Método para determina la cigosidad del gen fad3 en canola.

Un método para determinar la cigosidad de una planta de canola que comprende un gen fad-3c,

comprendiendo dicho método:

obtener una muestra de DNA genómico de dicha planta de canola;

producir una muestra de contacto poniendo en contacto dicha muestra de DNA genómico con un primer cebador y un segundo cebador, donde dicho primer cebador consiste en la SEQ ID NO: 2, que se une a una región de dicho gen fad-3c aguas arriba de una localización de un polimorfismo de un solo nucleótido de interés, donde dicho segundo cebador consiste en la SEQ ID NO: 3, que se une a una región de dicho gen fad-3c aguas abajo del polimorfismo de un solo nucleótido de interés, en el que dicho primer cebador y dicho segundo cebador producen un amplicón cuando se someten a las condiciones de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR);

someter dicha muestra de contacto a condiciones de la PCR, en las que se produzca dicho amplicón;

permitir que cada una de una primera sonda fluorescente, cuya secuencia consista en SEQ ID NO: 5, y una segunda sonda fluorescente, cuya secuencia consiste en SEQ ID NO: 4,

se hibriden con el amplicón durante un período de tiempo y en una temperatura entre 50-70 grados Celsius, hibridándose preferiblemente dicha primera sonda fluorescente con dicho amplicón cuando dicho polimorfismo de un solo nucleótido de interés no está presente en dicho amplicón, hibridándose preferiblemente dicha segunda sonda fluorescente con dicho amplicón cuando está presente en dicho amplicón dicho polimorfismo de un solo nucleótido de interés;

aumentar dicha temperatura después del período de tiempo especificado en la etapa de permisión; capturar dicha fluorescencia producida por cada una de dichas primera y segunda sondas durante la etapa de aumento; y

determinar la cigosidad de dicha planta de canola, comprendiendo la etapa de determinación una comparación de la fluorescencia producida por cada una de las primera y segunda sondas, donde la fluorescencia de las primera y segunda sondas refleja predominantemente la fluorescencia producida en una muestra de control positiva al SNP homocigótico, lo que indica la presencia de dicho polimorfismo de un solo nucleótido de interés, donde la fluorescencia de las primera y segunda sondas refleja predominantemente la fluorescencia producida en una muestra de control negativa al SNP homocigótico lo que indica una falta de la presencia de dicho polimorfismo de un solo nucleótido de interés y donde la fluorescencia de la primera y segunda sondas refleja predominantemente la fluorescencia producida en una muestra de control positiva al SNP heterocigótico lo que indica que dicha planta de canola comprende un primer alelo que incluye dicho polimorfismo de un solo nucleótido de interés y un segundo alelo que carece de dicho polimorfismo de un solo nucleótido de interés.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2012/061000.

Solicitante: DOW AGROSCIENCES LLC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 9330 ZIONSVILLE ROAD INDIANAPOLIS, IN 46268-1054 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: GUPTA,MANJU, UBAYASENA,LASANTHA CHANDANA, EHLERT,ZOE, CHANNABASAVARADHYA,CHANDRA SHEKARA A.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07H21/04 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07H AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS; ACIDOS NUCLEICOS (derivados de ácidos aldónicos o sacáricos C07C, C07D; ácidos aldónicos, ácidos sacáricos C07C 59/105, C07C 59/285; cianohidrinas C07C 255/16; glicales C07D; compuestos de constitución indeterminada C07G; polisacáridos, sus derivados C08B; ADN o ARN concerniente a la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos o su aislamiento, preparación o purificación C12N 15/00; industria del azúcar C13). › C07H 21/00 Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido que tienen cada una grupos fosfato o polifosfato distintos unidos a los radicales sacárido de los grupos nucleósido, p. ej. ácidos nucleicos. › con desoxirribosilo como radical sacárido.
  • C12Q1/68 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2660976_T3.pdf

 

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