Método para producir proteína de interferón recombinante soluble sin desnaturalización.

Un método para producir una proteína interferón de tipo 1 recombinante,

comprendiendo dicho método:

expresar la proteína interferón recombinante cultivando una célula hospedadora de Pseudomonas o E.coli que contiene un constructo de expresión, comprendiendo dicho constructo de expresión un ácido nucleico que comprende una secuencia de codificación de la proteína interferón de tipo 1 que se ha optimizado para expresión en la célula hospedadora;

lisar la célula hospedadora cultivada;

obtener una fracción insoluble y una fracción soluble a partir de la célula hospedadora lisada;

extraer la fracción insoluble sometiéndola a condiciones de extracción no desnaturalizantes, en el que dichas condiciones de extracción no desnaturalizantes comprenden un detergente iónico dipolar o glucopiranósido de octilo y una concentración no desnaturalizante de un agente caotrópico; y

obtener un sedimento de extracto y un sobrenadante de extracto a partir de la fracción insoluble extraída;

en el que la proteína recombinante en el sobrenadante de extracto está presente en forma soluble, forma activa o una combinación de las mismas, sin someterse además a una etapa de renaturalización o replegamiento.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/026921.

Solicitante: Pfenex, Inc.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 10790 Roselle Street San Diego, CA 92121 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: ALLEN, JEFFREY, FENG,PING-HUA, PATKAR,ANANT, HANEY,KEITH L, CHEW,LAWRENCE, SENGCHANTHALANGSY,LEI LEI PHOKHAM.

Fecha de Publicación: 9 de Agosto de 2017.

Clasificación Internacional de Patentes:

C07K1/02 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 1/00 Procedimientos generales de preparación de péptidos. › en solución.
C07K14/555 C07K […] › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Interferones (IFN).
C07K14/565 C07K 14/00 […] › IFN beta.
C12N15/20 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Interferones.
C12N15/22 C12N 15/00 […] › beta-interferones.
C12P21/02 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › que tienen una secuencia conocida de varios aminoácidos, p. ej. glutation.

PDF original: ES-2639398_T3.pdf

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