Un procedimiento de medir la concentración de hierro en una muestra,

que se caracteriza por poner en contacto el hierro contenido en la muestra con un indicador metalocrómico para hierro en presencia de 0,05 a 100 mM de ion de litio y determinar la concentración de hierro sobre la base del grado de coloración resultante

Procedimiento para determinar la concentración de hierro.

Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento de medir la concentración de hierro en una muestra mediante un procedimiento directo usando un indicador metalocrómico para hierro, en la que el procedimiento se lleva a cabo en presencia de ion litio.

Técnica anterior

La medición de la concentración de hierro en suero y plasma se ha utilizado para el diagnóstico de anemia, anemia ferropénica, cirrosis hepática, y es uno de los elementos importantes que se deben medio en el campo del diagnóstico clínico.

Como procedimiento de medición de la concentración de hierro habitualmente se ha empleado, por ejemplo, el análisis colorimétrico usando varios indicadores metalocrómicos tales como, por ejemplo, dipiridilo y o-fenantrolina. Desde los puntos de vista de sensibilidad, especificidad, solubilidad etc., más habitualmente se ha usado un indicador metalocrómico para el hierro tal como batofenantrolina, 2-nitroso-5-(N-propil-N-sulfopropilamino)-fenol (nitroso-PSAP), sal disódica de 3-(2-piridil)-5,6-bis[2-(ácido 5-furilsulfónico)]-1,2,4-triazina, tripiridil-triazina y ferrozina.

Dado que todos estos indicadores metalocrómicos sólo pueden reaccionar con hierro bivalente, es necesario usar un agente reductor con el fin de reducir el hierro trivalente cuando se usan dichos indicadores metalocrómicos. Como agentes reductores para hierro trivalente se conocen ácido L-ascórbico, ácido tioglicólico, clorhidrato de hidroxilamina, hidroquinona, hidrosulfito, sulfito sódico, sulfato de hidrazina y metabisultito (pirosulfito).

Todos los átomos de hierro en suero existen en forma unida a la transferrina, que es un tipo de serogloblulina. Por tanto, con el fin de medir la concentración total de hierro en suero, es necesario liberar el hierro de la transferrina y generar hierro libre antes de realizar la medición de la concentración de hierro. En cuanto a un procedimiento de liberación del hierro unido de la transferrina, se conocen, por ejemplo, el Procedimiento Estándar Internacional, en el que se ha incorporado un procedimiento de extracción proteica (Manual of Clinical Laboratory Method, ed. de Masamitsu Kanehara, rev. 32 ed., pág. 579, publicado el 20 de febrero de 2005 por Kanehara & Co., Ltd.) y el método modificado de Matsubara, que se ha destacado como dato básico durante el procedimiento para establecer el Procedimiento Estándar Internacional (Manual of Clinical Laboratory Method, ed. de Masamitsu Kanehara, rev. 32 ed., 1^er número, pág. 580-581, publicado el 20 de febrero de 2005 por Kanehara & Co., Ltd.). De acuerdo con estos procedimientos, después de extraer la proteína en una muestra en la que se va a medir la concentración de hierro, se añade a la muestra un indicador metalocrómico para medir la absorbancia y, por tanto, se puede medir la concentración total de hierro en una muestra.

Además, en los últimos años, asociado con el desarrollo de analizadores automáticos se está realizando actualmente de forma habitual una prueba clínica de laboratorio usando un analizador automático. El uso de dicho analizador automático es económico porque los volúmenes de la muestra y de la solución de reactivo para la medición pueden reducirse y tiene una ventaja en cuanto a la capacidad de procesar un gran número de muestras al mismo tiempo. En consecuencia, se desea que la medición de la concentración de hierro en suero también se realice usando un analizador automático. No obstante, dado que el Procedimiento Estándar Internacional y el método modificado de Matsubara requieren un tratamiento de extracción proteica antes de realizar la medición de hierro, existe el problema de que es difícil aplicar estos procedimientos a la medición usando un analizador automático.

