Anticuerpo aislado producido por un hibridoma seleccionado del grupo que consiste en 3B5.

1 (ATCC Acceso No. PTA-6193), 12B9.1 (ATCC Acceso No. PTA-6194) y 12G12.1 (ATCC Acceso No. PTA-6195)

Composiciones y métodos para el diagnóstico y el tratamiento de un tumor.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones de materia para su uso en el diagnóstico y el tratamiento de tumor en mamíferos y a métodos de utilización de estas composiciones de materia para los mismos.

Antecedentes de la invención

Los tumores malignos (cánceres) son la segunda causa de muerte en los Estados Unidos, después de las enfermedades del corazón (Boring et al., CA Cancer J Clin., 43:7 [(1993]). El cáncer se caracteriza por el incremento en el número de células anormales, o neoplásicas, derivadas de un tejido normal que proliferan para formar una masa tumoral, la invasión de tejidos adyacentes por estas células tumorales neoplásicas, y la generación de células malignas que finalmente se extienden a través de la sangre o el sistema linfático hasta nódulos linfáticos regionales y hasta puntos distantes a través de un proceso denominado metástasis. En un estado canceroso, una célula prolifera bajo condiciones en las que no crecerían células normales. El cáncer se manifiesta en una gran variedad de formas, caracterizadas por diferentes grados de invasión y agresividad.

En los intentos por descubrir dianas celulares eficaces para el diagnostico y la terapia contra el cáncer, los investigadores han buscado identificar polipéptidos transmembrana u otros polipéptidos asociados a membranas que se expresan específicamente en la superficie de uno o más tipos particulares de células cancerosas en comparación con una o más células no cancerosas normales. A menudo, dichos polipéptidos asociados a membrana se expresan de manera más abundante en la superficie de las células cancerosas en comparación con la superficie de las células no cancerosas. La identificación de dichos polipéptidos antígenos de la superficie celular asociados a tumores ha proporcionado la capacidad de reconocer específicamente células cancerosas para la destrucción a través de terapias basadas en anticuerpos. En este aspecto, cabe indicar que la terapia basada en anticuerpos se ha demostrado muy eficaz en el tratamiento de ciertos cánceres. Por ejemplo, HERCEPTIN® y RITUXAN® (ambas de Genentech Inc, South San Francisco, California) son anticuerpos que se han utilizado satisfactoriamente para tratar el cáncer de mama y el linfoma de no Hodgkin, respectivamente. Más específicamente, HERCEPTIN® es un anticuerpo monoclonal humanizado derivado de ADN recombinante que se une selectivamente al dominio extracelular del protooncogén del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2). Se observa la sobreexpresión de la proteína HER2 en el 25-30% de cánceres de mama primarios. RITUXAN® es un anticuerpo monoclonal murino/humano quimérico modificado genéticamente dirigido contra el antígeno CD20 hallado en la superficie de linfocitos B normales y malignos. Estos anticuerpos se producen recombinantemente en células CHO.

En otros intentos por descubrir dianas celulares eficaces para el diagnostico y la terapia contra el cáncer, los investigadores han buscado identificar (1) polipéptidos no asociados a membrana que son producidos específicamente por uno o más tipos particulares de células cancerosas en comparación a por uno o más tipos particulares de células normales no cancerosas, (2) polipéptidos que son producidos por células cancerosas en un nivel de expresión que es significativamente más elevado que el de una o más células normales no cancerosas, o (3) polipéptidos cuya expresión está limitada específicamente a sólo un tipo de tejido (o a un número muy limitado de diferentes tejidos) tanto en estado canceroso como no canceroso (por ejemplo, tejido de próstata normal y de tumor de próstata). Dichos polipéptidos pueden permanecer localizadas intracelularmente o se puede secretar por la célula cancerosa. Además, dichos polipéptidos pueden expresarse no por la propia célula cancerosa, sino por células que producen y/o secretan polipéptidos que tienen un efecto potenciador o un efecto de aumento del crecimiento en células cancerosas. Dichos polipéptidos secretados son a menudo proteínas que proporcionan células cancerosas con una ventaja de crecimiento sobre las células normales e incluyen cosas, tales como factores angiogénicos, factores de adhesión celular, factores de crecimiento, y similares. Se esperaría que la identificación de antagonistas de dichos polipéptidos no asociados a membrana sirviera como agentes terapéuticos eficaces para el tratamiento de dichos cánceres. Además, la identificación del patrón de expresión de dichos polipéptidos sería útil para el diagnóstico y el tratamiento de cánceres particulares en mamíferos. La capacidad de modular la expresión génica en un mamífero es aún difícil. Habitualmente, se ha realizado utilizando herramientas, tales como vectores virales que expresarán un polipéptido donde falta el huésped. La capacidad de introducir un vector viral en un huésped que reducirá la expresión génica no se ha perfeccionado. La represión de la expresión génica se ha realizado habitualmente en mamíferos en un modo "knockout", donde en el mamífero de prueba, habitualmente un ratón, se extirpa o "knock out" el gen a través de la técnica de recombinación homóloga. Esta técnica en ratones es lenta, laboriosa y difícil, y no es práctica en humanos. Por lo tanto, los solicitantes se centraron en un sistema de vectores que expresarán un ARN de interferencia (siARN) para rducir la expresión génica.

