Compuestos y procedimientos para modular la expresión de ApoB.

Un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monómeros de longitud,

que comprende una región salto de 2'- desoxirribonucleótido flanqueada por cada lado por un ala, en el que cada ala comprende de forma independiente 1 a 3 monómeros modificados de alta afinidad que son nucleótidos modificados con azúcar que comprenden un puente entre la posición 4' y 2' del azúcar, y en el que el compuesto antisentido corto está dirigido a un ácido nucleico que codifica ApoB para uso en terapia.

Compuestos y procedimientos para modular la expresiïn de ApoB

ANTECEDENTES

La elecciïn como diana de secuencias de genes causantes de enfermedad se sugiriï por primera vez hace casi 40 aïos (Belikova et al., Tet. Lett., 1967, 37, 3557-3562) , y la actividad antisentido se demostrï en cultivo celular una dïcada despuïs (Zamecnik et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1978, 75, 280-284) . Una ventaja de la tecnologïa antisentido en el tratamiento de una enfermedad o afecciïn que procede de un gen causante de enfermedad es que es un enfoque genïtico directo que tiene la capacidad para modular la expresiïn de genes causantes de enfermedad especïficos.

En general, el principio detrïs de la tecnologïa antisentido es que un compuesto antisentido se hibrida con un ïcido nucleico diana y afecta la modulaciïn de la actividad o funciïn de la expresiïn gïnica, tal como transcripciïn, traducciïn o corte y empalme. La modulaciïn de la expresiïn gïnica puede lograrse, por ejemplo, por degradaciïn de diana o inhibiciïn basada en la ocupaciïn. Un ejemplo de la modulaciïn de la funciïn diana del ARN por degradaciïn es la degradaciïn basada en RNasa H del ARN diana tras la hibridaciïn con un compuesto antisentido similar a ADN. Otro ejemplo de la modulaciïn de la expresiïn gïnica por degradaciïn diana es ARN interferente (ARNi) . El ARNi es una forma de silenciamiento de genes mediado por antisentido que implica la introducciïn de ARNbc que conduce a la reducciïn especïfica de secuencia de niveles de ARNm endïgeno elegido como diana. La especificidad de secuencia hace que los compuestos antisentido sean extremadamente atractivos como herramientas para elegir como diana la validaciïn y la funcionalizaciïn gïnica, ademïs de herramientas de investigaciïn para identificar y caracterizar nucleasas y como agentes terapïuticos para modular selectivamente la expresiïn de genes que participan en la patogïnesis de una cualquiera de una variedad de enfermedades.

La tecnologïa antisentido es un medio eficaz para reducir la expresiïn de uno o mïs productos gïnicos especïficos y, por tanto, se puede demostrar que son ïtiles ïnicamente en una serie de aplicaciones terapïuticas, de diagnïstico y de investigaciïn. Los nucleïsidos quïmicamente modificados se usan rutinariamente para la incorporaciïn en compuestos antisentido para potenciar una o mïs propiedades tales como resistencia a nucleasas, farmacocinïtica o afinidad por un ARN diana.

A pesar de la expansiïn del conocimiento desde el descubrimiento de la tecnologïa antisentido, queda sin satisfacer una necesidad de compuestos antisentido con mayor eficacia, toxicidad reducida y menor coste. Hasta la presente descripciïn no se han empleado modificaciones de alta afinidad en el diseïo de compuestos antisentido cortos para reducir ARN diana in vivo. Esto es debido a asuntos referentes al grado de especificidad diana que tendrïa una secuencia de 15 nucleïtidos o mïs corta cuando se empleara para reducir la diana en un sistema vivo. Estudios previos han descrito que se logra mayor especificidad y, por tanto, mayores posibilidades de potencia, por compuestos antisentido de entre 16 y 20 bases nucleotïdicas de longitud.

El documento WO 2004/044181 (ISIS PHARMACEUTICALS, INC.) describe compuestos antisentido, composiciones y mïtodos para modular la expresiïn de la apolipoproteïna B.