Por otro lado, existe un procedimiento de medir la concentración de hierro denominado "procedimiento colorimétrico directo" (en lo sucesivo denominado "p directo"), en el que la medición de la concentración de hierro se realiza añadiendo un agente reductor y un indicador metalocrómico directamente a una muestra (por ejemplo, la referencia 1 que no es una patente: Manual of Clinical Laboratory Method, ed. de Masamitsu Kanehara, rev. 32 ed., 1er número, p. 579, publicado el 20 de febrero de 2005 por Kanehara & Co., Ltd.). Dado que, al contrario que el Procedimiento Estándar Internacional descrito en lo que antecede, este procedimiento no requiere el tratamiento de extracción de proteínas, se puede aplicar al sistema usando un analizador automático. Por tanto, en el campo de los análisis clínicos de laboratorio, se ha extendido el uso del método directo de medir la concentración de hierro usando un analizador automático

No obstante, sigue existiendo el problema de que el valor medido obtenido mediante el método directo usando un analizador automático es menor en comparación con el obtenido por el Procedimiento Estándar Internacional. En el Procedimiento Estándar Internacional, en una muestra se puede liberar el hierro de la transferrina completamente (100%) porque la muestra se somete al tratamiento de extracción de proteína, mientras que el hierro no se puede liberar completamente de la transferrina en el método directo usando un analizador automático, y se ha notificado que el porcentaje de hierro liberado (grado de liberación) está en un intervalo de aproximadamente 93 a 95% (51 Congreso Plenario de la Sociedad Japonesa de Medicina de Laboratorio, presentación Nº 0-76, 2004) y esto se ha considerado una de las causas que dan lugar a un problema como el descrito en lo que antecede.

Por tanto, en la situación actual, se ha deseado el establecimiento de un procedimiento para medir la concentración de hierro que pueda proporcionar el mismo nivel de valor medido que el obtenido mediante el Procedimiento Estándar Internacional y que se pueda aplicar al sistema de analizador automático.

Documento 1 que no es una patente: Manual of Clinical Laboratory Method, ed. de Masamitsu Kanehara, rev. 32 ed., 1er número, pág. 579, publicado el 20 de febrero de 2005 por Kanehara & Co., Ltd.

Divulgación de la invención

La presente invención se ha realizado a la luz de la situación anterior y tiene un objeto de proporcionar un procedimiento para medir la concentración directa mediante un método directo, que pueda proporcionar un valor medido equivalente al obtenido mediante el Procedimiento Estándar Internacional, y un reactivo y un kit para usar en el procedimiento.

La presente invención se ha realizado para alcanzar el objeto descrito en lo que antecede y comprende los aspectos siguientes:

Es decir, los presentes autores han estudiado de forma intensiva un modo para resolver el problema descrito en lo que antecede y han encontrado que al realizar la medición de la concentración de hierro mediante el método directo en presencia de ion litio se estimula la liberación de hierro de la transferrina y la reacción del hierro con un indicador metalocrómico para hierro procede estequiométricamente y, por tanto, se consigue la presente invención.

Hasta ahora, como indicador metalocrómico para el hierro habitualmente se han usado sales de sodio, tales como batofenantrolinasulfonato de sodio, sal de 3-(2-piridil)-5,6-bis[2-(ácido 5-furilsulfónico)]-1,2,4-triazina disódica, pero un efecto tal como el proporcionado por la presente invención no se ha obtenido con estas sales de sodio. Asimismo, no se ha encontrado ningún ejemplo práctico que use una sal de litio como sal de estos indicadores...

1. Un procedimiento de medir la concentración de hierro en una muestra, que se caracteriza por poner en contacto el hierro contenido en la muestra con un indicador metalocrómico para hierro en presencia de 0,05 a 100 mM de ion de litio y determinar la concentración de hierro sobre la base del grado de coloración resultante.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el indicador metalocrómico para hierro es ácido batofenantrolinasulfónico o una sal del mismo, 2-nitroso-5-(N-propil-N-sulfopropilamino)-fenol o 3-(2-piridil)-5,6-bis[2-(ácido 5-furilsulfónico)]-1,2,4-triazina o una sal de los mismos.

3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el ion litio deriva de una sal de litio.

4. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el indicador metalocrómico para hierro es ácido batofenantrolinasulfónico o una sal del mismo.

5. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en que el hierro contenido en una muestra se reduce a ion bivalente mediante la presencia de un agente reductor.

6. Un kit para medir la concentración de hierro, que comprende una primera solución de reactivo que contiene un agente reductor y una segunda solución de reactivo que contiene un indicador metalocrómico para hierro, y el ion litio está contenido en al menos una de la primera solución de reactivo o la segunda solución de reactivo, en la que la concentración del ion litio en una solución de reacción para medir la concentración de hierro es de 0,05 a 100 mM.

7. El kit de la reivindicación 6, en el que dicho kit comprende una primera solución de reactivo que contiene un agente reductor e ion litio y una segunda solución de reactivo que contiene un indicador metalocrómico para hierro.

8. El kit de la reivindicación 6, en el que el indicador metalocrómico para hierro es ácido batofenantrolinasulfónico o una sal del mismo.

9. El kit de la reivindicación 6, en el que la concentración de ion litio en la primera solución de reactivo o la segunda solución de reactivo es 0,1-100 mM.