Procedimiento de preparación de derivados de glicosaminoglicanos donadores de óxido nítrico,

nitroderivados obtenidos y su uso en tratamiento de úlceras crónicas, como las úlceras de pie diabético, las úlceras producidas por quemaduras y las úlceras de presión. Más en particular, se refiere a procedimientos para la preparación de nitroderivados de heparina no fraccionada (HNF), derivados de heparinas de bajo peso molecular (HBPM) y derivados de heparinas de muy bajo peso molecular (HMBPM), todos ellos con capacidad para donar óxido nítrico, así como a su uso en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de úlceras crónicas, y más en concreto de úlceras de pie diabético, úlceras producidas por quemaduras y/o úlceras de presión.

Procedimiento de preparación de derivados de glicosaminoglicanos donadores de óxido nítrico, nitroderivados obtenidos y su uso en tratamiento de úlceras crónicas.

Campo de la invención

La invención se refiere a un procedimiento de preparación de derivados de glicosaminoglicanos donadores de óxido nítrico para el tratamiento de úlceras crónicas, en concreto pero de forma no limitativa para el tratamiento de úlceras de pie diabético, úlceras de quemados y úlceras de presión. Más en particular, se refiere a composiciones de derivados de heparina no fraccionada (HNF), derivados de heparinas de bajo peso molecular (HBPM) y derivados de heparinas de muy bajo peso molecular (HMBPM), todos ellos con capacidad para donar óxido nítrico en el tratamiento de úlceras crónicas, y más en concreto en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de úlceras crónicas.

Estado de la técnica

La ulceración de algunas zonas corporales, como el pie o las extremidades inferiores, es una complicación significativa de enfermedades crónicas como la diabetes con una incidencia anual ligeramente superior al 2% (Abbott CA, et al (2002) The North-West Diabetes Foot Care Study: incidence of, and risk factors for, new diabetic foot ulceration in a community-based patient cohort. Diabet Med, 19(5):377-84). Se estima que un 15% de los pacientes con diabetes desarrollarán úlceras en algún momento de su vida (Reiber G. E. (1996) The epidemiology of diabetic foot problems. Diabet Med. 13 Suppl 1:S6-1l) y que alrededor de un 10%-30% de los que presenten úlceras progresarán con la amputación del miembro (Lipsky B.A. (2004) Medical treatment of diabetic foot infections. Clin, Infed Dis, 39 Suppl 2:S104-14). Además, esto se complica en el caso en el que se produce una isquemia en la extremidad inferior en la que aparece la úlcera, siendo producida en la mayor parte de los casos por insuficiencia de riego sanguíneo por alta incidencia de trombosis.

En relación con la mortalidad a los 5 años de los pacientes a los que se les practica una amputación de miembros inferiores, es de 50-60% (Reiber G. E. (1996) The epidemiology of diabetic foot problems. Diabet, Med, 13 Suppl 1:S6-11). Se han utilizado diversos métodos para el tratamiento del paciente con pie diabético que incluyen el control metabólico estricto, profilaxis de los factores de nesgo modificables, desbridamiento, empleo de apósitos, tratamiento antimicrobiano de las infecciones, eliminación de la presión del área lesionada, uso de injertos de piel, administración de factores de crecimiento y el empleo de métodos de revascularización en caso de existir indicación.