Se ha demostrado que los siARN son una herramienta útil en estudios de modulación de la expresión génica donde no han triunfado los antagonistas tradicionales, tales como moléculas pequeñas o anticuerpos (Shi Y., Trends in Genetics 19(1):9-12 (2003)). Los ARN de doble cadena sintetizados in vitro que tienen de 21 a 23 nucleótidos de longitud pueden actuar como ARN de interferencia (ARNi) y pueden inhibir específicamente la expresión génica (Fire A., Trends in Genetics 391; 806-810 (1999)). Estos ARNi actúan mediando en la degradación de sus ARN diana. Dado que tienen menos de 30 nucleótidos de longitud, sin embargo, no desencadenan un mecanismo de defensa antiviral celular. Dichos mecanismso incluyen la producción de interferones, y la paralización general de la síntesis de proteínas de las células huésped. En la práctica, los siARN se pueden sintetizar y, a continuación, clonar en vectores de ADN. Dichos vectores se pueden transfectar y producir para expresar el siARN a niveles elevados y/o de una manera específica de tejido. El nivel elevado de expresión de siARN se utiliza para "knockdown" o reducir significativamente la cantidad de proteína producida en una célula y, de este modo, es útil en experimentos en los que se cree que la sobreexpresión de una proteína está unida a trastornos, tales como el cáncer. A pesar de los avances en la terapia contra el cáncer en mamíferos, existe una gran necesidad para agentes terapéuticos capaces de inhibir de manera eficaz el crecimiento de células neoplásicas a través de la reducción de la expresión génica. Por consiguiente, un objetivo de la presente invención es identificar un sistema que modulará la expresión génica.

La mejora de la liberación de fármacos y otros agentes o células diana, tejidos y tumores para conseguir la máxima eficacia y la mínima toxicidad ha sido el foco de una investigación considerable durante muchos años. A pesar de que se han realizado muchos intentos por desarrollar métodos eficaces para importar moléculas biológicamente activas en células, tanto in vivo como in vitro, ninguno ha demostrado ser completamente satisfactorio. La optimización de la asociación del fármaco con su diana intracelular, minimizando la redistribución intercelular del fármaco, por ejemplo, a células vecinas, es a menudo difícil o ineficiente.

La mayoría de agentes administrados actualmente a un paciente parenteralmente no están dirigidos, dando lugar a una liberación sistémica del agente a las células y tejidos del cuerpo donde no son necesarios, y a menudo, son indeseables. Esto puede dar lugar a efectos secundarios adversos del fármaco y, a menudo, limita la dosis que se puede administrar de un fármaco (por ejemplo, agentes quimioterapéuticos (anti-cancerosos), citotóxicos, inhibidores de enzimas o fármacos antimicrobianos), Mediante comparación, aunque se considera que la administración oral de fármacos es un modo conveniente y económico de administración, comparte las mismos problemas de toxicidad no específica a las células no afectadas una vez el fármaco ha sido absorbido en la circulación sistémica. Otras...

1. Anticuerpo aislado producido por un hibridoma seleccionado del grupo que consiste en 3B5.1 (ATCC Acceso No. PTA-6193), 12B9.1 (ATCC Acceso No. PTA-6194) y 12G12.1 (ATCC Acceso No. PTA-6195).

2. Anticuerpo según la reivindicación 1 que está conjugado a un agente inhibidor del crecimiento.

3. Anticuerpo según la reivindicación 1 que está conjugado a un agente citotóxico.

4. Anticuerpo según la reivindicación 3, en el que el agente citotóxico se selecciona del grupo que consiste en toxinas, antibióticos, isótopos radioactivos y enzimas nucleolíticos.