La presente descripciïn describe que la incorporaciïn de nucleïtidos de alta afinidad quïmicamente modificados en compuestos antisentido permite que compuestos antisentido cortos de aproximadamente 8-16 bases nucleotïdicas de longitud sean ïtiles en la reducciïn de ARN diana en animales con aumento de la potencia y mejora del ïndice terapïutico. Por tanto, se proporcionan aquï compuestos antisentido cortos que comprenden modificaciones de nucleïtidos de alta afinidad ïtiles para reducir un ARN diana in vivo. Tales compuestos antisentido cortos son eficaces a dosis inferiores a las de los compuestos antisentido previamente descritos, permitiendo una reducciïn en la toxicidad y el coste del tratamiento.

SUMARIO DE LA INVENCIïN

La invenciïn proporciona un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monïmeros de longitud, que comprende una regiïn de salto en 2’-desoxirribonucleïtido flanqueada por cada lado por un ala, en la que cada ala comprende independientemente de 1 a 3 monïmeros modificados de alta afinidad que son nucleïtidos modificados con azïcar que comprenden un puente entre la posiciïn 4’ y 2’ del azïcar, y en el que el compuesto antisentido estï dirigido a un ïcido nucleico que codifica ApoB para uso en terapia.

La invenciïn tambiïn proporciona un mïtodo ex vivo de modular la expresiïn de ApoB poniendo en contacto un ïcido nucleico que codifica ApoB con un compuesto antisentido corto tal como se ha descrito anteriormente.

La invenciïn tambiïn proporciona un compuesto antisentido corto tal como se ha descrito anteriormente para uso en la reducciïn de la expresiïn de ApoB ARN en un animal.

La invenciïn tambiïn proporciona un compuesto antisentido corto tal como se ha descrito anteriormente para uso en el tratamiento de un trastorno cardiovascular en un animal.

La invenciïn tambiïn proporciona el uso del compuesto antisentido corto tal como se ha descrito anteriormente para la preparaciïn de un medicamento para la reducciïn de la expresiïn de ApoB ARN en un animal.

La invenciïn tambiïn proporciona el uso del compuesto antisentido corto tal como se ha descrito anteriormente para 5 la preparaciïn de un medicamento para tratar un trastorno cardiovascular en un animal.

Otros aspectos de la invenciïn se exponen en las reivindicaciones adjuntas.

SUMARIO DE LA DESCRIPCIïN

Se describen aquï compuestos antisentido cortos y mïtodos de uso de dichos compuestos para reducir la expresiïn del ARN diana en cïlulas o tejidos. En ciertas realizaciones, se describe aquï un mïtodo de reducir la expresiïn de una diana en un animal, que comprende administrar al animal un compuesto antisentido corto dirigido al ïcido nucleico de dicha diana. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos son compuestos oligonucleotïdicos. En ciertas realizaciones, los oligonucleïtidos antisentido cortos tienen una longitud de alrededor de 8 a 16, preferiblemente de 9 a 15, mïs preferiblemente de 9 a 14, mïs preferiblemente de 10 a 14, y comprenden una regiïn de salto flanqueada por cada lado por un ala, en la que cada ala consiste independientemente de 1 a 3 nucleïtidos. Entre los motivos preferidos se incluyen, pero no se limitan a, motivos ala-salto desoxi-ala seleccionados de 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2, 1-10-1, 2-8-2, 1-8-1, 3-6-3 ï 1-6-1. En una realizaciïn preferida, el oligonucleïtido antisentido corto comprende al menos una modificaciïn de alta afinidad. En una realizaciïn adicional, la modificaciïn de alta afinidad incluye nucleïtidos de alta afinidad quïmicamente modificados. En una realizaciïn preferida, cada ala consiste independientemente de 1 a 3 nucleïtidos modificados de alta afinidad. En una realidad, los nucleïtidos modificados de alta afinidad son nucleïtidos modificados con azïcar.