En la mayoría de los casos el tratamiento de este tipo de úlceras crónicas se realiza por vía tópica, por ejemplo, el empleo de apósitos en las úlceras como las del píe diabético es comúnmente utilizado. Entre los nuevos tipos de apósitos estudiados en ensayos clínicos controlados se encuentran los apósitos que se basan en membrana polimérica semipermeable, Promogran (matriz de colágeno), alginato. carboximetilceluiosa, hialuronan y presión subatmosférica (Eldor R. Y col. (2004) New and experimental approaches to treatment of diabetic foot ulcers: a comprehensive review of emerging treatment strategies. Diabet. Med. 21(11):1161-73). También se han desarrollado métodos para crear sustitutos de piel que son colocados sobre la lesión ulcerosa. El Dermagraft® se produce sembrando fibroblastos de dermis humana sobre un andamio sintético de material bioabsorbible que ha demostrado ser eficaz en las úlceras de bajo grado con una mayor proporción de curación en un menor tiempo (Marston WA, et al. (2003) Dermagraft Diabetic Foot Ulcer Study Group. The efficacy and safety of Dermagraft® in Improving the healing of chronic diabetic foot ulcers: results of a prospectivo randomized trial. Diabetes Care 28:1701-5). El Apligraf® consta de una capa de dermis compuesta de fibroblastos humanos en una matriz de colágeno tipo I bovino y una capa de epidermis formada de queratinocitos humanos. De manera similar, este sustituto de piel ha mostrado asociarse significativamente a una mayor y más rápida curación de lesiones cuando se aplica en úlceras neuropáticas de bajo grado y no infectadas (Veves A., et al (2001) Graftskin, a human skin equivalent, is effective in the management of noninfected neuropathic diabetic foot ulcers: a prospectiva randomized multicenter clinical trial. Diabetes Care 24:290-5). En un ensayo clínico fase III, aleatorizado, de doble ciego y controlado con placebo, el Factor de Crecimiento Derivado de Plaquetas (Piatelet Derived Growth Factor, abreviado PDGF) en forma de gel mostró ser eficaz y seguro para el tratamiento de pacientes diabéticos que presentaban úlceras neuropáticas con buena perfusión sanguínea (Wieman TJ., et al (1998) Clinical efficacy of beclapermin (rh PDGF-BB) gel. Diabetes Care 21 (5):822-7). La mayoría de los pacientes (95%) incluidos en este estudio tenían úlceras con un área < 10 cm² según la evaluación por planimetría. El gel de becaplermina 100 μg/g, en comparación con placebo, aumentó significativamente la proporción de cierre completo de la lesión en un 43% (50 vs. 35%, p = 0.007) y redujo el tiempo para lograr dicho efecto en un 32% (86 vs. 127 días, p = 0.013). Los resultados satisfactorios con el PDGF o becaplermina (Regranex®) llevaron a su aprobación para el tratamiento de las úlceras neuropáticas en las extremidades inferiores del diabético que se extienden hasta el tejido subcutáneo o más profundamente y tienen un adecuado flujo sanguíneo (Brem H., Sheehan P., Bouiton AJ. (2004) Protocol for treatment of diabetic foot ulcers. Am. J. Surg. 187(5A): 1S-1OS).

La definición de pie diabético propuesta por el Grupo de Consenso sobre Pie Diabético de la Sociedad Española de Angiología y Cirugía Vascular es: "Alteración clínica de base etiopatogénica neuropática inducida por la hiperglicemia mantenida, en la que con o sin coexistencia de isquemia, y previo desencadenante traumático, se produce la lesión y/o ulceración del pie".

En cuanto a tratamientos por vía parenteral local de este tipo de afección, hace unos años se ha publicado un método de administración de un agente cicatrizante como el Factor de Crecimiento Epidérmico (EGF), que consiste en la infiltración de una solución de la biomolécula en la lesión mediante varias inyecciones (WO 03053458). Este tratamiento ha mostrado tener efectividad en la prevención de la amputación del pie diabético pero tiene el inconveniente de que resulta traumático para el paciente ya que la aplicación de inyecciones en la lesión es muy dolorosa y en cada tratamiento deben aplicarse varias inyecciones durante varias semanas. También, en el documento EP 1499317 se divulga un método de tratamiento de complicaciones diabéticas tales como el pie diabético con inhibidores del intercambiador sodio-hidrógeno de tipo 1 (NHE-1), y en la publicación internacional WO 02077155 se describe que el factor de crecimiento de queratinocitos (KFG-2) promueve o acelera la curación de heridas.

Finalmente, la publicación internacional WO2007087759 se refiere a una composición farmacéutica que contiene microesferas con factores de crecimiento de epidermis para administración parenteral para pacientes que poseen afecciones crónicas en la piel, como son las úlceras de pie diabético. Muchas otras patentes se han enfocado sobre otros métodos de acelerar el rango de cicatrización. Sin embargo, ninguno de estos métodos ha probado ser ampliamente eficaz.

