Factor de crecimiento neurotrófico.

Uso de un factor de crecimiento neurotrófico codificado por una molécula de ácido nucleico que tiene la secuencia de ácido nucleico desde la posición 81 hasta la 419 de la secuencia ilustrada en la figura n.

º 1 en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir trastornos neurales.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E05112473.

Solicitante: JANSSEN PHARMACEUTICA NV.

Nacionalidad solicitante: Bélgica.

Dirección: TURNHOUTSEWEG 30 2340 BEERSE BELGICA.

Inventor/es: MASURE, STEFAN LEO JOZEF, CIK, MIROSLAV, MEERT, THEO FRANS, GEERTS,HUGO,ALFONS,GABRIEL, VER DONCK,LUC.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A01K67/027 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA.A01K CRÍA DE ANIMALES; AVICULTURA; APICULTURA; PISCICULTURA; PESCA; ANIMALES PARA CRIA O REPRODUCCIÓN, NO PREVISTOS EN OTRO LUGAR; NUEVAS VARIEDADES DE ANIMALES.A01K 67/00 Cría u obtención de animales, no prevista en otro lugar; Nuevas razas de animales. › Nuevas razas de vertebrados.
  • A61K31/711 A […] › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 31/00 Preparaciones medicinales que contienen ingredientes orgánicos activos. › Acidos desoxirribonucleicos naturales, es decir conteniendo unicamente 2'-desoxirribosas unidas a la adenina, la guanina, la citosina o la timina y teniendo enlaces 3'-5' fosfodiester.
  • A61K38/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00).
  • A61K38/18 A61K […] › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › Factores de crecimiento; Reguladores de crecimiento.
  • A61K39/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53).
  • A61K45/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen ingredientes activos no previstos en los grupos A61K 31/00 - A61K 41/00.
  • A61K48/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen material genético que se introduce en las células del cuerpo vivo para tratar enfermedades genéticas; Terapia génica.
  • A61P1/00 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.Medicamentos para el tratamiento de trastornos del tracto alimentario o del aparato digestivo.
  • A61P1/08 A61P […] › A61P 1/00 Medicamentos para el tratamiento de trastornos del tracto alimentario o del aparato digestivo. › para las náuseas, cinetosis o vértigos; Antieméticos.
  • A61P1/10 A61P 1/00 […] › Laxantes.
  • A61P1/12 A61P 1/00 […] › Antidiarreicos.
  • A61P25/00 A61P […] › Medicamentos para el tratamiento de trastornos del sistema nervioso.
  • A61P25/04 A61P […] › A61P 25/00 Medicamentos para el tratamiento de trastornos del sistema nervioso. › Analgésicos que actúan sobre el sistema nervioso central, p.ej. opioides.
  • A61P25/14 A61P 25/00 […] › para el tratamiento de movimientos anormales, p.ej. corea, disquinesia.
  • A61P25/16 A61P 25/00 […] › Medicamentos contra el Parkinson.
  • A61P25/28 A61P 25/00 […] › de los problemas neurodegenerativos del sistema nervioso central, p. ej. noótropos, activadores del conocimiento, medicamentos para el tratamiento del Alzheimer o de otras formas de demencia.
  • A61P29/00 A61P […] › Agentes analgésicos, antipiréticos o antiinflamatorios que no actúan sobre el sistema nervioso central, p. ej. agentes antirreumáticos; Antiinflamatorios no esteroideos (AINEs).
  • A61P43/00 A61P […] › Medicamentos para usos específicos, no previstos en los grupos A61P 1/00 - A61P 41/00.
  • A61P9/00 A61P […] › Medicamentos para el tratamiento de trastornos en el aparato cardiovascular.
  • C07K14/475 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Factores de crecimiento; Reguladores de crecimiento.
  • C07K14/48 C07K 14/00 […] › Factor de crecimiento de tejido nervioso (NGF).
  • C07K16/22 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra factores de crecimiento.
  • C12N1/15 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › modificados por la introducción de material genético extraño.
  • C12N1/19 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
  • C12N1/21 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
  • C12N15/09 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
  • C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
  • C12Q1/02 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen microorganismos vivos.
  • G01N33/53 FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
  • G01N33/68 G01N 33/00 […] › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.

PDF original: ES-2479067_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Factor de crecimiento neurotrófico

La presente invención se refiere a un factor neurotrófico y, en particular, a la clonación y expresión de un miembro novedoso de la familia GDNF de factores neurotróficos, denominado en el presente documento como "enovina" (EVN, "enovin").

