Métodos y composiciones para la secuenciación de ácidos nucleicos.
(14/08/2019) Un método para determinar secuencias de polinucleótidos que comprende
(a) realizar una reacción de secuenciación que comprende ciclos repetidos de:
(i) incorporar conjugados de nucleótidos en una pluralidad de polinucleótidos para producir polinucleótidos extendidos,
(ii) detectar una primera colección de señales desde los polinucleótidos extendidos, en la que la primera colección de señales comprende señales de un marcador unido a un primer y segundo tipo de los conjugados de nucleótido,
(iii) añadir un marcador a un tercer que se incorporan en los polinucleótidos extendidos, produciendo así polinucleótidos modificados; y
(iv) detectar una segunda colección de señales desde los polinucleótidos modificados, en la que la segunda colección de señales comprende…
Método de preparación de bibliotecas de polinucleótidos plantilla.
(03/04/2019) Un método de generación de una biblioteca de moléculas polinucleotídicas plantilla que tienen secuencias comunes en sus extremos 5' y secuencias comunes en sus extremos 3', comprendiendo el método:
proporcionar uno o más dúplex de polinucleótido diana con extremos romos,
añadir un solo desoxinucleótido "A" a ambos extremos 3' de los dúplex de polinucleótido diana, produciendo así un saliente de una base en 3',
ligar polinucleótidos adaptadores con apareamiento erróneo idéntico en los dos extremos de cada uno de uno o más dúplex de polinucleótido diana para formar una o más construcciones adaptador-diana, en el que cada adaptador con apareamiento erróneo se forma a partir de dos cadenas polinucleotídicas hibridadas que forman un complejo bimolecular que comprende al menos una región bicatenaria…
Métodos y soportes sólidos para la preparación de muestras utilizando transposomas.
(08/02/2019) Un método para preparar una biblioteca inmovilizada de fragmentos de ADN marcados que comprende:
(a) proporcionar un soporte sólido que tiene una pluralidad de complejos de transposoma inmovilizados en el mismo, en donde cada complejo de transposoma comprende:
una transposasa unida de manera no covalente a un primer polinucleótido de un ácido nucleico bicatenario que comprende el primer y un segundo polinucleótido, en donde dicho primer polinucleótido está inmovilizado en dicho soporte sólido, y en donde dicho primer polinucleótido comprende
(i) una parte 3' que comprende una secuencia terminal de transposón y
(ii) un primer marcador que comprende un primer dominio de marcador;
…
Nucleósidos o nucleótidos modificados.
(09/10/2018) Molécula de nucleótido o nucleósido modificada que comprende una base de purina o pirimidina y un resto de azúcar de ribosa o desoxirribosa que tiene un grupo protector de 3'-hidroxi retirable que forma una estructura -OC( R)2N3 unida covalentemente al átomo de carbono 3', en donde:
R se selecciona entre el grupo que consiste en hidrógeno, -C(R1)m(R2)n, -C(≥O)OR3, -C(≥O)NR4R5, -
C(R6)2O(CH2)pNR7R8 y -C(R9)2O-Ph-C(≥O)NR10R11;
cada R1 y R2 se selecciona independientemente entre hidrógeno, o halógeno;
R3 se selecciona entre hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido;
cada R4 y R5 se selecciona independientemente entre hidrógeno,…
Métodos y composiciones para la secuenciación de ácidos nucleicos.
(12/07/2017) Un método de secuenciación por síntesis (SBS) basado en fluorescencia para determinar la secuencia de un polinucleótido que comprende detectar en una reacción de secuenciación la incorporación de tres tipos diferentes de conjugados de nucleótidos detectables en un polinucleótido y determinar la incorporación de un cuarto tipo de nucleótido basado en el patrón de detección de los tres tipos diferentes de nucleótidos detectables en el polinucleótido determinando con ello la secuencia de un polinucleótido, en el que la incorporación de tres tipos diferentes de conjugados de nucleótidos detectables se detecta a partir de un estado de señal; y en el que se detecta un primer nucleótido conjugado, unido a un primer fluoróforo, en un primer canal;
se detecta un segundo…
Método de preparación de bibliotecas de polinucleótidos molde.
(11/12/2013) Un método para generar una biblioteca de moléculas polinucleotídicas molde que tienen secuencias comunes en sus extremos 5' y secuencias comunes en sus extremos 3', comprendiendo el método:
ligar polinucleótidos adaptadores con apareamiento erróneo idénticos en ambos extremos de cada uno de uno o más dúplex de polinucleótido diana para formar una o más construcciones adaptador-diana, en el que cada adaptador con apareamiento erróneo se forma a partir de dos cadenas polinucleotídicas hibridadas que forman un complejo biomolecular que comprende al menos una región bicatenaria y una región no apareada, y
realizar una reacción de extensión con cebador inicial…
Preparación de plantillas para la secuenciación de ácidos nucleicos.
(21/03/2013) Un procedimiento para generar una plantilla para una reacción de secuenciación de ácidos nucleicos quecomprende,
(i) proporcionar al menos una molécula de ácido nucleico bicatenario unida a un soporte sólido por el extremo5', en la que la molécula de ácido nucleico bicatenario comprende una región diana a ser secuenciada ysecuencias no diana que flanquean a la región diana,
(ii) escindir una hebra de la molécula de ácido nucleico bicatenario, en un sitio abásico, en el que el sitio parala escisión está ubicado en la secuencia no objetivo, y
(iii) someter la hebra escindida a unas condiciones desnaturalizantes para eliminar la porción de la hebraescindida…