COMPOSICIONES DE VACUNA QUE CONTIENEN DISPOSICIONES DE ANTÍGENO BETA 1-6 AMILOIDE.

Composiciones de vacuna que contienen disposiciones de antígeno beta 1-6 amiloide Antecedente de la invención Campo de la Invención La presente invención se relaciona con los campos de la biología molecular, virología, inmunología y medicina. La invención proporciona una composición que comprende un antígeno repetitivo y ordenado o disposición determinante antigénica, y en particular una composición de Aß1-6 péptido-VLP. Más específicamente, la invención proporciona una composición que comprende una partícula similar a virus de un bacteriófago de ARN y por lo menos un péptido Aß1-6 unido a este. La invención también proporciona un proceso para producir los conjugados y las disposiciones repetitivas y ordenadas, respectivamente. Las composiciones de la invención son útiles en la producción de vacunas para el tratamiento de enfermedad de Alzheimer y como un fármaco/vacuna para evitar o curar la enfermedad de Alzheimer y para inducir eficientemente las respuestas inmunes, en particular las respuestas de anticuerpo. Adicionalmente, las composiciones de la invención son particularmente útiles para inducir eficientemente respuestas inmunes autoespecíficas dentro del contexto indicado. Técnica Relacionada ES 2 365 706 T3 La enfermedad de Alzheimer (AD) es la causa más común de demencia entre los ancianos (65 años de edad y más) y una carga pesada para la salud pública. Por ejemplo, se reporta que 4 millones de personas sufren de la enfermedad en los Estados Unidos de América. Se espera que la incidencia de la enfermedad se incremente con el envejecimiento de la población. Los principales signos patológicos de la enfermedad de Alzheimer son los cambios en el comportamiento relacionados con la edad, depósito de ß- amiloide en placas insolubles, llamadas las placas neuríticas o placas AD, ovillos neurofibrilares compuestos de la proteína tau dentro de las neuronas, y pérdida de neuronas a través del prosencéfalo. En adición al inicio tardío de AD, que ocurre en la vejez (65 años y más), existe un inicio temprano de AD, AD hereditario (FAD) que ocurre entre la edad de 35 y 60. Las anormalidades patológicas de AD son más extensas, severas y ocurren temprano en FAD que en el AD de inicio tardío o esporádico. Las mutaciones en el gen APP, los genes presenilina 1 y presenilina 2 se han correlacionado con FAD. Como se indica, uno de los eventos clave en la enfermedad de Alzheimer (AD) es el depósito de amiloides como masas fibrosas insolubles (amiloidogenia) que resulta en placas neuríticas extracelulares y depósitos alrededor de las paredes de los vasos sanguíneos cerebrales (para revisión ver Selkoe, D. J. (1999) Nature. 399, A23-31). El constituyente principal de las placas neuríticas y la angiopatía congofílica es amiloide ß (Aß), aunque estos depósitos también contienen otras proteínas tal como glicosaminoglicanos y apolipoproteínas. El Aß se divide proteolíticamente de una glucoproteína mucho más grande conocida como Proteína Precursora Amiloide (APP), que comprende isoformas de 695-770 aminoácidos con una única región de transmembrana hidrófoba. El Aß forma un grupo de péptidos de hasta 43 aminoácidos de longitud que muestra considerable hetereogeneidad del terminal carboxi y amino (truncación) así como también modificaciones (Roher, A. E., Palmer, K. C., Chau, V., & Ball, M. J. (1988) J. Cell Biol. 107, 2703-2716. Roher, A. E., Palmer, K. C., Yurewicz, E. C., Ball, M. J., & Greenberg, B. D. (1993) J. Neurochem. 61, 1916-1926). Las isoformas prominentes son Aß1-40 y 1-42. Este tiene una alta propensión a formar láminas ß que se agregan en las fibrilas, que finalmente conducen al amiloide. El péptido Aß tiene un papel central en la neuropatología de la enfermedad de Alzheimer. La región específica, la acumulación extracelular del péptido Aß se acompaña por microgliosis, cambios citoesqueléticos, neuritis distrófica y pérdida sináptica. Estas alteraciones patológicas se considera que están ligadas a la disminución cognitiva que define la enfermedad. La administración de la proteína beta amiloide o, en particular, Aß 1-28 en cantidades de hasta 10-2 mg/dosis en la ausencia de cualesquier adyuvantes y sin ningún ligado de la proteína beta amiloide o Aß 1-28 a un portador, para el tratamiento de enfermedad de Alzheimer, se describe en la EP 526511. Otros han utilizado la administración