Sistemas de RMN y métodos para la detección rápida de analitos.
Un método para detectar la presencia de un patógeno en una muestra de sangre entera,
comprendiendo el método:
(a) proveer una muestra de sangre entera de un sujeto;
(b) mezclar la muestra de sangre entera con un agente de lisis de eritrocitos para producir glóbulos rojos destruidos;
(c) después de la etapa (b), centrifugar la muestra para formar un sobrenadante y una pella, descartando una parte o todo el sobrenadante, y resuspender la pella para formar un extracto, lavando opcionalmente la pella antes de resuspender la pella y repetir opcionalmente la etapa (c);
(d) someter a lisis las células del extracto para formar un lisado;
(e) colocar el lisado de la etapa (d) en un contenedor y amplificar un ácido nucleico en el lisado para formar una solución lisada amplificada que comprende el ácido nucleico diana, en donde el ácido nucleico diana es característico del patógeno que va a ser detectado;
(f) después de la etapa (e) mezclar la solución lisada amplificada con de 1x106 hasta 1x1013 partículas magnéticas por mililitro de la solución lisada amplificada para formar una muestra líquida, en donde las partículas magnéticas tienen un diámetro medio de 700 nm a 950 nm, una relajación T2 por partícula que va de 1x109 a 1x1012mM-1s-1, y unidad estructural de enlazamiento sobre su superficie, siendo operativa las unidades estructurales de enlazamiento para alterar la agregación de las partículas magnéticas en la presencia de un ácido nucleico diana o un agente de enlazamiento multivalente;
(g) colocar la muestra líquida en un dispositivo, comprendiendo el dispositivo un soporte que define un pozo para contener el tubo de detección que comprende las partículas magnéticas y el ácido nucleico diana y que tiene una bobina de RF dispuesta alrededor del pozo, configurada la bobina de RF para detectar una señal producida al exponer la muestra líquida a un campo magnético polarizado creado utilizando uno o más magnetos y una secuencia de pulsos de RF;
(h) exponer la muestra a un campo magnético polarizado y una secuencia de pulsos de RF;
(i) después de la etapa (h) medir la señal de la muestra líquida, en donde la muestra líquida comprende opcionalmente proteínas de sangre entera y oligonucleótidos no diana; y
(j) sobre la base del resultado de la etapa (i) detectar el patógeno, en donde opcionalmente el patógeno es bacterias u hongos, y en donde el método es capaz de detectar una concentración de patógenos de 10 células/mL en la muestra de sangre entera,
preferiblemente en donde las etapas (a) a (i) son completadas al cabo de 3 horas y/o la etapa (i) se lleva a cabo sin ninguna purificación previa de la solución lisada amplificada.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/056936.
Solicitante: T2 Biosystems, Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 101 Hartwell Avenue Lexington, Massachusetts 02421 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: RITTERSHAUS, CHARLES, WILLIAM, LOWERY,THOMAS JAY JR, AUDEH,MARK JOHN, BLANCO,MATTHEW, CHEPIN,JAMES FRANKLIN, DEMAS,VASILIKI, DHANDA,RAHUL, FRITZEMEIER,MARILYN LEE, KOH,ISAAC, KUMAR,SONIA, NEELY,LORI ANNE, MOZELESKI,BRIAN, PLOURDE,DANIELLA LYNN, WELLMAN,PARRIS.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12M1/34 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12M EQUIPOS PARA ENZIMOLOGIA O MICROBIOLOGIA (instalaciones para la fermentación de estiércoles A01C 3/02; conservación de partes vivas de cuerpos humanos o animales A01N 1/02; aparatos de cervecería C12C; equipos para la fermentación del vino C12G; aparatos para preparar el vinagre C12J 1/10). › C12M 1/00 Equipos para enzimología o microbiología. › Medida o ensayo de detección de las condiciones del medio, p. ej. por contadores de colonias.
- G01N33/553 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Soporte metálico o recubierto de un metal.
- G01N33/566 G01N 33/00 […] › utilizando un soporte específico o proteínas receptoras como reactivos para la formación de uniones por ligando.
PDF original: ES-2576927_T3.pdf
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