeno, azufre y oxígeno;

Ar representa: un grupo 1,4-fenilo, un grupo 1,4-fenilo condensado con uno o más anillos aromáticos con un número de miembros comprendido entre 5 y 6, un grupo 1,4-fenilo condensado con uno o más heterociclos con un número de miembros comprendido entre 5 y 6, en la que dichos grupos se sustituyen posiblemente con R₂ tal como se ha definido anteriormente, los anillos A y B, independientemente entre sí, pueden ser aromáticos o no aromáticos.

Dichos ya se han descrito en el documento WO 01/68105.

Preferentemente, el compuesto de fórmula (I) es metotrexato (MTX), representado por la fórmula (I) en la que R₂ y R₄ son -NH₂; el anillo A es aromático; el anillo B es aromático y X e Y son: -N=; Z es -N(CH₃)-; Ar es un grupo 1,4-fenilo.

Los compuestos preferidos adicionales de fórmula (I) son aquellos que pertenecen a las subclases siguientes:

- subclase 1 representada por la fórmula (I) en la que R₂ y R₄ son -NH₂ u -OH;

R₅ cuando se encuentra presente representa: -H, -CH₃; en anillo A es aromático; Z se selecciona de entre el grupo que consiste en: -CH(R₁₀)-, -N(R₁₀)-; R₁₀ representa: -H, alquilo C₁ - C₅, alquenilo C₁ - C₅, alquinilo C₁ - C₅.

- subclase 2 representada por la fórmula (I) en la que R₂ es =O y R₄ es -NH₂; el anillo A es no aromático; el anillo B es aromático y X e Y son -N=; Z es -N(R₁₀)-, en la que R₁₀ representa: -H o -CH₃; Ar es 1,4 fenilo.

- subclase 3 representada por la fórmula (I) en la que R₂ y R₄ son -NH₂; el anillo A es aromático; el anillo B es aromático y X e Y son -N=; Z es -N(R₁₀)-; en la que R₁₀ es -CH₃ o -H; Ar es 1,4 fenilo.

- subclase 4 representada por la fórmula (I) en la que R₂ y R₄ son -NH₂; el anillo A es aromático; el anillo B es aromático y X e Y son -N=; Z es -CH-(C₂H₅)-; Ar es 1,4-fenilo.

El compuesto de fórmula (I) se enlaza con el ácido hialurónico tanto mediante su grupo Y- o el grupo ácido a-carboxílico. El compuesto A se selecciona de entre el grupo que consiste en aminoácidos, péptidos, ácidos alifáticos, ácidos arilalifáticos y ácidos arílicos y se enlaza con el ácido hialurónico mediante grupo carboxílico. Dicho compuesto se incorpora en el polisacárido utilizando el acilo nucleófilo derivado del ácido carboxílico correspondiente.

Los ácidos alifáticos según la presente invención se seleccionan de entre el grupo que consiste en el ácido acético, el ácido butírico, el ácido propiónico, el ácido retinoico, el ácido n-propilacético, el ácido succínico, el ácido ciclohexanocarboxílico, el ácido ciclohexanoacetílico y el ácido ciclopropanocarboxílico.

Los aminoácidos según la presente invención se seleccionan de entre el grupo que consiste en alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, glicina, serina, cisteína, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutámico, prolina, histidina fenilalanina, triptófano y tirosina.

Los ácidos arilalifáticos según la presente invención se seleccionan de entre el grupo que consiste en el ácido fenilacético, el ácido fenoxiacético, el ácido naftilacético, el ácido 2-(4-isobutilfenil) propiónico, el ácido 2-(6-metoxi-2-naftil) propiónico y el ácido cinámico.

Los ácidos arílicos se seleccionan de entre el ácido benzoico sin sustituir o sustituido. Preferentemente, dicho ácido benzoico sustituido se selecciona de entre el grupo que consiste en el ácido halobenzoico, el ácido alquilbenzoico, el ácido nitrobenzoico y el ácido 2-acetoxibenzoico.

El ácido alifático o arilalifático o arílico se puede sustituir con alquilos C₁ - C₅ lineales o ramificados, halógenos, grupos nitro, grupos ciano, grupos hidroxilo, grupos amino, grupos metoxilo.

Según una forma de realización particularmente preferida de la presente invención, el compuesto A se selecciona de entre el grupo que consiste en el ácido acético, el ácido butírico, alanina, glicina y péptidos que contienen alanina y/o glicina.

El ácido hialurónico (que en la presente memoria se indica asimismo como HA) está compuesto por una unidad de repetición de un disacárido que consiste en el ácido D-glucurónico y la 2-acetamido-2-desoxi-D-glucosa (N-acetil-D-glucosamina)...

