Un ácido nucleico aislado que comprende ID. SEC. Nº 1, codificando dicho ácido nucleico un factor 23 de crecimiento de fibroblastos (FGF23)

Factor de crecimiento de fibroblastos (FGF23) nuevo y procedimientos para el uso.

Antecedentes de la invención

Las afecciones en las que los niveles séricos de fosfato están reducidos o aumentados, denominadas hipofosfatemia e hiperfosfatemia, respectivamente, están asociadas con un grupo grande y diverso de enfermedades clínicamente significativas. La hipofosfatemia, que con frecuencia es el resultado de la pérdida renal de fosfato, es causada por una serie de trastornos genéticos que incluyen el raquitismo hipofosfatémico ligado al cromosoma X (XLH), el raquitismo hipofosfatémico hereditario con hipercalciuria (HHRH), la enfermedad hipofosfatémica de los huesos (HBD) y el raquitismo hipofosfatémico autosómico dominante (ADHR). La hiperfosfatemia, observada en pacientes con insuficiencia renal leve y calcinosis tumoral, puede estar asociada frecuentemente con la calcificación de tejidos blandos, el hiperparatiroidismo secundario, el hiperparatiroidismo terciario y otros trastornos metabólicos.

No se conocen bien los mecanismos moleculares por medio de los que se mantienen las concentraciones adecuadas de fosfato en el suero. La identificación de los genes responsables de los trastornos heredados que implican perturbaciones en la homeostasis del fosfato puede proporcionar conocimientos sobre las vías que regulan el equilibrio del fosfato. Actualmente, a pesar de las características clínicas evidentes en los pacientes con afecciones hipofosfatémicas e hiperfosfatémicas, no se dispone de marcadores moleculares útiles en el diagnóstico temprano, la clasificación y la estadificación de estos trastornos. Asimismo, la actual carencia de procedimientos eficaces de tratamiento para los pacientes con trastornos hipofosfatémicos e hiperfosfatémicos presenta una necesidad de terapias alternativas. La presente invención satisface estas necesidades.

El documento WO 01/66595 forma la técnica anterior a tenor del Artículo 54(3) del CPE y se refiere al factor de crecimiento de fibroblastos humano.

Econs M. J. y col., J. Clin. Invest., volumen 100, 1997, páginas 2653-2657 dan a conocer que el raquitismo hipofosfatémico autosómico dominante está ligado al cromosoma 12p13.

Breve resumen de la invención

La invención incluye un ácido nucleico aislado que codifica FGF23 como se reivindica en las reivindicaciones 1 y 15.

En un aspecto, el ácido nucleico aislado que codifica FGF23 comparte al menos aproximadamente el 99% de similitud de secuencia con la secuencia del ácido nucleico de ID. SEC. Nº 1.

La invención también ilustra un ácido nucleico aislado que codifica FGF23, ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que comparte al menos el 40% de similitud de secuencia con una secuencia de aminoácidos de al menos una de ID. SEC. Nº 2 e ID. SEC. Nº 4.

En una forma de realización de preferencia, el ácido nucleico aislado de la invención está incluido en el depósito DSMZ con número de depósito DSM 13530.

En un aspecto de la invención, el ácido nucleico aislado que codifica FGF23 está unido de manera covalente a un ácido nucleico que codifica un polipéptido marcador. En una forma de realización de preferencia, el polipéptido marcador es un polipéptido marcador myc, un polipéptido marcador de glutatión S-transferasa, un polipéptido marcador de proteína fluorescente verde, un polipéptido marcador myc-piruvato cinasa, un polipéptido marcador His6, un polipéptido marcador de hemaglutinina del virus de la gripe, un polipéptido marcador "flag" o un polipéptido marcador de proteína de unión a la maltosa.

La invención también incluye un ácido nucleico que codifica FGF23, estando el ácido nucleico unido de manera operativa a un ácido nucleico que especifica una secuencia promotora/reguladora.

La invención incluye además un vector que comprende un ácido nucleico aislado que codifica FGF23. En una forma de realización de preferencia, el vector comprende un ácido nucleico aislado que codifica FGF23 unido de manera operativa a una secuencia promotora/reguladora.

La invención incluye además una célula recombinante como la de la reivindicación 8 ó 9 que comprende un ácido nucleico aislado que codifica FGF23 o un vector que lo comprende.

