Procedimiento y composiciones de ensayo para determinar proteasas en suero, particularmente proteína C activada.

Un procedimiento para determinar la cantidad de una proteasa en un muestra de un fuido corporal,

que comprende las etapas de: a) poner en contacto un composición de moléculas de anticuerpos inmovilizados, que comprende moléculas de anticuerpos fijas a un soporte sólido, con un inhibidor irreversible de proteasas en una cantidad de inhibidor suficiente para inhibir la actividad de proteasas asociada con la composición, para formar una primera mezcla, teniendo las citadas moléculas de anticuerpos capacidad para inmunorreaccionar con una proteasa para formar un complejo de inmunorreacción que tiene actividad de proteasas y capacidad para unirse a un inhibidor reversible; b) mantener la primera mezcla durante un período de tiempo suficiente para que el citado inhibidor irreversible inhiba la actividad de proteasas de la composición de moléculas de anticuerpos inmovilizados y se forme una composición de anticuerpos inmovilizados exenta de actividad de proteasas; c) separar de la composición de anticuerpos inmovilizados exenta de actividad de proteasas, formada en la etapa (b), el exceso de inhibidor irreversible; d) mezclar una muestra de un fuido corporal con un tampón inhibidor de la coagulación que contiene una cantidad inhibidora de proteasas de un inhibidor reversible de proteasas, para formar una segunda mezcla; e) mezclar la citada segunda mezcla con la composición de anticuerpos exenta de actividad de proteasas, formada en la etapa (c), para formar una mezcla de inmunorreacción que tiene una fase líquida y una fase sólida; f ) mantener la citada mezcla de inmunorreacción en condiciones de inmunorreacción durante un período de tiempo suficiente para que la proteasa presente en la citada muestra corporal inmunorreaccione con las moléculas de anticuerpos presentes sobre el citado soporte sólido y se forme un primer producto de inmunorreacción de fase sólida; g) separar del citado primer producto de inmunorreacción de fase sólida el inhibidor reversible para formar un producto de inmunorreacción de fase sólida exento de inhibidor; y h) determinar la cantidad de actividad de proteasas presente en el producto de inmunorreacción de fase sólida exento de inhibidor, formado en la etapa (g), y por lo tanto, la cantidad de proteasa en la muestra corporal.

Tipo: Resumen de patente/invención.

Solicitante: THE SCRIPPS RESEARCH INSTITUTE.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 10666 NORTH TORREY PINES ROAD,LA JOLLA, CA 92037.

Inventor/es: GRIFFIN, JOHN, H., GRUBER, ANDRAS.

Fecha de Publicación: 1 de Febrero de 1998.

Fecha Concesión Europea: 3 de Diciembre de 1997.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12Q1/56 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen factores de coagulación de la sangre, p. ej. trombina, tromboplastina, fibrinógeno.
G01N33/573 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › para enzimas o isoenzimas.

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