Introducción

Los factores neurotróficos están implicados en la diferenciación, desarrollo y mantenimiento neuronal. Estas proteínas pueden prevenir la degeneración y promover la supervivencia de diferentes tipos de células neuronales y por tanto son agentes terapéuticos potenciales para enfermedades neurodegenerativas. El factor neurotrófico derivado de la línea celular glial (GDNF) fue el primer miembro de una subfamilia creciente de factores neurotróficos estructuralmente diferenciados de las neurotrofinas. El GDNF es un miembro de la superfamilia de factores de crecimiento del factor p de crecimiento transformante (TGF-P), caracterizada por un patrón específico de siete residuos de cisterna sumamente conservados dentro de la secuencia de aminoácidos (Kingsley, 1994). El GDNF se purificó originalmente usando un ensayo basado en su capacidad para mantener la supervivencia y la función de neuronas dopaminérgicas del mesencéfalo ventral embrionario in vitro (Lin y otros, 1993). Otros tipos de células neuronales en los sistemas nerviosos central (SNC) o periférico (SNP) también responden a los efectos de supervivencia del GDNF (Henderson y otros, 1994, Buj-Bello y otros, 1995, Mount y otros, 1995, Oppenheim y otros, 1995). El GDNF se produce por células en una proforma inactiva, que se escinde específicamente en un sitio de reconocimiento de la RXXR furina para producir GDNF activo (maduro) (Lin y otros, 1993). La administración exógena de GDNF tiene potentes efectos neuroprotectores en modelos animales de la enfermedad de Parkinson, un trastorno neurodegenerativo común caracterizado por la pérdida de hasta el 70% de las células dopaminérgicas en la sustancia negra del cerebro (Beck y otros, 1995, Tomac y otros, 1995, Gash y otros, 1996, Choi-Lundberg y otros, 1997, Bilang-Bleuel y otros, 1997).

Recientemente, se han descubierto factores neurotróficos adicionales de la familia del GDNF. La neurturina (NTN) se purificó a partir de medio condicionado de células ovario de hámster chino (CHO) usando un ensayo basado en su capacidad para promover la supervivencia de neuronas simpáticas en cultivo (Kotzbauer y otros, 1996). La proteína NTN madura es similar en un 57% al GDNF maduro. La persefina (PSP) se descubrió mediante clonación usando PCR de cebador degenerado con ADN genómico como molde. La PSP madura, como el GDNF maduro, promueve la supervivencia de las neuronas dopaminérgicas del mesencéfalo ventral y de neuronas motoras en cultivo (Milbrandt y otros, 1998). La similitud de la proteína PSP madura con GDNF maduro y NTN es = 50%. La artemina (ARTN) se descubrió mediante búsqueda en base de datos de ADN y es un factor de supervivencia de neuronas simpáticas y sensoriales en cultivo (Baloh y otros, 1998b).

GDNF, NTN, PSP y ARTN requieren un complejo de receptor heterodimérico con el fin de llevar a cabo la transducción de señales intracelular en sentido 3. El GDNF se une a la subunidad alfa 1 del receptor de la familia de GDNF (GFRa-1; GFRa Nomenclatura Committee, 1997), una proteína de membrana fijada a glicosil-fosfatidil-inositol (glicosil-Ptdlns) (Jing y otros, 1996, Treanor y otros, 1996, Sanicola y otros, 1997). El complejo GDNF/GFRa-1 se une posteriormente a, y activa, el protooncogen cRET, una tirosina cinasa unida a membrana (Durbec y otros, 1996, Trupp y otros, 1996), dando como resultado la fosforilación de residuos de tirosina en cRET y posterior activación de las rutas de transducción de señal en sentido 3 (Worby y otros, 1996). Se han caracterizado varios otros miembros de la familia de GFRa de receptores de unión a ligando (Baloh y otros, 1997, Sanicola y otros, 1997, Klein y otros,

1997, Buj-Bello y otros, 1997, Suvanto y otros, 1997). Se han identificado GFRa-2 y GFRa-3 (Jing y otros, 1997, Masure y otros, 1998, Woby y otros, 1998, Naveilham y otros, 1998, Baloh y otros, 1998a) por varios grupos diferentes. GFRa-1 y GFRa-2 se expresan ampliamente en casi todos los tejidos y la expresión puede regularse mediante el desarrollo (Sanicola y otros, 1997, Widenfalk y otros, 1997).

GFRa-3 no se expresa en el sistema nervioso central en desarrollo o adulto, pero se expresa ampliamente en diversos ganglios simpáticos y sensoriales en desarrollo y adultos del sistema nervioso periférico (Widenfalk y otros,

1998, Naveilhan y otros, 1998, Baloh y otros, 1998a). Un cuarto miembro de la familia, GFRa-4, se clonó a partir de ADNc de pollo (Thompson y otros,1998). GFRa-1 es el receptor preferido para GDNF, mientras que GFRa-2 se une preferiblemente a NTN (Jing y otros, 1996, Treanor y otros, 1996, Klein y otros, 1997). El GFRa-4 de pollo forma un complejo de receptor funcional para PSP en combinación con cRET (Enokido y otros, 1998). Se mostró que las células que expresan tanto GFRa-3 como cRET no respondían a GDNF, NTN ni PSP (Worby y otros, 1998, Baloh y otros, 1998a). Recientemente, se ha mostrado que ART señaliza a través de cRET utilizando GFRa-3 como el receptor de unión a ligando preferido (Baloh y otros, 1998b). La superposición entre los factores neurotróficos y receptores GFRa es posible in vitro, ya que el GDNF puede unirse a GFRa-2 o GFRa-3 en presencia de cRET (Sanicola y otros, 1997, Trupp y otros, 1998) y NTN puede unirse a GFRa-1 con baja afinidad (Klein y otros, 1997). En resumen, GDNF, NTN, PSP y ART son parte de un sistema de señalización neurotrófico mediante el cual diferentes subunidades de unión a ligando (GFRa-1 a -4) pueden interaccionar con la misma subunidad de tirosina cinasa (cRET). La relevancia fisiológica de estos hallazgos in vitro se mostró recientemente en estudios de