La invención incluye un ácido nucleico aislado complementario a un ácido nucleico que codifica FGF23 según se define en las reivindicaciones, estando el ácido nucleico complementario en una orientación antisentido. Se ilustran ácidos nucleicos complementarios que comparten al menos el 50% de similitud de secuencia con un ácido nucleico complementario con un ácido nucleico que tiene la secuencia de al menos una de ID. SEC. Nº 1 e ID. SEC. Nº 3. También está incluido en la invención un vector que comprende el ácido nucleico complementario reivindicado, así como un vector que comprende el ácido nucleico complementario unido de manera operativa a un ácido nucleico que especifica una secuencia promotora/reguladora.

La invención incluye además una célula recombinante que comprende el ácido nucleico complementario y los vectores que lo comprenden.

La invención incluye un mamífero no humano transgénico que comprende un ácido nucleico aislado que codifica FGF23 según se define en las reivindicaciones.

La invención incluye además un polipéptido aislado que comprende FGF23 según se define en la reivindicación 18. La invención ilustra un polipéptido aislado que comparte al menos aproximadamente el 40% de similitud de secuencia con una secuencia de aminoácidos de al menos una de ID. SEC. Nº 2 e ID. SEC. Nº 4. La invención incluye un anticuerpo que se une específicamente con un polipéptido FGF23 según se define en las reivindicaciones. En una forma de realización de preferencia, el anticuerpo es un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico o un anticuerpo sintético.

La invención incluye además un ácido nucleico aislado que codifica FGF23 según se define en las reivindicaciones, en el que el ácido nucleico comprende una mutación. En una forma de realización de preferencia, la mutación confiere mayor estabilidad a FGF23. De más preferencia, la mutación afecta al aminoácido 176 (arginina) con relación a ID. SEC. Nº 2 o el aminoácido 179 (arginina) con relación a ID. SEC. Nº 2. Aún de más preferencia, la mutación se selecciona del grupo constituido por 527G > A, 535C > T y 536G > A con relación a ID. SEC. Nº 1.

La invención también incluye un polipéptido FGF23 según se define en las reivindicaciones, que comprende una mutación. En una forma de realización de preferencia, el polipéptido FGF23 comprende una mutación que confiere mayor estabilidad. De más preferencia, la mutación está en el aminoácido 176 (arginina) con relación a ID. SEC. Nº 2 o es una mutación en el aminoácido 179 (arginina) con relación a ID. SEC. Nº 2.

La invención incluye un inhibidor de FGF23. El inhibidor puede ser una molécula que reduzca el nivel de ARNm que codifica el polipéptido FGF23, una molécula que reduzca el nivel del polipéptido FGF23 o una molécula que reduzca una actividad biológica de FGF23, según se define en la reivindicación 23. El inhibidor es un anticuerpo según se define en la reivindicación 23 o una molécula de ARN bicatenario que sirve para reducir el nivel de ARNm de FGF23 por interferencia de ARN. De más preferencia, el inhibidor es un anticuerpo que se une específicamente con FGF23 o un anticuerpo que se une específicamente con un receptor de FGF23.

La invención incluye una composición que comprende un ácido nucleico aislado que codifica FGF23 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención también incluye una composición que comprende un ácido nucleico aislado complementario a un ácido nucleico que codifica FGF23 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención también incluye una composición que comprende un polipéptido FGF23 aislado y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención también incluye una composición que comprende un anticuerpo que se une específicamente con FGF23 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención también incluye una composición que comprende un ácido nucleico aislado que codifica una forma mutante de FGF23 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención también incluye una composición que comprende un ácido nucleico aislado...

1. Un ácido nucleico aislado que comprende ID. SEC. Nº 1, codificando dicho ácido nucleico un factor 23 de crecimiento de fibroblastos (FGF23).

2. Un ácido nucleico aislado incluido en el Depósito DSMZ con el Nº DSM 13530.

3. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 1, comprendiendo dicho ácido nucleico aislado además un ácido nucleico que codifica un polipéptido marcador unido de manera covalente al mismo.

4. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 3, en el que dicho polipéptido marcador se selecciona del grupo constituido por un polipéptido marcador myc, un polipéptido marcador de glutatión S-transferasa, un polipéptido marcador de proteína fluorescente verde, un polipéptido marcador myc-piruvato cinasa, un polipéptido marcador His6, un polipéptido marcador de hemaglutinina del virus de la gripe, un polipéptido marcador flag y un polipéptido marcador de proteína de unión a la maltosa.

5. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 1, comprendiendo dicho ácido nucleico además un ácido nucleico que especifica una secuencia promotora/reguladora unida de manera operativa al mismo.

6. Un vector que comprende el ácido nucleico aislado de la reivindicación 1.

7. El vector de la reivindicación 6, comprendiendo dicho vector además un ácido nucleico que especifica una secuencia promotora/reguladora unida de manera operativa al mismo.

