Un método in vitro para el diagnóstico diferencial de un individuo que sufre la enfermedad de Alzheimer frente a un individuo que sufre demencia con cuerpos de Lewy,

frente a un individuo que sufre la enfermedad de Parkinson sin demencia, frente a un individuo que sufre atrofia multisistémica y/o frente a un individuo que sufre parálisis supranuclear progresiva, donde fosfo-tau en el líquido cefalorraquídeo (LCR) se usa como un marcador neurológico

Diagnóstico diferencial de las enfermedades neurológicas.

Campo de la invención

La presente invención se refiere al campo del diagnóstico de las enfermedades neurológicas. La presente invención estipula un método nuevo para el diagnóstico diferencial de la enfermedad de Alzheimer frente a otras enfermedades neurológicas. Más particularmente, la presente invención estipula un método para el diagnóstico diferencial de la enfermedad de Alzheimer frente a la demencia con cuerpos de Lewy, frente a la enfermedad de Parkinson sin demencia, frente a la atrofia multisistémica y/o frente a la parálisis supranuclear progresiva.

Antecedentes de la invención

Se ha postulado el uso de tau y fosfo-tau como marcadores neurológicos en el diagnóstico de enfermedades neurológicas (Blennow et al., 1995; Vigo-Pelfrey et al., 1995; Andreasen et al., 1998; Andreasen et al., 1999a; Ishiguro et al., 1999). La proteína tau asociada al microtúbulo es un componente proteico principal de los filamentos helicoidales apareados (FHA) y los ovillos neurofibrilares (ONF), asociados a la enfermedad de Alzheimer (Brion et al., 1985; Delacourte y Defossez, 1986; Grundke-Iqbal et al., 1986; Kosik et al., 1986; Wood et al., 1986; Kondo et al., 1988). La proteína tau existe en diferentes isoformas, de las cuales entre 4 y 6 se encuentran en el cerebro del adulto pero sólo 1 isoforma se detecta en el cerebro del feto. La diversidad de las isoformas se genera a partir de un único gen del cromosoma humano 17 por empalme alternativo del ARNm (Himmler, 1989; Goedert et al., 1989; Andreadis et al., 1992). La característica más sorprendente de la proteína tau, según se deduce de la clonación molecular, es un tramo de 31 ó 32 aminoácidos, que se encuentra en la parte carboxilo terminal de la molécula, que puede repetirse 3 ó 4 veces. Otra diversidad se genera a través de inserciones de 29 ó 58 aminoácidos de longitud en la parte NH₂-terminal de las moléculas tau (Goedert et al., 1989). In vivo, tau promueve el ensamble y la estabilidad del microtúbulo en el compartimiento axonal de las neuronas mediante interacciones en las que participa su dominio de unión al microtúbulo que está ubicado en la región repetida de tau (255-381) (Lewis et al., 1988). En circunstancias normales el cerebro del adulto contiene 2 a 3 moles de fosfato por mol de tau (Selden y Pollard, 1983; Ksiezak-Reding et al., 1992). La fosforilación de diferentes sitios en la proteína tau normal según se estudió en ratas y seres humanos depende del estado de desarrollo (Lee et al, 1991; Bramblett et al., 1993; Goedert et al., 1993). Se detectaron variantes de tau de 60, 64 y 68 kDa que surgen como consecuencia de la fosforilación en áreas cerebrales que presentan ovillos neurofibrilares (Delacourte et al., 1990; Goedert et al., 1992; Flament et al., 1990. Greenberg y Davies, 1990). Estos cerebros contienen de 6 a 8 moles de fosfato por mol de tau (Ksiezak-Reding et al., 1992). En proteína tau aislada de FHA (tau de FHA), la fosforilación tiene lugar en varias posiciones (Iqbal et al., 1989; Lee et al., 1991; Hasegawa et al., 1992; Hanger et al., 1998; Buee et al., 1999).

La enfermedad de Alzheimer (EA) y la demencia frontotemporal (DFT) son los tipos más comunes de demencia degenerativa primaria asociada a una patología tau y tienen una prevalencia de 42-75% y 8-10%, respectivamente (Brun, 1993; Gustafson, 1993; Ebly et al., 1994). La patología filamentosa asociada a tau es decir los ovillos neurofibrilares (ONF), se encuentra congruentemente en la EA (Tomlinson y Corsellis, 1984) pero también en la DFT (Spillantini y Goedert, 1998). Las proteínas tau patológicas se encuentran tanto en la EA como en la DFT (Vermersch et al., 1995; Delacourte et al., 1996). No obstante, estudios en el tejido cerebral, han sugerido que la patología tau es diferente en la EA y en la DFT, lo que está posiblemente relacionado con el grado de fosforilación (Delacourte et al., 1996). Vanmechelen E. et al. (Neurosci. Lett. 2000, 285 (1): 49-52) encontraron que los niveles de tau fosforilada en las muestras de LCR es diferente en la EA y en la DFT. Otras formas de demencia asociadas a una patología tau incluyen la DFT familiar, la parálisis supranuclear progresiva (PSP), la degeneración corticobasal (DCB) y la panencefalitis esclerosante subaguda. En la actualidad no se comprende muy bien el papel de la hiperfosforilación en la patología de estas tauopatías.