5. Anticuerpo según la reivindicación 4, en el que el agente citotóxico es una toxina.

6. Anticuerpo según la reivindicación 5, en el que la toxina se selecciona del grupo que consiste en auristatina, maitansinoide y caliqueamicina.

7. Anticuerpo según la reivindicación 5, en el que la toxina se selecciona del grupo que consiste en MMAE (monometil auristatina E), MMAF y AEVB (auristatin E valeril bencilhidrazona), y AFP (Auristatin F fenilendiamina).

8. Anticuerpo según la reivindicación 5, en el que la toxina está unida covalentemente al anticuerpo mediante un enlazador.

9. Anticuerpo según la reivindicación 8, en el que el enlazador se selecciona del grupo que consiste en maleimidocaproil (MC), valinacitrulina (val-cit, vc), citrulina (ácido 2-amino-5-ureido pentanoico), PAB (p-aminobencilcarbamoil), Me (N-metilvalina citrulina), MC(PEG)6-OH (maleimidocaproil-polietilenglicol), SPP (N-Succinimidil 4-(2-piridiltio) pentanoato), SMCC (N-Succinimidil 4-(N-maleimidometil) ciclohexano-1 carboxilato), y MC-vc-PAB.

10. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para su uso en un método de inhibición del crecimiento de una célula que expresa un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2 (TAT188), comprendiendo el método poner en contacto la célula con dicho anticuerpo.

11. Anticuerpo según la reivindicación 10, en el que la célula es una célula cancerosa.

12. Anticuerpo según la reivindicación 11, en el que la célula cancerosa se selecciona del grupo que consiste en mama, colon, recto, endometrio, rincón, pulmón, ovario, piel e hígado.

13. Anticuerpo según la reivindicación 12, en el que la célula cancerosa es una célula de mamífero.

14. Anticuerpo según la reivindicaicón 13, en el que la célula de mamífero es una célula humana.

15. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para su uso en un método de tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo celular asociado con el aumento de la expresión o actividad de un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2, comprendiendo dicho método administrar a un sujeto con necesidad de dicho tratamiento una cantidad eficaz del anticuerpo.

16. Anticuerpo según la reivindicación 15, en el que el trastorno proliferativo celular es el cáncer.

17. Anticuerpo según la reivindicación 16, en el que el cáncer se selecciona del grupo que consiste en mama, colon, recto, endometrio, riñón, pulmón, ovario, piel e hígado.

18. Utilización de un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 en la fabricación de un medicamento para su utilización en un método de inhibición del crecimiento de una célula cancerosa que expresa un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2 (TAT188), comprendiendo el método poner en contacto dicha célula cancerosa con dicho anticuerpo.

19. Utilización de un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 en la fabricación de un medicamento para su utilización en un método para tratar o prevenir un trastorno proliferativo celular asociado con un aumento de la expresión o actividad de un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2, comprendiendo dicho método administrar a un sujeto con necesidad de dicho tratamiento una cantidad eficaz del anticuerpo.

20. Método de detección del nivel de un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2 (TAT188) expresada en una célula de análisis en relación a una célula de control, comprendiendo el método:

21. Método según la reivindicación 20, en el que se lisan la célula de análisis y la célula de control.

22. Método según la reivindicación 20, en el que la célula de análisis está en un tejido.

23. Método según la reivindicación 22, en el que el tejido es un tejido tumoral.

24. Método según la reivindicación 23, en el que el tejido tumoral se selecciona del grupo que consiste en mama, colon, recto, endometrio, riñón, pulmón, ovario, piel e hígado.

25. Método de detección del nivel de un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2 (TAT188) o un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2 en una célula de análisis en relación a una célula de control, comprendiendo el método:

26. Método según la reivindicación 25, en el que el nivel del polipéptido en la célula de análisis es superior que en la célula de control.

27. Método según la reivindicación 26, en el que el método diagnostica el cáncer en un tejido que contiene o que ha contenido la célula de análisis.

28. Método según la reivindicación 25, en el que la detección del nivel de expresión del polipéptido comprende utilizar un anticuerpo en un análisis por inmunohistoquímica.

29. Composición de materia que comprende el anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, combinada con un portador.

30. Composición de materia según la reivindicación 29, en la que dicho portador es un portador farmacéuticamente aceptable.

31. Artículo de fabricación que comprende:

32. Artículo de fabricación según la reivindicación 31, que comprende además una etiqueta fijada a dicho recipiente o un prospecto incluido con dicho recipiente, que se refiere a la utilización de dicha composición de materia para el tratamiento terapéutico o la detección para diagnóstico de un cáncer.