En la literatura no patente, por otro lado, se han publicado algunos estudios que divulgan ciertos resultados alentadores para enfermos de pie diabético tratados con heparinas de bajo peso molecular (HBPM), sobre la base de que las heparinas son conocidos antitrombóticos y antiinflamatorios que pueden mejorar la microcirculación vascular. En "Effect of Dalteparin of healing of chronic foot ulcers in diabetic patients with peripheral arterial occlusive disease", Diabetes Care, vol. 26(9), Septiembre 2003, así como en la publicación del mismo grupo de M. Kalani, et al. titulado "Beneficial effects of dalteparin on haemostatic function and local tissue oxygenation in patients with diabetes, severe vascular disease and foot ulcers", Thrombosis Research. 120, 653-661, 2007 en los se describen ensayos clínicos que demuestran que una heparina de bajo peso molecular (HBPM) tal como la dalteparina mejora la evolución de las úlceras de pie diabético en pacientes con enfermedad arterial oclusiva periférica. Sin embargo, llama la atención que en estos artículos... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento de preparación de nitroderivados de heparinas que comprende la etapa de hacer reaccionar primero la heparina con un haluro de amonio cuaternario, obteniendo una sal de amonio cuaternario de heparina, y a continuación hacer reaccionar la sal de amonio cuaternario de heparina obtenida:

a) o bien con una mezcla nitrante en un medio orgánico; o

b) con un compuesto halonitroalifático o halonitroaromático en un medio orgánico,

para producir un nitroderivado de heparina que tiene grupos -ONO₂ unidos covalentemente a la estructura sacarídica.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el haluro de amonio cuaternario es un haluro de benzalconio o de bencetonio.

3. Procedimiento según las reivindicaciones 1 ó 2 en el que la mezcla nitrante de la etapa a) se selecciona del grupo que consiste en anhídrido acético-ácido nítrico, ácido sulfúrico-ácido nítrico, y ácido fosfórico-ácido nítrico.

4. Procedimiento según la reivindicación 3, en el que la mezcla nitrante de la etapa a) es anhídrido acético-ácido nítrico.

5. Procedimiento según la reivindicación 4, en el que la relación molar entre el anhídrido acético y el ácido nítrico varía entre 0,3 y 15.

6. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que la relación molar entre el anhídrido acético y el ácido nítrico varía entre 0,5 y 2,5.

7. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el medio orgánico de la etapa a) se selecciona entre diclorometano y formamida.

8. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la temperatura de reacción está comprendida entre -15ºC y +5ºC.

9. Procedimiento según las reivindicaciones 1 ó 2 anteriores, en el que el compuesto halonitroalifático o halonitroaromático de la etapa b) tiene la fórmula:

donde X es un halógeno y n es un número entero comprendido entre 1 y 20.

10. Procedimiento según la reivindicación 9 anterior, en el que n está comprendido entre 2 y 6.

11. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 9-10 anteriores en el que el medio orgánico de la etapa b) se selecciona del grupo que consiste en diclorometano, cloroformo, dimetilformamida y formamida.

12. Procedimiento según la reivindicación 11 anterior en el que el medio orgánico es diclorometano.

13. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 9-12 anteriores en el que la relación molar entre el compuesto halonitroalifático o halonitroaromático y la heparina está entre 1 y 10.

14. Procedimiento según la reivindicación 13 anterior, en el que la relación molar entre el compuesto halonitroalifático o halonitroaromático y la heparina está entre 3 y 8.

15. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 9-14 anteriores en el que la temperatura de reacción está comprendida entre +20ºC y +45ºC.

16. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 anteriores en el que la heparina se selecciona del grupo que consiste en heparinas no fraccionadas (HNF), heparinas de bajo peso molecular (HBPM) y heparinas de muy bajo peso molecular (HMBPM).

17. Compuesto nitroderivado de heparina obtenido según una cualquiera de las reivindicaciones 1-16 caracterizado porque comprende una unidad disacarídica repetitiva con la siguiente fórmula de Markush:

donde R¹ es SO₃M, COCH₃ o H, R² es SO₃M, H o NO₂, R³ es H o NO₂ y R⁴ es M o (CH₂)_mONO₂, siendo M un metal alcalino o alcalino-térreo, m un número entero comprendido entre 1 y 20, y n un número entero comprendido entre 1 y 66.

18. Uso de un nitroderivado de heparina obtenido según una cualquiera de las reivindicaciones 1-16 anteriores en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de úlceras crónicas.

19. Uso según la reivindicación 18 anterior en el que las úlceras crónicas son úlceras de pie diabético, úlceras por presión o úlceras provocadas por quemaduras.