DISAGNOSTICOS Y TERAPIAS PARA ENFERMEDADES ASOCIADOS CON RECEPTOR EMPAREJADO DE PROTEINA G ADIPOR1 (ADIPOR1).

Un método para diagnosticar cirrosis hepática en un mamífero que comprende los pasos de i) determinar la cantidad de un mARN de AdipoR1 en una muestra tomada de dicho mamífero,

ii) determinar la cantidad de mARN de AdipoR1 en mamíferos saludables y/o enfermos; donde la muestra es una muestra de (a) tejido hepático, (b) tejido esplénico o (c) tejido pancreático y la cantidad de mARN de AdipoR1 en la muestra es indicativa del mamífero que tiene cirrosis hepática si: (a) AdipoR1 es sobreexpresado en tejido hepático, (b) AdipoR1 es sobreexpresado en tejido esplénico, o (c) AdipoR1 es subexpresado en tejido pancreático; en comparación con la expresión en mamíferos saludables

La presente invención está en el campo de la biología molecular, mas particularmente, la presente invención está relacionada con secuencias de ácidos nucleicos y secuencias de aminoácidos de AdipoR1 humano y su uso para el diagnóstico de cirrosis de hígado. Antecedentes de la Invención Receptores Emparejados de Proteína G

AdipoR1 es un receptor emparejado de proteína G de siete transmembranas (GPCR) [Yamauchi et al., (2003), WO0112662, WO200190304]. Muchos procesos biológicos medicamente importantes son mediados por rutas de transducción de señal que involucran proteínas G [Lefkowitz, (1991)]. La familia de receptores emparejados de proteína G (GPCRs) incluye receptores para hormonas, neurotransmisores, factores de crecimiento, y virus. Ejemplos específicos de GPCRs incluyen receptores para agentes de tal diversidad como dopamina, calcitonina, hormonas adrenérgicas, endotelina, cAMP, adenosina, acetilcolina, serotonina, histamina, trombina, cinina, hormona estimulante de folículo, opsinas, gen-1 de diferenciación endotelial, rodopsinas, odorantes, citomegalovirus, las mismas proteínas G, proteínas efectoras tal como fosfolipasa C, adenil ciclasa, y fosfodiesterasa, y proteínas activadoras tales como proteína quinasa A y proteína quinasa C.

Las GPCRs poseen siete dominios conservados abarcados por membrana que conectan por lo menos ocho asas hidrofílicas divergentes. Las GPCRs, también conocidas como receptores de siete transmembrana, 7TM, han sido caracterizados por incluir estos siete tramos conservados como hidrofóbicos de aproximadamente 20 a 30 amino ácidos, conectando por lo menos ocho asas hidrofílicas divergentes. La mayoría de los GPCRs tienen residuos individuales de cisteína conservados en cada una de las primeras dos asas extracelulares, que forman enlaces disulfato que se cree que estabilizan la estructura funcional de la proteína. Las siete regiones transmembrana son designadas como TM1, TM2, TM3, TM4, TM5, TM6, y TM7. TM3 está siendo implicado con transducción de señal. Fosforilación y lipidación (pamitilación o farnesilación) de residuos de cisteína pueden influenciar la transducción de señal de algunos GPCRs. La mayoría de los GPCRs contienen sitios potenciales de fosforilación dentro de la tercera asa citoplásmica y/o el terminal carboxi. Para varios GPCRs, tales como el receptor beta-adrenérgico, la fosforilación por proteína quinasa A y/o quinasas de receptor específico es mediadora de la insensibilidad del receptor.

Para algunos receptores, los sitios de enlace de ligando de GPCRs se cree que comprenden alvéolos hidrofílicos formados por varios dominios de transmembrana GPCR. Los alvéolos hidrofílicos están rodeados por residuos hidrofóbicos de los GPCRs. El lado hidrofílico de cada hélice de transmembrana GPCR es postulado para tener el frente hacia adentro y formar un sitio de enlace ligando polar. TM3 está siendo implicado con varios GPCRs como teniendo un sitio de enlace ligando, tal como el residuo de aspartato TM3. Serinas TM5, una asparagina TM6, y fenilalaninas o tirosinas TM6 o TM7 también están implicadas en el enlace del ligando.

Los GPCRs están emparejados dentro de la célula por proteínas G heterotriméricas a varias enzimas intracelulares, canales de iones, y transportadores. Diferentes subunidades alfa de proteína G preferencialmente estimulan efectores particulares para modular varias funciones biológicas en una célula. La fosforilación de residuos citoplasmáticos de GPCRs es un mecanismo importante para la regulación de algunos GPCRs. Por ejemplo, en una forma de transducción de señal, el efecto de enlace de hormona es la activación de la enzima, adenilato ciclasa, dentro de la célula. Activación de enzimas por hormonas es dependiente de la presencia del nucleótido GTP. GTP también influencia enlace hormonal. Una proteína G conecta el receptor de hormona a adenilato ciclasa. La proteína G intercambia GTP por GDP enlazado cuando es activado por un receptor de hormona. La forma cargadora de GTP entonces se enlaza a adenilato ciclasa activada. La hidrólisis de GTP a GDP, catalizada por la misma proteína G, retorna a la proteína G a su forma basal, inactiva. Por lo tanto, la proteína G sirve un papel doble, como un intermedio que transmite la señal del receptor al efector, y como un reloj que controla la duración de la señal.