de péptidos Aß en combinación con adyuvantes, para inducir una respuesta inmune, celular o humoral, contra Aß 1-42. En un modelo de ratón transgénico de enfermedad de Alzheimer, los animales sobreexpresan la proteína precursora amiloide humana que contiene la mutación APP(717)V-F (ratones PDAPP; Johnson-Wood, K. et al., Proc. Natl. Acad. USA 94: 1550-1555, Games, D. et al., Nature 373: 523-527 (1995a)), que conduce a la sobreproducción de Aß1-42, desarrollan placas, neuritis distrófica, pérdida de terminales 2 ES 2 365 706 T3 presinápticos, astrocitosis y microgliosis. En un estudio reciente, Schenk, D. et al., (Nature 400:173-77 (1999) y WO 99/27944) reporta que la administración de Aß1-42 agregado mezclado con un adyuvante fuerte (CFA/IFA), que no se puede utilizar en humanos, en las primeras 4 inmunizaciones, seguido por la administración del Aß1-42 agregado en PBS en las inmunizaciones posteriores, a ratones PDAPP de 6 semanas de edad, evita esencialmente la formación de placa y la neuritis distrófica asociada. Los mismos autores reportan que la inmunización de ratones más viejos (11 meses de edad) utilizando la misma estrategia reduce marcadamente el grado y progresión de las neuropatologías similares a enfermedad de Alzheimer (AD). La proliferación de esplenocitos de ratones inmunizados utilizando la estrategia mencionada anteriormente se reporta en el Ejemplo III (Detección de la Eficacia Terapéutica contra AD Establecido) de la WO 99/27944, que muestra que las células T específicas Aß1-42 se inducen por el procedimiento de vacunación. El acoplamiento de los fragmentos Aß a IgG antiratón de oveja, y la inmunización de dicho fragmento acoplado en la presencia del adyuvante CFA/IFA se reporta en la WO 9927944. El uso de composiciones que comprenden los fragmentos Aß ligados a los polipéptidos tal como toxina difteria para promover una respuesta inmune contra Aß también se describe en la WO 99/27944. Sin embargo, no se proporcionan datos de inmunización. Un anticuerpo monoclonal que reconoce un epítopo dentro del terminal N (1-16) de Aß (anticuerpo 6C6) se ha mostrado que protege las células PC 12 de neurotoxicidad del ß-amiloide fibrilar, y para desagregar el ß-amiloide in vitro (Solomon B. et al., Proc.Natl. Acad. Sci. USA (1997)). Un anticuerpo monoclonal que surge contra Aß1-28, también muestra que suprime la agregación ß-amiloide in vitro (Solomon B. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1996)). Frenkel et al., (J. Neuroimmunol. 88: 85-90 (1998)) que ha identificado finalmente el epítopo de los dos anticuerpos antiagregantes, 10D5 y 6C6, cuando es el epítopo "EFRH", es decir Aß3-6. En contraste, un anticuerpo específico para Aß1-7 es incapaz de evitar la agregación ß-amiloide (Frenkel D. et al., J. Neuroimmunol. 95: 136-142 (1999)). El Aß1-42 es fibrilogénico y de hecho, la composición de vacuna descrita en la WO 99/27944 que utiliza Aß1-42 se trata en tal una forma que esta puede formar agregados. Se ha mostrado que aquellas fibrilas son tóxicas para los cultivos celulares neuronales (Yankner et al., Science 245: 417-420 (1989)), y que también se observa un efecto tóxico cuando se inyecta en cerebros de animal (Sigurdson et al., Neurobiol. Aging 17: 893-901 (1996); Sigurdson et al., Neurobiol. Aging 18: 591-608 (1997)). Walsh et al., (Nature 416:535-539 (2002)) reporta que los oligómeros naturales de Aß se forman dentro de vesículas intracelulares. Aquellos oligómeros inhiben la potenciación a largo plazo en ratas in vivo y la plasticidad sináptica interrumpida en las concentraciones encontradas en el cerebro humano y el fluido cerebrospinal. En otro estudio, Bard, F. et al. (Nature Medicine 6:916-19 (2000)) reporta que la administración periférica de los anticuerpos elevados contra Aß1-42, es capaz de reducir la carga amiloide, a pesar de los niveles de suero relativamente modestos. Este estudio utiliza anticuerpos policlonales elevados contra Aß1-42, o anticuerpos monoclonales elevados contra los fragmentos sintéticos derivados de diferentes regiones de Aß. Así la inducción de anticuerpos contra los péptidos Aß tiene promesas como un tratamiento terapéutico potencial para la enfermedad de Alzheimer. La administración mucosal de un antígeno asociado con placas ß-Amiloide, tal como el péptido ß-amiloide y Aß1-40, se ha descrito en la WO99/27949. Se dice que la administración mucosal suprime ciertas respuestas de citoquina asociadas con enfermedad de Alzheimer,... [Seguir leyendo]

