Anticuerpos contra el factor I de crecimiento similar a insulina y usos de los mismos.

Anticuerpo humano de unión a IGF-IR e inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-lR,

caracterizado porque dicho anticuerpo

a) es del isotipo IgG1,

b) muestra un valor de IC50 para la inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-IR no superior a 10 nM, y c) comprende una cadena pesada variable de secuencia SEC ID nº 1 y una cadena ligera variable de secuencia SEC ID nº 2, una cadena pesada variable de secuencia SEC ID nº 3 y una cadena ligera variable de secuencia SEC ID nº 4, o una cadena pesada variable de secuencia SEC ID nº 5 y una cadena ligera variable de secuencia SEC ID nº 6.

Anticuerpos contra el factor I de crecimiento similar a insulina y usos de los mismos.

La presente invención se refiere a anticuerpos contra el receptor 1 humano de crecimiento similar a insulina (IGF-IR) , a métodos para su producción, a composiciones farmacéuticas que contienen dichos anticuerpos y a usos de los mismos.

El receptor del factor I de crecimiento humano similar a insulina (IGF-1R, EC 2.7.112, antígeno CD 221) pertenece a la familia de las proteína tirosina quinasas transmembranales (LeRoith D. et al., Endocrin. Rev. 16:143-163, 1995, y Adams T.E. et al., Cell. Mol. Life Sci. 57 (2000) 1050-1063) . IGF-IR se une a IGF-I con una afinidad elevada e inicia la respuesta fisiológica a este ligando in vivo. IGF-IR también se une a IGF-II, aunque con una afinidad ligeramente inferior. La sobreexpresión de IGF-IR induce la transformación neoplásica de las células y existen datos que muestran que IGF-IR participa en la transformación maligna de las células y que, por lo tanto, es una diana útil para el desarrollo de agentes terapéuticos para el tratamiento del cáncer (Adams T.E. et al., Cell. Mol. Life Sci. 57:10501063, 2000) .

Los anticuerpos de IGF-IR son bien conocidos del estado de la técnica y han sido investigados por sus efectos antitumorales in vitro e in vivo (Benini S. et al., Clin. Cancer Res. 7:1790-1797, 2001; Scotlandi K. et al., Cancer Gene Ther. 9:296-307, 2002; Scotlandi, K. et al., Int. J. Cancer 101:11-16, 2002; Brunetti, A. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 165:212-218, 1989; Prigent, S.A. et al., j. Biol. Chem. 265:9970-9977, 1990; Li, S.L. et al., Cancer Immunol. Immunother. 49:243-252, 2000; Pessino, A. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 162:12361243, 1989; Surinya, K.H. et al., J. Biol. Chem. 277:16718-16725, 2002; Soos, M.A. et al., J. Biol. Chem., 267:1295512963, 1992; Soos, M.A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:5217-5221, 1989; O'Brien, R.M. et al., EMBO J. 6:4003-4010, 1987; Taylor, R. et al., Biochem. J. 242:123-129, 1987; Soos, M.A. et al., Biochem. J. 235:199-208, 1986; Li, S.L. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:92-98, 1993; Delafontaine, P. et al., J. Mol. Cell. Cardiol. 26:1659-1673, 1994; Kull, F.C. Jr. et al. J. Biol. Chem. 258:6561-6566, 1983; Morgan, D.O. y Roth, R.A., Biochemistr y 25:1364-1371, 1986; Forsayeth, J.R. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3448-3451, 1987; Schaefer, E.M. et al., J. Biol. Chem. 265:13248-13253, 1990; Gustafson, T.A. y Rutter, W.J., J. Biol. Chem. 265:18663-18667, 1990; Hoyne, P.A. et al., FEBS Lett. 469:57-60, 2000; Tulloch P.A. et al., J. Struct. Biol. 125:11-18, 1999; Rohlik Q.T. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 149:276-281, 1987; y Kalebic T. et al., Cancer Res. 54:5531-5534, 1994; Adams T.E. et al., Cell. Mol. Life Sci. 57:1050-1063, 2000; Dricu A. et al., Glycobiology 9:571-579, 1999; Kanter-Lewensohn L. et al., Melanoma Res. 8:389-397, 1998; Li S.L. et al., Cancer Immunol. Immunother. 49:243-252, 2000) . Los anticuerpos de IGF-IR también se han descrito en un gran número de otras publicaciones, por ejemplo Arteaga C.L. et al., Breast Cancer Res. Treatment 22:101-106, 1992; y Hailey J. et al., Mol. Cancer Ther. 1:13491353, 2002.