1. Conjugados de ácido hialurónico, en forma tanto de ácido como de sal, en los que los grupos hidroxilo primarios de la unidad de N-acetil-D-glucosamina del ácido hialurónico se esterifican ambos con el grupo carboxílico de un compuesto A seleccionado de entre:

(i): Un ácido alifático seleccionado de entre el grupo que consiste en el ácido acético, el ácido butírico, el ácido propiónico, el ácido retinoico, el ácido n-propilacético, el ácido succínico, el ácido ciclohexanocarboxílico, el ácido ciclohexanoacetílico y el ácido ciclopropanocarboxílico;

(ii) un aminoácido seleccionado de entre el grupo que consiste en alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, glicina, serina, cisteína, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutámico, prolina, histidina fenilalanina, triptófano y tirosina;

(iii) Un ácido arilalifático seleccionado de entre el grupo que consiste en el ácido fenilacético, el ácido fenoxiacético, el ácido naftilacético, el ácido 2-(4-isobutilfenil) propiónico, el ácido 2-(6-metoxi-2-naftil) propiónico y el ácido cinámico;

(iv) ácido benzoico sustituido o sin sustituir.

y con

R₂ y R₄, independientemente entre sí representan: -NH₂, -OH, -OCH₃, un grupo alquilo C₁ -C₅, =O;

X e Y representan: -C(R₅)=, -CH(R₅)-, -NH-, -N=, en la que R₅ representa: -H, un grupo alquilo C₁ - C₅;

Z representa: -CH(R₁₀)-, -N(R₁₀)-, -O-;

R₁₀ representa: -H, un grupo alquilo C₁ - C₅, un grupo alquenilo C₁ - C₅, un grupo alquinilo C₁ - C₅, un anillo heterocíclico con un número de miembros comprendido entre 5 y 6 con de 1 a 3 heteroátomos seleccionados de entre el grupo que consiste en nitrógeno, azufre y oxígeno;

Ar representa: un grupo 1,4-fenilo, un grupo 1,4-fenilo condensado con uno o más anillos aromáticos con un número de miembros comprendido entre 5 y 6, un grupo 1,4-fenilo condensado con uno o más heterociclos con un número de miembros comprendido entre 5 y 6, en la que dichos grupos están posiblemente sustituidos con R₂; los anillos A y B, independientemente entre sí, pueden ser aromáticos o no aromáticos.

2. Conjugados según la reivindicación 1 en los que dicho compuesto de fórmula (I) es metotrexato.

3. Conjugados según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 en los que la cantidad total del compuesto de fórmula (I) y del compuesto A se encuentra comprendida entre el 0,1% y el 60% p/p con respecto al peso total del conjugado.

4. Conjugados según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en los que dicho compuesto de fórmula (I) se encuentra presente en una cantidad comprendida entre el 1% y el 40% p/p y dicho compuesto A en una cantidad comprendida entre el 0.1 y el 30% p/p, con respecto al peso total del conjugado.

5. Conjugado según la reivindicación 4 en el que dicho compuesto A es ácido acético y se encuentra presente en una cantidad comprendida entre el 0,1% y el 10% p/p con respecto al peso total del conjugado.

6. Conjugados según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en los que dicho ácido alifático se encuentra sustituido con un grupo sustituyente seleccionado de entre el grupo que consiste en grupos alquilo C₁ - C₅ lineales o ramificados, halógenos, grupos nitro, grupos ciano, grupos hidroxilo, grupos amino, grupos metoxilo, grupos carbonilo, grupos tiol y grupos carboxilo.

7. Conjugados según la reivindicación 6 en los que dicho ácido benzoico sustituido se selecciona de entre el grupo que consiste en el ácido halobenzoico, el ácido alquilbenzoico, el ácido nitrobenzoico y el ácido 2-acetoxibenzoico.

8. Conjugados según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en los que dicho compuesto A se selecciona de entre el grupo que consiste en el ácido acético, el ácido butírico, la alanina, la glicina y péptidos que contengan alanina y/o glicina.

9. Conjugados según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 salificados con un metal seleccionado de entre el grupo que consiste en los metales alcalinos, los metales alcalinotérreos y los metales de transición.

10. Conjugados según la reivindicación 9 salificados con un metal seleccionado de entre el grupo que consiste en Na⁺, K⁺, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺, Cu⁺⁺, Zn⁺⁺, Ag⁺⁺, Au⁺⁺ y Co⁺⁺.

