DERIVADOS HALOGENADOS ANTIMITÓTICOS DE LOS ALCALOIDES DE VINCA.

Ditartrato de vinflunina

Los alcaloides dímeros del Catharanthus roseus y sus derivados, normalmente denominados alcaloides de Vinca, se han utilizado ampliamente en quimioterapia anticancerosa desde hace una treintena de años. Están representados por cuatro 5 productos:

- dos compuestos naturales, la vinblastina y la vincristina,

- dos productos de hemisíntesis, la vindesina obtenida a partir de la vinblastina y la vinorelbina, sintetizada a partir de los alcaloides monómeros precursores, 10 catarantina y vindolina.

Vinblastina Vincristina

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Vindesina Vinorelbina

Estructura de los alcaloides de Vinca utilizados en quimioterapia

En el marco de nuestros trabajos de investigación con el fin de obtener nuevos 20 derivados de dicha familia que puedan conducir a nuevas aplicaciones en quimioterapia anticancerosa, se ha adoptado un modo de trabajo original que consiste en utilizar la reactividad excepcional de los medios superácidos, susceptible de inducir profundas

modificaciones en dichas moléculas altamente funcionalizadas.

Hemos preparado con anterioridad una serie de compuestos difluorados en posición 20', que hoy en día resultan inaccesibles por los métodos clásicos de síntesis (documentos FR 2 707 988 del 21.07.93, y WO 95/03312), cuyas propiedades farmacológicas resultan particularmente interesantes. 5

Fórmula general de los compuestos descritos en el documento FR 2 707 988

La aplicación de dicha química inhabitual en dicho tipo de moléculas complejas nos 10 ha permitido preparar el ditartrato de vinflunina, igualmente inaccesibles por la química clásica.

La presente invención, realizada en el Centro de Investigación Pierre Fabre, tiene como objeto el ditartrato de vinflunina y su aplicación en terapéutica.

La invención se refiere a una sal de la vinflunina con un ácido farmacéuticamente 15 aceptable, el ácido tartárico.

La 20',20'-difluoro-3',4'-dihidrovinorelbina o vinflunina es un compuesto reivindicado en la patente FR 2 707 988 de 21.07.93 (WO 95/03312).

El ditartrato de vinflunina puede ser preparado como se indica a continuación:

El derivado de fórmula siguiente es disuelto en el derivado clorado, 20 preferentemente el cloroformo o el 2,2-dicloropropano, o una mezcla que contiene cloroformo o 2,2-dicloropropano, y añadido al medio superácido, y manteniendo la temperatura de éste entre -45 y -35ºC. El derivado difluorado, la 4'-desoxi-20',20'-difluorovinblastina, constituye entonces el producto final mayoritario de la reacción. La dosificación por CLHP analítica indica una proporción de este compuesto del orden de 25 50%.

Esta reacción es representada en el esquema siguiente:

**(Ver fórmula)**

Otros agentes generadores de iones superelectrófilos como el tetrabromuro de carbono CBr4, el dibromometano CH2Br2 o el tribromuro de boro BBr3 conducen igualmente a la 4'-desoxi-20',20'-difluorovinblastina de manera mayoritaria.

Este método constituye así un procedimiento de preparación de la 4'-desoxi-5 20',20'-difluorovinblastina, con un rendimiento superior al obtenido mediante la técnica anterior.

La 4'-desoxi-20',20'-difluorovinblastina obtenida siguiendo esta vía puede a continuación experimentar una contracción de su ciclo C', como se ha descrito anteriormente, por reacción con la N-bromosuccinimida en el cloruro de metileno en 10 presencia de un ácido como el ácido trifluoroacético a una temperatura inferior a -10ºC. Tras la neutralización en un medio básico, el compuesto intermedio, la 9'-bromoindolenina de la 4'-desoxi-20',20'-difluorovinblastina, poco estable y no aislado, experimenta una hidrólisis preferentemente en una mezcla [cloruro de metileno : agua : tetrahidrofurano], en presencia o no de tetrafluoroborato. De la misma manera que anteriormente, la adición de 15 AgBF4 permite aumentar la velocidad de la reacción.