En particular, el anticuerpo monoclonal de IGF-IR denominado alR3 es ampliamente utilizado en la investigación de los procesos mediados por IGF-IR y las enfermedades mediadas por IGF-I tales como el cáncer. Alfa-IR-3 fue descrito por primera vez por Kull F.C., J. Biol. Chem. 258:6561-6566, 1983. Desde entonces se han publicado aproximadamente cien publicaciones referidas a la investigacion y utilizacion terapeutica de alR3 con respecto a su efecto antitumoral, por sí solo y en combinación con agentes citostáticos, tales como la doxorrubicina y la vincristina. alR3 es un anticuerpo monoclonal murino que es conocido que inhibe la unión de IGF-I al receptor del IGF-I pero no la unión de IGF-II a IGF-IR. Sin embargo, existen otros anticuerpos (por ejemplo 1H7, Li S.L. et al., Cancer Immunol. Immunother. 49:243-252, 2000) que inhiben la unión de IGF-II a IGF-IR con mayor potencia que la unión de IGF-I. Se describe un resumen del estado de la técnica de los anticuerpos y las propiedades y características de los mismos en Adams T.E. et al., Cell. Mol. Life Sci. 57:1050-1063, 2000.

La mayoría de los anticuerpos descritos en el estado de la técnica se obtienen del ratón. Lubeck M.D. et al., J. Immunol., 1299-1304, 1985, describen la interacción de proteínas murinas de subclases de IgG con receptores Fc de monocitos humanos. Los anticuerpos IgG2a e IgG3 murinos se unen al FcR humano de manera similar a la IgG1 humana. Dichos anticuerpos, tal como es bien conocido del estado de la técnica, no resultan útiles para la terapia de pacientes humanos si no se realizan alteraciones adicionales tales como la quimerizacion o la humanizacion. Basándose en estas desventajas, los anticuerpos humanos resultan claramente preferentes como agentes terapéuticos en el tratamiento de los pacientes humanos. Los anticuerpos humanos son bien conocidos en el estado de la técnica (van Dijk M.A. y van de Winkel J.G., Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-374, 2001) . Basándose en dicha tecnología, pueden producirse anticuerpos humanos contra una gran diversidad de dianas. Se describen ejemplos de anticuerpos humanos de IGF-IR en la patente WO nº 02/053596.

Sin embargo, todavía existe una necesidad de anticuerpos de IGF-IR con beneficios convincentes para los pacientes que requieren terapia antitumoral. El beneficio relevante para el paciente es, en términos simples, la reducción del crecimiento tumoral y una prolongación significativa del tiempo hasta la progresión, causada por el tratamiento con el agente antitumorigénico.

Descripción resumida de la invención La invención comprende un anticuerpo humano de IGF-IR y la inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-IR, caracterizada porque dicho anticuerpo: a) es de isotipo IgG1, b) muestra un valor de IC50 de inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-IR no superior a 10 nM, y c) comprende una cadena pesada variable de SEC ID nº 1 y una cadena ligera variable de SEC ID nº, una cadena pesada variable de SEC ID nº 3 y una cadena ligera variable de SEC ID nº 4, o una cadena pesada variable de SEC ID nº 5 y una cadena ligera variable de SEC ID nº 6.

La invención comprende un anticuerpo humano de IGF-IR y la inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-IR, caracterizada porque dicho anticuerpo: a) es de isotipo IgG1, b) muestra un valor de IC50 de inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-IR no superior a 10 nM, c) comprende una cadena pesada variable derivada de la secuencia de línea germinal DP-61 (GenBank nº M99682) y una cadena ligera variable derivada de la secuencia de línea germinal L15 (GenBank nº K01323) , y d) comprende como CDRs de cadena pesada variable, CDR1 (aa nº 31 a nº 35) , CDR2 (aa nº 50 a nº 65) y CDR3 (aa nº 98 a nº 108) de SEC ID nº 1, en la que el aminoácido nº 31 puede ser asparagina o serina, y el aminoácido nº 104 puede ser ácido glutámico o ácido aspártico, y como CDRs de cadena ligera variable, CDR1 (aa nº 24 a nº 34) , CDR2 (aa nº 50 a nº 56) y CDR3 (aa nº 89 a nº 97) de SEC ID nº 2.