(a) una partícula de núcleo con por lo menos un primer sitio de adhesión, en donde dicha partícula de núcleo es una partícula similar a virus de un bacteriófago de ARN; y (b) por lo menos un antígeno o determinante antigénico con por lo menos un segundo sitio de adhesión, en donde dicho antígeno o determinante antigénico es un péptido Aß1-6, y en donde dicho segundo sitio de adhesión se selecciona del grupo que consiste de: (i) un sitio de adhesión de ocurrencia no natural con dicho antígeno o determinante antigénico; y (ii) un sitio de adhesión de ocurrencia natural con dicho antígeno o determinante antigénico, en donde dicho segundo sitio de adhesión se asocia con dicho primer sitio de adhesión a través de por lo menos un enlace no péptido; y en donde dicho péptido Aß 1-6 y dicha partícula de núcleo interactúa a través de dicha asociación para formar una disposición de antígeno repetitivo y ordenado. 2. La composición de la reivindicación 1, en donde dicha partícula similar a virus de un bacteriófago de ARN comprende, o alternativamente consiste de, proteínas recombinantes, o fragmentos de las mismas, de un bacteriófago de ARN. 3. La composición de la reivindicación 1 o 2, en donde dicho bacteriófago de ARN se selecciona del grupo que consiste de: (a) bacteriófago Qß; (b) bacteriófago R 17; (c) bacteriófago fr; (d) bacteriófago GA; (e) bacteriófago SP; (f) bacteriófago MS2; (g) bacteriófago M 11; (h) bacteriófago MX 1; (i) bacteriófago NL95; (k) bacteriófago f2; (l) bacteriófago PP7; y (m) bacteriófago AP205. ES 2 365 706 T3 4. La composición de la reivindicación 1, en donde dicha partícula similar a virus de un bacteriófago de ARN comprende, o alternativamente consiste de, proteínas recombinantes, o fragmentos de las mismas, del bacteriófago de ARN Qß. 5. La composición de la reivindicación 1, en donde dicha partícula similar a virus de un bacteriófago de ARN comprende, o alternativamente consiste de, proteínas recombinantes, o fragmentos de las mismas, del bacteriófago de ARN fr. 104 6. La composición de la reivindicación 1, en donde dicha partícula similar a virus de un bacteriófago de ARN comprende, o alternativamente consiste de, proteínas recombinantes, o fragmentos de las mismas, del bacteriófago de ARN AP205. 7. La composición de la reivindicación 2, en donde las proteínas recombinantes comprenden, o alternativamente consisten esencialmente de, o alternativamente consisten de proteínas cubiertas de bacteriófagos de ARN. 8. La composición de la reivindicación 7, en donde dichas proteínas cubiertas de los bacteriófagos de ARN tienen una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de: (a) SEQ ID NO: 4; (b) una mezcla de la SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5; (c) SEQ ID NO: 6; (d) SEQ ID NO: 7; (e) SEQ ID NO: 8; (f) SEQ ID NO: 9; (g) una mezcla de la SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10; (h) SEQ ID NO: 11; (i) SEQ ID NO: 12; (k) SEQ ID NO: 13; (l) SEQ ID NO: 14; (m) SEQ ID NO: 15; (n) SEQ ID NO: 16; y (o) SEQ ID NO: 28. 9. La composición de la reivindicación 2, en donde las proteínas recombinantes comprenden, o alternativamente consisten esencialmente de, o alternativamente consisten de proteínas mutantes cubiertas de bacteriófagos de ARN. 10. La composición de la reivindicación 9, en donde dicho bacteriófago de ARN se selecciona del grupo que consiste de: (a) bacteriófago Qß; (b) bacteriófago R 17; (c) bacteriófago fr; (d) bacteriófago GA; (e) bacteriófago SP; (f) bacteriófago MS2; (g) bacteriófago M 11; ES 2 365 706 T3 (h) bacteriófago MX 1; (i) bacteriófago NL95; (k) bacteriófago f2; (l) bacteriófago PP7; y (m) bacteriófago AP205. 11. La composición de la reivindicación 9 o 10, en donde dichas proteínas mutantes cubiertas de dicho bacteriófago de ARN se han modificado mediante la remoción de por lo menos un residuo lisina por vía de sustitución. 12. La composición de la reivindicación 9 o 10, en donde dichas proteínas mutantes cubiertas de dicho bacteriófago de ARN se han modificado mediante la adición de por lo menos un residuo lisina por vía de sustitución. 13. La composición de la reivindicación 9 o 10, en donde dichas proteínas mutantes cubiertas de dicho bacteriófago de ARN se han modificado mediante la eliminación de por lo menos un residuo lisina. 