11. Conjugados según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 en los que los grupos hidroxilo secundarios del ácido hialurónico se modifican para formar un grupo seleccionado de entre el grupo que consiste en -OR, -OCOR, -SO₂H, -OPO₃H₂, -O-CO-(CH₂)_n-COOH y -O-(CH₂)_n-OCOR, en la que n se encuentra comprendida entre 1 y 4 y R es un grupo alquilo C₁ -C₁₀.

12. Conjugados según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 en los que los grupos hidroxilo secundarios del ácido hialurónico modificados para formar un grupo seleccionado de entre -NH₂ y -NHCOCH₃.

13. Utilización de los conjugados según las reivindicaciones 1 a 12 en la realización de un medicamento para el tratamiento de enfermedades caracterizadas por la hiperproliferación celular.

14. Utilización según la reivindicación 13 en la que dichas enfermedades se seleccionan de entre el grupo que consiste en tumores, trastornos cutáneos, soriasis, dermatopatías y artritis reumatoide.

15. Composiciones farmacéuticas que contienen los conjugados según las reivindicaciones 1 a 12 mezclados con excipientes y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

16. Procedimiento para la preparación de conjugados según las reivindicaciones 1 a 12.

17. Procedimiento según la reivindicación 16 que comprende las etapas siguientes a realizar en el orden indicado:

(a) la cloración de los grupos hidroxilo primarios de las unidades de N-acetil-D-glucosamina del ácido hialurónico en forma tanto libre como de sal;

(b) la formación de enlaces éster entre el ácido hialurónico clorado y los grupos carboxilo del compuesto de fórmula (I) mediante el desplazamiento de los átomos de cloro,

(c) la formación de un enlace éster entre el producto de la etapa (b) y el compuesto A mediante el desplazamiento de los átomos de cloro residual con un nucleófilo acilo apto del compuesto A.

18. Procedimiento según la reivindicación 17 en el que el reactivo utilizado para la cloración es cloruro de metanosulfonilo en N, N-dimetilformamida.

19. Procedimiento para obtener conjugados entre el ácido hialurónico y un compuesto de fórmula (I):

en la que:

R₂ y R₄, independientemente entre sí representan: -NH₂, -OH, -OCH₃, un grupo alquilo C₁ -C₅, =O;

X e Y representan: -C(R₅)=, -CH(R₅)-, -NH-, -N=, en la que R₅ representa: -H, un grupo alquilo C₁ - C₅;

Z representa: -CH(R₁₀)-, -N(R₁₀)-, -O-; en la que R₁₀ representa: -H, un grupo alquilo C₁ - C₅, un grupo alquenilo C₁ - C₅, un grupo alquinilo C₁ - C₅, un anillo heterocíclico con un número de miembros comprendido entre 5 y 6 con de 1 a 3 heteroátomos seleccionados de entre el grupo que consiste en nitrógeno, azufre y oxígeno;

Ar representa: un grupo 1,4-fenilo, un grupo 1,4-fenilo condensado con uno o más anillos aromáticos con un número de miembros comprendido entre 5 y 6, un grupo 1,4-fenilo condensado con uno o más heterociclos con un número de miembros comprendido entre 5 y 6, en la que dichos grupos están posiblemente sustituidos con R₂; los anillos A y B son aromáticos o no aromáticos;

caracterizado porque contiene una cantidad inferior al 3% p/p de cloro residual enlazado químicamente a la cadena polimérica de ácido hialurónico,

comprendiendo dicho procedimiento las etapas siguientes, realizadas en el orden indicado:

(a) la cloración de los grupos hidroxilo primarios de las unidades de N-acetil-D-glucosamina del ácido hialurónico en forma tanto libre como de sal; y

(b) la formación de enlaces éster entre el ácido hialurónico clorado y los grupos carboxilo del compuesto de fórmula (I) mediante el desplazamiento de los átomos de cloro.

20. Procedimiento para obtener los conjugados según la reivindicación 19 que comprende las etapas siguientes, realizadas en el orden indicado:

(a) la cloración de los grupos hidroxilo primarios de las unidades de N-acetil-D-glucosamina del ácido hialurónico en forma tanto libre como de sal;

(b) la formación de enlaces éster entre el ácido hialurónico clorado y los grupos carboxilo del compuesto de fórmula (I) mediante el desplazamiento de los átomos de cloro;

(c) el desplazamiento de los átomos de cloro residual del producto de la etapa (b) mediante un nucleófilo acilo apto y la formación de enlaces éster; y

(d) la desacilación selectiva de los conjugados obtenidos en la etapa (c).