En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos exhiben mayor captaciïn en el intestino en comparaciïn con los compuestos antisentido de mayor longitud. Por tanto, tambiïn se describen aquï mïtodos de reducir una diana en un animal, que comprenden administrar por vïa oral los compuestos antisentido cortos de la presente descripciïn.

Tambiïn se describen mïtodos de tratamiento de un trastorno metabïlico en un animal, que comprenden administrar a un animal que necesite dicha terapia un compuesto antisentido corto dirigido a un ïcido nucleico implicado en la regulaciïn del metabolismo o aclaramiento de la glucosa, el metabolismo de los lïpidos, el metabolismo del colesterol o la seïalizaciïn de la insulina.

Tambiïn se describen mïtodos de incremento de la sensibilidad a la insulina, disminuciïn de la glucosa en sangre o disminuciïn de HbA1c en un animal, que comprenden administrar a dicho animal un compuesto antisentido corto dirigido a un ïcido nucleico que codifica una diana implicada en la regulaciïn del metabolismo o aclaramiento de la glucosa, el metabolismo de los lïpidos, el metabolismo del colesterol o la seïalizaciïn de la insulina.

Se describen mïtodos adicionales de disminuciïn del colesterol total en suero, LDL sïrica, VLDL sïrica, HDL sïrica,

triglicïridos sïricos, apolipoproteïna (a) sïrica o ïcidos grasos libres en un animal, que comprenden administrar a dicho animal un compuesto antisentido corto dirigido a un ïcido nucleico que codifica una diana implicada... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monïmeros de longitud, que comprende una regiïn salto de 2’desoxirribonucleïtido flanqueada por cada lado por un ala, en el que cada ala comprende de forma independiente 1 a 3 monïmeros modificados de alta afinidad que son nucleïtidos modificados con azïcar que comprenden un puente entre la posiciïn 4’ y 2’ del azïcar, y en el que el compuesto antisentido corto estï dirigido a un ïcido nucleico que codifica ApoB para uso en terapia.

2. El compuesto antisentido corto de la reivindicaciïn 1, para uso en:

(i) tratar un trastorno o enfermedad metabïlica o cardiovascular;

(ii) reducir el riesgo de cardiopatïa coronaria (CPC) o prevenir CPC en un sujeto;

(iii) ralentizar o detener la progresiïn de aterosclerosis en un sujeto, o prevenir la aterosclerosis; o

(iv) tratar hipercolesterolemia, hipercolesterolemia no familiar, hipercolesterolemia familiar, hipercolesterolemia familiar heterocigïtica, hipercolesterolemia familiar homocigïtica, dislipidemia mixta, aterosclerosis, un riesgo de desarrollar aterosclerosis, cardiopatïa coronaria, antecedentes de cardiopatïa coronaria, cardiopatïa coronaria de inicio precoz, uno o mïs factores de riesgo de cardiopatïa coronaria, diabetes de tipo II, diabetes de tipo II con dislipidemia, dislipidemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, hiperacidemia grasa, esteatosis hepïtica, esteatohepatitis no alcohïlica, o enfermedad de hïgado graso no alcohïlica.

3. Uso de un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monïmeros de longitud, que comprende una regiïn salto de 2’desoxirribonucleïtido flanqueada por cada lado por un ala, en el que cada ala comprende de forma independiente 1 a 3 monïmeros modificados de alta afinidad que son nucleïtidos modificados con azïcar que comprenden un puente entre la posiciïn 4’ y 2’ del azïcar, y en el que el compuesto antisentido corto estï dirigido a un ïcido nucleico que codifica ApoB, en la fabricaciïn de un medicamento para:

(i) tratar un trastorno o enfermedad metabïlica o cardiovascular;

(ii) reducir el riesgo de cardiopatïa coronaria (CPC) o prevenir CPC en un sujeto;

