Procedimiento escalable industrialmente para recuperar proteínas transportadoras recombinantes biológicamente activas.

Procedimiento para la preparación de proteínas transportadoras seleccionadas de toxoide tetánico (TT),

toxoide diftérico (DT), material de reacción cruzada 197 (CRM197), proteína D de Haemophilus influenzae, proteína de la membrana exterior de Neisseria, toxina pertúsica (PT), pertactina (PRN) y hemaglutinina filamentosa (FHA), que comprende las etapas de:

a) transformación de Escherichia coli con el gen deseado que codifica para la proteína transportadora usando un vector plasmídico,

b) cultivo de la Escherichia coli transformada en medio de cultivo adecuado en condiciones adecuadas,

c) aislamiento y purificación de cuerpos de inclusión,

d) desnaturalización y solubilización de cuerpos de inclusión a un valor de pH alto que oscila entre 9 y 14,

e) seguido por ajuste del pH dentro de un intervalo de 6 a 8,5 de la proteína solubilizada usando una mezcladora estática en línea durante un periodo de 0,1 a 200 ms, para producir la proteína replegada,

f) purificación intermedia de la proteína replegada usando cromatografía de intercambio iónico para obtener la proteína transportadora nativa y > 90% pura y

g) purificación adicional de la proteína semipurificada obtenida en la etapa (f) mediante una o más separación cromatográfica usando cromatografía de intercambio aniónico, cromatografía de interacción hidrófoba, cromatografía de afinidad por metales y colorantes, cromatografía de afinidad, cromatografía multimodal, cromatografía con hidroxiapatita y cromatografía de exclusión molecular para obtener la proteína transportadora purificada.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IN2016/000262.

Solicitante: Biological E Limited.

Inventor/es: GOEL,AKSHAY, JOGLEKAR,TUSHAR, TIWARI,KRISHNANAND, MISHRA,YOGESH, MANTENA,NARENDER DEV, DATLA,MAHIMA.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K1/113 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 1/00 Procedimientos generales de preparación de péptidos. › sin cambio de la estructura primaria.
  • C07K1/18 C07K 1/00 […] › Cromatografía de intercambio iónico.
  • C07K14/195 C07K […] › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de origen bacteriano.

PDF original: ES-2798763_T3.pdf

 

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