El compuesto mayoritario obtenido con un rendimiento del orden de 80% corresponde a la 20',20'-difluoro-3',4'-dihidrovinorelbina o vinflunina. El esquema siguiente resume esta reacción:

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**(Ver fórmula)**

El encadenamiento de estas dos etapas constituye así un procedimiento de síntesis de la vinflunina, más ventajoso que el anterior en el sentido de que:

1) la reacción de fluoración en el medio superácido es realizada a partir de compuestos naturales como la vinblastina o la 3',4'-anhidrovinblastina, a los que puede 5 accederse directamente por extracción de las hojas de Catharanthus roseus, y ya no a partir de la vinorelbina, producto de hemisíntesis más costoso,

2) el rendimiento de la reacción de difluoración por este nuevo procedimiento es de aproximadamente 50% frente a 25% con el procedimiento anterior, 10

3) la purificación por cromatografía de los compuestos obtenidos, particularmente de la 4'-desoxi-20',20'-difluorovinblastina es menos delicada que en el caso anterior.

El ejemplo siguiente ilustra la invención, sin limitar por ello el alcance de la misma. 15 Las características espectroscópicas confirman la estructura de los compuestos obtenidos

según la invención.

EJEMPLO 1

20',20'-difluoro-3',4'-dihidrovinorelbina (vinflunina). 5

Se disolvieron 90 g (0,108 moles) de 4'-desoxi-20',20'-difluorovinblastina en 800 ml de cloruro de metileno enfriado a -45ºC, a los que se añadieron 10,4 ml (0,135 moles) de ácido trifluoroacético. Se dispone el montaje protegido de la luz, y se vierte durante aproximadamente 30 minutos una solución compuesta de 19,3 g (0,108 moles) de N-10 bromosuccinimida en una mezcla de 200 ml de cloruro de metileno y 10,4 ml (0,135 moles) de ácido trifluoroacético, procurando que la temperatura del medio no ascienda por encima de -45ºC.

Tras 30 minutos, se neutralizó la mezcla por adición de 300 ml de una solución al 10% de NaHCO3, a continuación inmediatamente una solución de 23,4 g (0,12 moles) de 15 tetrafluoroborato de plata en una mezcla de 300 ml de tetrahidrofurano y 100 ml de agua. Se dejó regresar a la temperatura ambiente bajo agitación durante aproximadamente dos horas.

Tras la filtración, la fase orgánica es separada, lavada dos veces con 150 ml de agua. Tras el secado sobre MgSO4, la solución es evaporada, y el residuo es disuelto en 20 500 ml de metanol además evaporado para obtener 97 g de residuo seco, que contiene 88% de 20',20'-difluoro-3',4'-dihidrovinorelbina (vinflunina).

La purificación es realizada por CLHP preparativa sobre sílice injertada C18 (granulometría 15-25 µ), con un diluyente compuesto de agua, de ácido acético, de acetato de amonio, de metanol y de acetonitrilo. Las fracciones purificadas son 25 concentradas a la mitad, llevadas a un pH = 7 y extraídas dos veces mediante tolueno. La fase orgánica es lavada tres veces mediante agua destilada, dosificada además mediante HPLC analítica.

La vinflunina, en solución en el tolueno, es extraída mediante una solución acuosa que contiene exactamente dos equivalentes (moles) de ácido tartárico. La fase acuosa es 30 a continuación liofilizada para obtener el ditartrato de vinflunina.

Como los alcaloides antitumorales del Catharanthus roseus, el compuesto preparado según la invención es “un veneno para el huso mitótico”.

Dicha propiedad se ha confirmado mediante la medición de la inhibición de la polimerización de la tubulina en microtúbulos en presencia del compuesto de la invención, según el método descrito por R.C. Weisenberg (Science 177, 1196-7, 1972).

Teniendo en cuenta dicha propiedad farmacológica característica de los alcaloides de Vinca, el compuesto de la presente invención se puede utilizar en quimioterapia 5 anticancerosa.

Las preparaciones farmacéuticas que contienen dicho principio activo se pueden preparar para la administración por vía oral, intravenosa o subcutánea, de forma clásica, bien conocida por el experto en la materia.

10 Reivindicaciones

1. Ditartrato de vinflunina.

2. Preparación farmacéutica que contiene el ditartrato de vinflunina según la 5 reivindicación 1.

3. Preparación farmacéutica según la reivindicación 2, caracterizada porque se encuentra bajo una forma para la administración por vía oral, intravenosa, o subcutánea.

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4. Ditartrato de vinflunina según la reivindicación 1 para su utilización como medicamento.

5. Ditartrato de vinflunina según la reivindicación 1 para su utilización como medicamento destinado a la quimioterapia anticancerosa. 15

6. Utilización del ditartrato de vinflunina según la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento destinado a la quimioterapia anticancerosa.

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