(iii) ralentizar o detener la progresiïn de aterosclerosis en un sujeto, o prevenir la aterosclerosis; o

(iv) tratar hipercolesterolemia, hipercolesterolemia no familiar, hipercolesterolemia familiar, hipercolesterolemia familiar heterocigïtica, hipercolesterolemia familiar homocigïtica, dislipidemia mixta, aterosclerosis, un riesgo de desarrollar aterosclerosis, cardiopatïa coronaria, antecedentes de cardiopatïa coronaria, cardiopatïa coronaria de inicio precoz, uno o mïs factores de riesgo de cardiopatïa coronaria, diabetes de tipo II, diabetes de tipo II con dislipidemia, dislipidemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, hiperacidemia grasa, esteatosis hepïtica, esteatohepatitis no alcohïlica, o enfermedad de hïgado graso no alcohïlica.

4. El compuesto antisentido corto o uso de cualquier reivindicaciïn precedente, en el que el sujeto a tratar es un ser humano.

5. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que la conformaciïn de cada uno de dichos nucleïtidos modificados con azïcar es, de forma independiente, !-D o ∀-L.

6. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que cada uno de dichos puentes comprende de forma independiente 1 o de 2 a 4 grupos unidos seleccionados de forma independiente de [C (R1) (R2) ]n-, -C (R1) =C (R2) -, -C (R1) =N-, -C (=NR1) -, -C (=O) -, -C (=S) -, -O-, -Si (R1) 2-, -S (=O) X-y -N (R1) -;

en los que x es 0, 1 ï 2;

n es 1, 2, 3 ï 4;

cada uno de R1 y R2 es, de forma independiente, H, un grupo protector, hidroxilo, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C5-C20 sustituido, radical heterociclo, radical heterociclo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, radical alicïclico C5-C7, radical alicïclico C5-C7 sustituido, halïgeno, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, acilo (C (=O) -H) , acilo sustituido, CN, sulfonilo (S (=O) 2-J1) o sulfoxilo (S (=O) -J1) ; y

cada uno de J1 y J2 es, de forma independiente, H, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C5-C20 sustituido, acilo (C (=O) -H) , acilo sustituido, un radical heterociclo, un radical heterociclo sustituido, aminoalquilo C1-C12, aminoalquilo C1-C12 sustituido o un grupo protector.

7. El compuesto antisentido corto o uso de la reivindicaciïn 6, en el que cada uno de dichos puentes es, de forma independiente, 4’-CH2-2’, 4’- (CH2) 2-2’, 4’-CH2-O-2’, 4’- (CH2) 2-O-2’ 4’-CH2-O-N (R1) -2’ ï 4’-CH2-N (R1) -O-2’-en los que cada R1 es, de forma independiente, H, un grupo protector o alquilo C1-C12.

8. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que al menos un enlace monomïrico es un enlace monomïrico modificado.

9. El compuesto antisentido o uso de la reivindicaciïn 8, en el que el enlace monomïrico modificado es un enlace fosforotioato.

10. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que cada enlace monomïrico es un enlace internucleosïdico fosforotioato.

11. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que tiene 10-13 monïmeros de longitud.

12. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que tiene 10-12 monïmeros de longitud.

13. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que tiene 10-11 monïmeros de longitud.

14. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que tiene 10 monïmeros de longitud.

15. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que tiene 11 monïmeros de longitud.

16. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que tiene 12 monïmeros de longitud.

17. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que tiene 13 monïmeros de longitud.

18. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que tiene 14 monïmeros de longitud.

19. El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que tiene un motivo seleccionado de 1-12-1; 2-10-2; 1-10-1; 1-10-2; 3-8-3; 2-8-2; 1-8-1; y 3-6-3, en el que el primer nïmero representa el nïmero de monïmeros en el ala 5’, el segundo nïmero representa el nïmero de monïmeros en el salto, y el tercer nïmero representa el nïmero de monïmeros en el ala 3’.