La demencia con cuerpos de Lewy (DCL) es una enfermedad que se presenta con demencia progresiva o psicosis. Los signos de parkinsonismo, que pueden estar ausentes o son leves al comienzo, finalmente se vuelven comunes y la rigidez es generalmente severa. Los cuerpos de Lewy se encuentran profusamente en el tallo encefálico, el prosencéfalo basal, los núcleos hipotalámicos y la neocorteza. La demencia con cuerpos de Lewy se caracteriza por la ausencia relativa de ovillos y tau hiperfosforilada en el cerebro. La enfermedad de Parkinson (EP) es un tipo de enfermedad con cuerpos de Lewy que se presenta hacia la mitad de la vida o al final, que progresa muy gradualmente y tiene un curso prolongado. Se puede considerar como un ejemplo de enfermedad neuronal sistémica, que involucra principalmente al sistema nigroestriatal y dopaminérgico. La demencia con cuerpos de Lewy fue definida recientemente como una forma especial de demencia que requiere el manejo diferencial del paciente (Lebert et al., 1998; McKeith et al., 1999). La demencia con cuerpos de Lewy, que es sensible a los neurolépticos, es clínicamente muy difícil de diferenciar de la enfermedad de Alzheimer (McKeith et al., 1996; Ballard et al., 1998). La mayoría de los pacientes (más del 75%) son definidos neuropatológicamente como pacientes con enfermedad de Alzheimer si bien se estima que 15 a 25% de los pacientes con diagnóstico clínico de enfermedad de Alzheimer tienen demencia con cuerpos de Lewy (Hooten et al., 1998). Como la demencia con cuerpos de Lewy es más sensible al tratamiento con acetilcolinesterasa, la diferenciación de la demencia con cuerpos de Lewy de la enfermedad de Alzheimer es esencial para la optimización del tratamiento (Levy et al., 1994; Perry et al., 1994; Wilcock et al., 1994).

El péptido ß-amiloide en el líquido cefalorraquídeo (LCR) y tau en LCR fueron validados para diferenciar la enfermedad de Alzheimer del envejecimiento normal, la depresión y la enfermedad de Parkinson (Galasko et al., 1998; Kanai et al., 1998; Hulstaert et al., 1999) y estos marcadores están bien posicionados para el diagnóstico diferencial de esos trastornos (Andreasen et al., 1999b). Más controversial, sin embargo, es su papel en la diferenciación de la enfermedad de Alzheimer de afecciones estrechamente relacionadas como la demencia con cuerpos de Lewy y de otras demencia asociadas con patologías tau como la demencia frontotemporal, la atrofia multisistémica (AMS) y/o la parálisis supranuclear progresiva. En la actualidad, no existen métodos exactos para el diagnóstico diferencial de estas enfermedades neurológicas.

Objetivos de la invención

Es un objetivo de la presente invención estipular un método in vitro para el diagnóstico diferencial de un individuo que sufre la enfermedad de Alzheimer frente a un individuo que sufre demencia con cuerpos de Lewy.

Es un objetivo de la presente invención estipular un método in vitro para el diagnóstico diferencial de un individuo que sufre la enfermedad de Alzheimer frente a un individuo que sufre la enfermedad de Parkinson sin demencia.

Es un objetivo de la presente invención estipular un método in vitro para el diagnóstico diferencial de un individuo que sufre la enfermedad de Alzheimer frente a un individuo que sufre atrofia multisistémica.

Es un objetivo de la presente invención estipular un método in vitro para el diagnóstico diferencial de un individuo que sufre la enfermedad de Alzheimer frente a un individuo que sufre parálisis supranuclear progresiva. Es un objetivo de la presente invención estipular el uso de un anticuerpo que reconozca específicamente a fosfo-tau para el diagnóstico diferencial, in vitro, en el líquido cefalorraquídeo (LCR) de un individuo que sufre la enfermedad de Alzheimer frente a un individuo que sufre demencia con cuerpos de Lewy, frente a un individuo que sufre la enfermedad de Parkinson sin demencia, frente...

1. Un método in vitro para el diagnóstico diferencial de un individuo que sufre la enfermedad de Alzheimer frente a un individuo que sufre demencia con cuerpos de Lewy, frente a un individuo que sufre la enfermedad de Parkinson sin demencia, frente a un individuo que sufre atrofia multisistémica y/o frente a un individuo que sufre parálisis supranuclear progresiva, donde fosfo-tau en el líquido cefalorraquídeo (LCR) se usa como un marcador neurológico.

2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende los pasos de:

3. Un método de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2 que se caracteriza además porque el nivel de fosfo-tau se determina inmunológicamente, haciendo uso de un anticuerpo que reconoce específicamente a fosfo-tau.

4. El uso de un anticuerpo que reconoce específicamente a fosfo-tau para el diagnóstico diferencial, in vitro, en el líquido cefalorraquídeo (LCR) de un individuo que sufre la enfermedad de Alzheimer frente a un individuo que sufre demencia con cuerpos de Lewy, frente a un individuo que sufre la enfermedad de Parkinson sin demencia, frente a un individuo que sufre atrofia multisistémica y/o frente a un individuo que sufre parálisis supranuclear progresiva.