14. La composición de la reivindicación 9 o 10, en donde dichas proteínas mutantes cubiertas de dicho bacteriófago de ARN se han modificado mediante la adición de por lo menos un residuo lisina por vía de inserción. 15. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho segundo sitio de adhesión es capaz de asociación a dicho primer sitio de adhesión a través de por lo menos un enlace covalente. 16. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho péptido Aß 1-6 se selecciona del grupo que consiste de: (a) péptido Aß 1-6 humano que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 75; (b) péptido Aß 1-6 de murino que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 76; (c) péptido Aß 1-6 de primate que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 84; (d) péptido Aß 1-6 de conejo que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 85; (e) péptido Aß 1-6 Xenopus laevis que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 86; (f) péptido Aß 1-6 de rata que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 87; y (g) péptido Aß 1-6 de conejillo de indias que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 88. 17. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho péptido Aß 1-6 tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 75. 18. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende adicionalmente un ligador de aminoácido, en donde dicho ligador de aminoácido comprende, o alternativamente consiste de, dicho segundo sitio de adhesión. 19. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicha segunda adhesión o dicho ligador de aminoácido con dicho segundo sitio de adhesión se une a dicho péptido Aß 1-6 en su terminal C. 20. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho segundo sitio de adhesión o dicho ligador de aminoácido con dicho segundo sitio de adhesión se selecciona del grupo que consiste de: (a) CGC; ES 2 365 706 T3 106 (b) GGC-CONH2; (c) GC; (d) GC-CONH2; (e) C; y (f) C-CONH2. 21. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho péptido Aß 1-6 con dicho por lo menos segundo sitio de adhesión es NH2-DAEFRHGGC-CONH2 (SEQ ID NO: 77), 22. La composición de la reivindicación 21, en donde dicha partícula similar a virus es una partícula similar a virus del bacteriófago de proteína de la cubierta de ARN Qß. 23. Una composición farmacéutica que comprende: (a) la composición de cualquier reivindicación precedente; y (b) un portador farmacéuticamente aceptable. ES 2 365 706 T3 24. La composición farmacéutica de la reivindicación 23 que comprende adicionalmente un adyuvante. 25. La composición farmacéutica de la reivindicación 23 o la reivindicación 24, en donde dicha composición de vacuna carece de un adyuvante. 26. Una composición de vacuna que comprende la composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes. 27. La composición de vacuna de la reivindicación 26, que comprende adicionalmente un adyuvante. 28. La composición de vacuna de la reivindicación 26, en donde dicha composición de vacuna carece de un adyuvante. 29. La composición de vacuna de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28, en donde dicha partícula similar a virus comprende proteínas recombinantes, o fragmentos de las mismas, de un bacteriófago de ARN. 30. La composición de vacuna de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 29, en donde dicha partícula similar a virus comprende proteínas recombinantes o fragmentos de las mismas, del bacteriófago de ARN Qß. 31. La composición de vacuna de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 29, en donde dicha partícula similar a virus comprende proteínas recombinantes, o fragmentos de las mismas, del bacteriófago de ARN fr. 32. La composición de vacuna de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 29, en donde dicha partícula similar a virus comprende proteínas recombinantes, o fragmentos de las mismas, del bacteriófago de ARN AP205. 33. La composición de vacuna de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 32, en donde dicho péptido Aß 1- 6 se selecciona del grupo que consiste de: (a) péptido Aß 1-6 humano que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 75; (b) péptido Aß 1-6 de murino que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 76; (c) péptido Aß 1-6 de primate que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 84; (d) péptido Aß 1-6 de conejo que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 85; (e) péptido Aß 1-6 Xenopus laevis que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 86; 107 (f) péptido Aß 1-6 de rata que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 87; y (g) péptido Aß 1-6 de conejillo de indias que tiene una secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 88. 