El anticuerpo de unión a IGF-IR y que inhibe la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-lR se caracteriza porque dicho anticuerpo es de isotipo IgG1 y muestra una proporción entre el nivel de inhibición de la unión de IGF-I a IGF-IR y el nivel de inhibición de la unión de IGF-II a IGF-IR de entre 1:3 y 3:1 e induce una muerte celular mediante ADCC de 20% o más de las células de una preparación de células que expresan IGF-IR tras 24 horas a una concentración de dicho anticuerpo de 100 nM.

Los anticuerpos según la invención muestran beneficios para los pacientes que requieren terapia antitumoral y proporcionan una reducción del crecimiento tumoral y una prolongación significativa del tiempo hasta la progresión. Los anticuerpos según la invención presentan nuevas propiedades inventivas que presentan beneficios para los pacientes que sufren de una enfermedad asociada a la desregulación de IGF, especialmente una enfermedad tumoral. Los anticuerpos según la invención se caracterizan por las propiedades anteriormente indicadas. Por lo tanto, las propiedades son, particularmente, la unión específica a IGF-IR, la inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-IR en la proporción anteriormente indicada, siendo del isotipo IgG1, y que presentan una función efectora de ADCC.

Preferentemente, además, los anticuerpos según la invención inducen la muerte celular mediante CDC de 20% o más células de una preparación de células que expresan IGF-IR tras... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo humano de unión a IGF-IR e inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-lR, caracterizado porque dicho anticuerpo a) es del isotipo IgG1, b) muestra un valor de IC50 para la inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-IR no superior a 10 nM, y c) comprende una cadena pesada variable de secuencia SEC ID nº 1 y una cadena ligera variable de secuencia SEC ID nº 2, una cadena pesada variable de secuencia SEC ID nº 3 y una cadena ligera variable de secuencia SEC ID nº 4, o una cadena pesada variable de secuencia SEC ID nº 5 y una cadena ligera variable de secuencia SEC ID nº 6.

2. Anticuerpo humano de unión a IGF-IR e inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-lR, caracterizado porque dicho anticuerpo: a) es del isotipo IgG1, b) muestra un valor de IC50 para la inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-IR no superior a 10 nM, c) comprende una cadena pesada variable derivada de la secuencia de línea germinal DP-61 y una cadena ligera variable derivada de la secuencia de línea germinal L15, y d) comprende como CDRs de cadena pesada variable, un CDR1 de aminoácidos 31 a 35, un CDR2 de aminoácidos 50 a 65 y un CDR3 de aminoácidos 98 a 108 de secuencia SEC ID nº 1, en los que el aminoácido 31 puede ser asparagina o serina y el aminoácido 104 puede ser ácido glutámico o ácido aspártico, y como CDRs de cadena ligera variable, un CDR1 de aminoácidos 24 a 34, un CDR2 de aminoácidos 50 a 56 y un CDR3 de aminoácidos 89 a 97 de secuencia SEC ID nº 2, en los que la numeración de CDR y la definición son según Kabat.

3. Anticuerpo segun la reivindicacion 1 o 2, caracterizado por una afinidad de entre aproximadamente 10-11 y 10-8 M (KD) .

4. Anticuerpo según las reivindicaciones 1 a 3 obtenible a partir de la línea celular de hibridoma DSM ACC 2586, DSM ACC 2588 ó DSM ACC 2589.

5. Utilizacion de un anticuerpo segun las reivindicaciones 1 a 4 para la preparacion de una composicion farmacéutica.

6. Composición farmacéutica que contiene un anticuerpo según las reivindicaciones 1 a 4.

7. Línea celular de hibriomda DSM ACC 2586, DSM ACC 2588 ó DSM ACC 2589.

8. Método para la preparación de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo según las reivindicaciones 1 a 4.

9. Ácido nucleico codificante de un anticuerpo humano según la reivindicación 1 ó 2.

10. Vector de expresion que comprende un acido nucleico segun la reivindicacion 9, capaz de expresar dicho ácido nucleico en una célula huésped procariótica o eucariótica.

11. Célula huésped procariótica o eucariótica que comprende un vector según la reivindicación 10.

12. Método para la producción de un anticuerpo humano de unión a IGF-IR e inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-lR, caracterizado porque se expresa un acido nucleico según la reivindicación 9 en una célula huésped procariótica o eucariótica y se recupera dicho polipéptido a partir de dicha célula.

13. Composición farmacéutica que comprende el anticuerpo humano según las reivindicaciones 1 a 4 para el tratamiento del cáncer.

14. Composición farmacéutica según la reivindicación 13, en la que dicho anticuerpo humano debe administrarse en combinación con un agente citotóxico, un profármaco del mismo o una radioterapia citotóxica.