8. Una célula recombinante aislada que comprende el ácido nucleico aislado de la reivindicación 1, no siendo la célula recombinante una célula madre embrionaria humana.

9. Una célula recombinante aislada que comprende el vector de la reivindicación 6, no siendo la célula recombinante una célula madre embrionaria humana.

10. Un ácido nucleico aislado complementario a un ácido nucleico de la reivindicación 1, estando dicho ácido nucleico complementario en una orientación antisentido.

11. Un vector que comprende el ácido nucleico aislado de la reivindicación 10.

12. El vector de la reivindicación 11, comprendiendo dicho vector además un ácido nucleico que especifica una secuencia promotora/reguladora unida de manera operativa al mismo.

13. Una célula recombinante aislada que comprende el ácido nucleico aislado de la reivindicación 10.

14. Un mamífero transgénico no humano que comprende un ácido nucleico aislado de la reivindicación 1.

15. Un ácido nucleico aislado, que comprende una secuencia que tiene 99-100% de identidad con ID. SEC. Nº 1, teniendo el polipéptido codificado por el ácido nucleico la capacidad de unirse a un receptor de FGF y de alterar el transporte de fosfato.

16. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 15, que comprende una mutación que confiere mayor estabilidad en dicho FGF23.

17. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 15, en el que dicha mutación se selecciona del grupo constituido por una mutación en el ácido nucleico que codifica el aminoácido 176 (arginina) con relación a ID. SEC. Nº 2 y una mutación en el ácido nucleico que codifica el aminoácido 179 (arginina) con relación a ID. SEC. Nº 2.

18. Un polipéptido aislado que comprende un factor 23 de crecimiento de fibroblastos (FGF23) codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1, comprendiendo dicho polipéptido una mutación que confiere mayor estabilidad en dicho FGF23, y en el que dicha mutación se selecciona del grupo constituido por una mutación en el aminoácido 176 (arginina) con relación a ID. SEC. Nº 2 y una mutación en el aminoácido 179 (arginina) con relación a ID. SEC. Nº 2.

19. Un anticuerpo que se une específicamente al polipéptido de la reivindicación 18.

20. Un anticuerpo que inhibe una actividad del polipéptido de la reivindicación 18.

21. Una composición que comprende el anticuerpo de la reivindicación 19 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

22. Una composición que comprende el anticuerpo de la reivindicación 20 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

23. Un inhibidor del factor 23 de crecimiento de fibroblastos (FGF23), siendo dicho inhibidor una molécula que reduce el nivel de ARNm que codifica el polipéptido FGF23, una molécula que reduce el nivel del polipéptido FGF23 o una molécula que reduce una actividad biológica del FGF23; estando dicho polipéptido codificado por un ácido nucleico de la reivindicación 1 y dicho inhibidor se selecciona de

24. Una composición que comprende el ácido nucleico aislado de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

25. Una composición que comprende el ácido nucleico aislado de la reivindicación 10 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

26. Una composición que comprende el ácido nucleico aislado de la reivindicación 15 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

27. Una composición que comprende el ácido nucleico aislado de la reivindicación 16 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

28. Una composición que comprende el ácido nucleico aislado de la reivindicación 17 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

29. Una composición que comprende el polipéptido FGF23 aislado de la reivindicación 18 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

30. Un procedimiento para producir una proteína aislada que tiene la actividad biológica del factor 23 de crecimiento de fibroblastos (FGF23) que comprende

31. Un procedimiento in vitro para diagnosticar un trastorno hipofosfatémico en un mamífero, comprendiendo dicho procedimiento poner una muestra biológica obtenida de dicho mamífero en contacto con un reactivo que detecta la presencia o ausencia de un ácido nucleico según la reivindicación 17, en el que la presencia de dicho ácido nucleico es una indicación de que dicho mamífero está afectado con dicho trastorno hipofosfatémico, diagnosticando de ese modo dicho trastorno hipofosfatémico en dicho mamífero, en el que el factor 23 de crecimiento de fibroblastos (FGF23) está codificado por un ácido nucleico según la reivindicación 1.

32. El procedimiento de la reivindicación 31, en el que dicho trastorno hipofosfatémico es el raquitismo hipofosfatémico autosómico dominante (ADHR).

33. El procedimiento de la reivindicación 31, en el que dicha muestra biológica se selecciona del grupo constituido por sangre y orina.

34. El procedimiento de la reivindicación 31, en el que dicho reactivo es un ácido nucleico.

35. El procedimiento de la reivindicación 31, en el que dicho reactivo está marcado de manera detectable.

36. El procedimiento de la reivindicación 31, en el que dicho reactivo está marcado de manera detectable con un marcador seleccionado del grupo constituido por un radioisótopo, un compuesto bioluminescente, un compuesto quimioluminiscente, un compuesto fluorescente, un quelato metálico y una enzima.