deficiencia génica (revisado por Rosenthal, 1999), que muestran claramente que el GDNF interacciona con GFRa-1 in vivo, mientras que NTN es el ligando preferido para GFRa-2.

Los presentes inventores han identificado, clonado, expresado, localizado cromosómicamente y caracterizado enovina (EVN), el cuarto miembro de la familia de GDNF. El conocimiento de la proteína de EVN madura se ha ampliado con el descubrimiento de diferentes variantes de corte y empalme de ARNm funcionales y no funcionales. Además, se presentan datos de expresión, datos de unión de EVN a GFRa-3 y efectos in vitro de EVN sobre el crecimiento en exceso de neurita y la protección frente a la neurotoxicidad inducida portaxol en cultivos celulares de neuroblastoma humano SH-SY5Y diferenciado porestaurosporina.

Sumario de la invención

En la presente solicitud, se proporciona una molécula de ácido nucleico que codifica para un factor de crecimiento neurotrófico humano novedoso, "enovina", un vector de expresión que comprende dicha molécula de ácido nucleico, una célula huésped transformada con dicho vector, factor de crecimiento neurotrófico codificado por dicha molécula de ácido nucleico, enovina aislada, compuestos que actúan como agonistas o antagonistas de enovina y composiciones farmacéuticas que contienen el ácido nucleico o la proteína de enovina o los agonistas o antagonistas de la misma.

Descripción detallada de la invención

Según un primer aspecto de la presente invención se proporciona una molécula de ácido nucleico que codifica para un factor de crecimiento neurotrófico humano, denominado en el presente documento como enovina, que tiene la secuencia de aminoácidos ilustrada en la figura 21, o que codifica para un bioprecursor, derivado o equivalente funcional de dicho factor de crecimiento. Preferiblemente, dicha molécula de ácido nucleico es ADN y aún más preferiblemente una molécula de ADNc.

Preferiblemente, el ácido nucleico según la invención comprende la secuencia desde las posiciones 81 hasta 419 de la secuencia ilustrada en figura 1 y más preferiblemente desde las posiciones 81 hasta 422 y aún más preferiblemente la secuencia completa ilustrada en la figura 1.

Se cree que la molécula de ácido nucleico desde la posición 81 hasta 419 codifica para la secuencia de la proteína de enovina madura tras el tratamiento de la proforma de la proteína en el sitio de tratamiento RXXR presente en la proforma estable de dicha proteína de enovina.

Ventajosamente, la molécula de ácido nucleico según la invención puede usarse para expresar el factor de crecimiento neurotrófico humano según la invención, en una célula huésped o similar usando un vector de expresión apropiado.

Un vector de expresión incluye vectores que pueden expresar el ADN unido de manera funcional a secuencias reguladoras, tales como regiones promotoras,... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Uso de un factor de crecimiento neurotrófico codificado por una molécula de ácido nucleico que tiene la secuencia de ácido nucleico desde la posición 81 hasta la 419 de la secuencia ilustrada en la figura n.2 1 en la fabricación de

un medicamento para tratar o prevenir trastornos neurales.

2. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho trastorno neural se selecciona de cualquiera del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, trastornos neuronales asociados con secuencias de poliglutamina extendidas, tales como la enfermedad de Huntingdon, neuropatía periférica, lesión cerebral aguda,

tumores del sistema nervioso, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica, traumatismo nervioso periférico o lesión por exposición a neurotoxinas, neoplasia endocrina múltiple y enfermedad de Hirschsprung familiar, enfermedades asociadas con prión, enfermedad de Creutzfeld-Jacob y accidente cerebrovascular.

3. Uso de una molécula de ácido nucleico que codifica para un factor de crecimiento neurotrófico humano 15 denominado enovina y que tiene la secuencia de ácido nucleico desde la posición 81 hasta la 419 de la secuencia

ilustrada en la figura n.21 en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir trastornos neurales.

4. Uso según la reivindicación 3, en el que dicho trastorno neural se selecciona de cualquiera del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, trastornos neuronales asociados con secuencias de

poliglutamina extendidas, tales como la enfermedad de Huntingdon, neuropatía periférica, lesión cerebral aguda, tumores del sistema nervioso, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica, traumatismo nervioso periférico o lesión por exposición a neurotoxinas, neoplasia endocrina múltiple y enfermedad de Hirschsprung familiar, enfermedades asociadas con prión, enfermedad de Creutzfeld-Jacob y accidente cerebrovascular.


 

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