Análisis de alto rendimiento de los bordes transgénicos.
Un método para encontrar una secuencia de polinucleótidos desconocida adyacente a una secuencia de polinucleótidos conocida en un DNA aislado,
que comprende:
a) digerir el DNA aislado que contiene una parte o toda la secuencia de polinucleótidos conocida y una secuencia de polinucleótidos desconocida adyacente con uno o más enzimas de restricción adecuados para producir una pluralidad de fragmentos de restricción de polinucleótidos digeridos;
b) sintetizar una cadena complementaria de los fragmentos de restricción de polinucleótidos digeridos utilizando un cebador de oligonucleótidos, diseñado para unirse específicamente a la secuencia de polinucleótidos conocida, teniendo dicha secuencia del cebador de oligonucleótidos una fijación química unida al extremo 5' de la secuencia del cebador de oligonucleótidos;
c) aislar la cadena complementaria por unión de la fijación química a una matriz de aislamiento adecuada, desnaturalizando después la cadena complementaria de los fragmentos de restricción del polinucleótido digerido;
d) ligar un adaptador monocatenario a la cadena complementaria aislada unida a la matriz de aislamiento para producir una cadena complementaria aislada ligada;
e) realizar una primera amplificación de PCR de la cadena complementaria aislada ligada utilizando un primer cebador de PCR diseñado para unir la secuencia de polinucleótidos conocida y un segundo cebador de PCR diseñado para unir el adaptador monocatenario para producir un primer amplicón de PCR;
f) realizar una segunda amplificación de PCR de dicho primer amplicón de PCR, en donde la segunda amplificación de PCR amplifica una secuencia interna de dicho primer amplicón de PCR para producir un segundo amplicón de PCR; y,
g) secuenciar el segundo amplicón de PCR para determinar la secuencia de la secuencia de polinucleótidos desconocida.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2012/031334.
Solicitante: DOW AGROSCIENCES LLC.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 9330 ZIONSVILLE ROAD INDIANAPOLIS IN 46268-1054 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: NOVAK,STEPHEN, ZHOU,NING, CAO,ZEHUI.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12P19/34 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
- C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2650721_T3.pdf
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