37. Un procedimiento in vitro para diagnosticar un trastorno hipofosfatémico en un mamífero, comprendiendo dicho procedimiento poner dicha muestra biológica obtenida de dicho mamífero en contacto con un reactivo que detecta la presencia o ausencia de un polipéptido aislado según la reivindicación 18, en el que la presencia de dicha forma mutante del polipéptido FGF23 es una indicación de que dicho mamífero está afectado con dicho trastorno hipofosfatémico, diagnosticando de ese modo dicho trastorno hipofosfatémico en dicho mamífero.

38. El procedimiento de la reivindicación 37, en el que dicho trastorno hipofosfatémico es el raquitismo hipofosfatémico autosómico dominante (ADHR).

39. El procedimiento de la reivindicación 37, en el que dicha muestra biológica se selecciona del grupo constituido por sangre y orina.

40. El procedimiento de la reivindicación 37, en el que dicho reactivo es un anticuerpo.

41. Un procedimiento in vitro para diagnosticar un trastorno hipofosfatémico en un mamífero, comprendiendo dicho procedimiento poner dicha muestra biológica obtenida de dicho mamífero en contacto con un reactivo que detecta el nivel del polipéptido del factor 23 de crecimiento de fibroblastos (FGF23) en dicha muestra, en el que un nivel elevado del polipéptido FGF23 en dicha muestra, con relación al nivel del polipéptido FGF23 en una muestra obtenida en un mamífero de control, es una indicación de que dicho mamífero está afectado con dicho trastorno hipofosfatémico, diagnosticando de ese modo dicho trastorno hipofosfatémico en dicho mamífero, en el que dicho factor 23 de crecimiento de fibroblastos (FGF23) está codificado por un ácido nucleico según la reivindicación 1 ó 15.

42. El procedimiento de la reivindicación 41, en el que dicho trastorno hipofosfatémico se selecciona del grupo constituido por el raquitismo hereditario ligado al cromosoma X (XLH), el raquitismo hipofosfatémico hereditario (HHRH), la enfermedad hipofosfatémica de los huesos (HBD), el raquitismo hipofosfatémico autosómico dominante (ADHR), la osteomalacia inducida por tumores, el síndrome del nevus epidérmico, la displasia fibrosa y la nefrolitiasis.

43. El procedimiento de la reivindicación 41, en el que dicha muestra biológica se selecciona del grupo constituido por sangre y orina.

44. El procedimiento de la reivindicación 41, en el que dicho reactivo es un anticuerpo contra FGF23.

45. El procedimiento de la reivindicación 41, en el que dicho reactivo está marcado de manera detectable.

46. El procedimiento de la reivindicación 41, en el que dicho reactivo está marcado de manera detectable con un marcador seleccionado del grupo constituido por un radioisótopo, un compuesto bioluminescente, un compuesto quimioluminiscente, un compuesto fluorescente, un quelato metálico y una enzima.

47. Un procedimiento in vitro para diagnosticar la osteomalacia inducida por tumores en un paciente, comprendiendo dicho procedimiento detectar la expresión o falta de la misma de FGF23 en dicho tumor obtenido de dicho paciente, en el que la expresión de FGF23 es indicativa de que dicho paciente tiene osteomalacia inducida por tumores, en el que dicho factor 23 de crecimiento de fibroblastos (FGF23) está codificado por un ácido nucleico según la reivindicación 1 ó 15.

48. Uso de un inhibidor del factor 23 de crecimiento de fibroblastos (FGF23) según la reivindicación 23 o un anticuerpo que se une específicamente con FGF23 para la preparación de un medicamento para tratar un trastorno hipofosfatémico en un mamífero, en el que dicho inhibidor se selecciona del grupo constituido por un inhibidor que reduce el nivel de ARNm que codifica el polipéptido FGF23 en dicho mamífero, un inhibidor que reduce el nivel del polipéptido FGF23 en dicho mamífero y un inhibidor de la actividad biológica del FGF23 en dicho mamífero.

49. El procedimiento de la reivindicación 48, en el que dicho trastorno hipofosfatémico se selecciona del grupo constituido por el raquitismo hereditario ligado al cromosoma X (XLH), el raquitismo hipofosfatémico hereditario (HHRH), la enfermedad hipofosfatémica de los huesos (HBD), el raquitismo hipofosfatémico autosómico dominante (ADHR), la osteomalacia inducida por tumores, el síndrome del nevus epidérmico, la displasia fibrosa y la nefrolitiasis.