Por los últimos 15 años, casi 350 agentes terapéuticos que enfocan receptores 7TM han sido exitosamente introducidos en el mercado. Esto indica que estos receptores tienen una historia establecida, comprobada como objetivos terapéuticos. Claramente, hay una necesidad para identificación y caracterización de receptores adicionales que puedan jugar un papel en prevenir, mejorar, o corregir problemas o enfermedades incluyendo, pero no limitado a, infecciones tales como infecciones bacterianas, de hongos, de protozoos y virales, particularmente aquellas causadas por virus de VIH, cáncer, alergias incluyendo asma, enfermedades cardiovasculares incluyendo fallo cardiaco agudo, hipotensión, hipertensión, angina pectoris, infarto del miocardio, enfermedades hematológicas, enfermedades genito-urinarias incluyendo incontinencia urinaria e hiperplasia benigna de la próstata, osteoporosis, problemas del sistema nervioso periférico y central incluyendo dolor, enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson, enfermedades respiratorias, enfermedades metabólicas, enfermedades inflamatorias, enfermedades gastroenterológicas, enfermedades del sistema endocrino, enfermedades dermatológicas, enfermedades de músculos o del esqueleto, enfermedades inmunológicas, enfermedades de desarrollo o enfermedades del sistema reproductivo. Tecnología TaqMan / perfilamiento de expresión

TaqMan es una técnica recientemente desarrollada, en la cual la liberación de un pigmento fluorescente reportador de una sonda de hibridación en tiempo real durante una reacción en cadena de polimerasa (PCR) es proporcional a la acumulación del producto de PCR.

La cuantificación está basada en la parte temprana, linear de la reacción, y determinando el ciclo umbral (CT), en el cual la fluorescencia encima del fondo es primero detectada.

Tecnologías de expresión de genes pueden ser útiles en varias áreas de descubrimiento y desarrollo de fármacos, tales como identificación de objetivo, optimización de guía, e identificación de mecanismos de acción. La tecnología TaqMan puede ser usada para comparar diferencias entre perfiles de expresión de tejido normal y tejido enfermo. Perfilamiento de expresión ha sido usado en identificación de genes, que son sobre-regulados o sub-regulados en una variedad de enfermedades. Una aplicación interesante de perfilamiento de expresión es monitoreo temporal de cambios en expresión de genes durante progresión de enfermedades y tratamiento con fármacos o en pacientes contra individuos saludables. La premisa en éste acercamiento es que cambios en el patrón de expresión de genes en respuesta a estímulos fisiológicos o ambientales (por ejemplo, fármacos) puede servir como claves indirectas sobre genes causantes de enfermedad u objetivos de fármacos. Además, los efectos de fármacos con eficacia establecida sobre patrones de expresión genética global pueden proveer una guía, o una firma genética, contra la cual puede ser comparado un nuevo candidato de fármaco. AdipoR1

La secuencia de nucleótido de AdipoR1 es accesible en bases de datos públicas con el número de acceso NM_015999 y es dado en SEQ ID NO:1. La secuencia de amino ácido de AdipoR1 es representada en SEQ will NO:2.

Los receptores de adiponectina, ADIPOR1 y ADIPOR2, sirven como receptores para adiponectina globular y de longitud completa y son mediadores de actividades aumentadas de ligando AMPK y PPARalfa, como también oxidación de ácidos grasos y absorción de glucosa por adiponectina [Yamauchi et al., (2003)]. Yamauchi et al. [Yamauchi et al., (2003)] aislaron cADNs codificando ADIPOR1 y ADIPOR2 por clonación de expresión.

El receptor AdipoR1 es publicado en [Yamauchi et al., (2003)].

Métodos para diagnosticar cirrosis de hígado, basado en biopsia de hígado, son conocidos en la técnica [Olga et al, 2003]. Resumen de la Invención

Aquí se revelan asociaciones novedosas de enfermedades de polipéptidos y polinucleótidos de AdipoR1. La invención comprende un método para diagnosticar cirrosis de Hígado de acuerdo a la reivindicación 1. Breve Descripción de los Dibujos

1. Un método para diagnosticar cirrosis hepática en un mamífero que comprende los pasos de i) determinar la cantidad de un mARN de AdipoR1 en una muestra tomada de dicho mamífero, ii) determinar la cantidad de mARN de AdipoR1 en mamíferos saludables y/o enfermos; donde la muestra es una muestra de (a) tejido hepático, (b) tejido esplénico o (c) tejido pancreático y la cantidad de mARN de AdipoR1 en la muestra es indicativa del mamífero que tiene cirrosis hepática si:

(a) AdipoR1 es sobreexpresado en tejido hepático, (b) AdipoR1 es sobreexpresado en tejido esplénico, o

(c) AdipoR1 es subexpresado en tejido pancreático; en comparación con la expresión en mamíferos saludables.