34. La composición de vacuna de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 33 que comprende adicionalmente un ligador de aminoácido, en donde dicho ligador de aminoácido comprende, o alternativamente consiste de, dicho segundo sitio de adhesión. 35. La composición de vacuna de la reivindicación 34, en donde dicho ligador de aminoácido con dicho segundo sitio de adhesión se une a dicho péptido Aß 1-6 en su terminal C. 36. La composición de vacuna de la reivindicación 34 o 35, en donde dicho ligador de aminoácido con dicho segundo sitio de adhesión se selecciona del grupo que consiste de: (a) GGC; (b) GGC-CONH2; (c) GC; (d) GC-CONH2; (e) C; y (f) C-CONH2. ES 2 365 706 T3 37. La composición de vacuna de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 36, en donde dicho antígeno o determinante antigénico con dicho por lo menos segundo sitio de adhesión es NH2- DAEFRHGGC-CONH2 (SEQ ID NO: 77). 38. La composición de vacuna de la reivindicación 37, en donde dicha partícula similar a virus es una partícula similar a virus del bacteriófago de proteína de la cubierta de ARN Qß. 39. Un proceso para producir una composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende: (a) proporcionar una partícula de núcleo con por lo menos un primer sitio de adhesión, en donde dicha partícula de núcleo es una partícula similar a virus de un bacteriófago de ARN; (b) proporcionar por lo menos un antígeno o determinante antigénico con por lo menos un segundo sitio de adhesión, en donde dicho antígeno o determinante antigénico es un péptido Aß1-6, y en donde dicho segundo sitio de adhesión se selecciona del grupo que consiste de: (i) un sitio de adhesión de ocurrencia no natural con dicho antígeno o determinante antigénico; y (ii) un sitio de adhesión de ocurrencia natural con dicho antígeno o determinante antigénico; y en donde dicho segundo sitio de adhesión se asocia con dicho primer sitio de adhesión a través de por lo menos un enlace no péptido; y (c) combinar dicha partícula de núcleo y dicho por lo menos un antígeno o determinante antigénico, en donde dicho antígeno o determinante antigénico y dicha partícula de núcleo interactúa a través de dicha asociación para formar una disposición de antígeno repetitivo y ordenado. 40. Composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38 para uso como un medicamento. 41. Uso de una composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de Alzheimer y enfermedades relacionadas. 108 42. La composición de la reivindicación 1 en donde dicha composición comprende adicionalmente un reticulador heterobifuncional que contiene un grupo funcional que puede reaccionar con dicho primer sitio de adhesión y un grupo funcional adicional que puede reaccionar con dicho segundo sitio de adhesión. 43. La composición de la reivindicación 42 en donde dicho reticulador heterobifuncional contiene un grupo 5 funcional que puede reaccionar con el grupo amino de cadena lateral del residuo lisina de la partícula similar a virus o por lo menos una subunidad de partícula similar a virus. 44. La composición de la reivindicación 42 en donde dicho grupo funcional adicional de dicho reticulador heterobifuncional reacciona con un residuo cisteína fusiónado al péptido Aß1-6. 45. La composición de acuerdo con la reivindicación 42, en donde dicho reticulador heterobifuncional se 10 selecciona de SMPH, Sulfo- MBS, Sulfo-EMCS, Sulfo-GMBS, Sulfo-SIAB, Sulfo-SMPB, Sulfo-SMCC, SVSB, SIA y otros reticuladores que tiene un grupo funcional que reacciona hacia el grupo amino y un grupo funcional que reacciona hacia los residuos cisteína. ES 2 365 706 T3 46. La composición de acuerdo con la reivindicación 42, en donde dicho reticulador heterobifuncional es SPDP o Sulfo-LC- SPDP. 109 ES 2 365 706 T3 ES 2 365 706 T3 111 ES 2 365 706 T3 112 ES 2 365 706 T3 113 ES 2 365 706 T3 114 ES 2 365 706 T3 ES 2 365 706 T3 116 ES 2 365 706 T3 117 ES 2 365 706 T3 118 ES 2 365 706 T3 119 ES 2 365 706 T3 ES 2 365 706 T3 121 ES 2 365 706 T3 122 ES 2 365 706 T3 123 ES 2 365 706 T3 124 ES 2 365 706 T3 ES 2 365 706 T3 126 ES 2 365 706 T3 127 ES 2 365 706 T3 128 ES 2 365 706 T3 129 ES 2 365 706 T3 ES 2 365 706 T3 131 ES 2 365 706 T3 132