Método de síntesis de variantes de polinucleótidos.
Un procedimiento de síntesis de una pluralidad de variantes de polinucleótido teniendo cada uno al menos una diferencia de un nucleótido definido con respecto a una secuencia de polinucleótido de referencia,
comprendiendo el método:
(a) amplificar por separado una plantilla de polinucleótido de referencia con cada uno de una pluralidad de pares de cebadores delanteros y traseros, en el que la pluralidad de pares de cebadores delanteros y traseros comprende la pluralidad de diferencias de nucleótidos definidas y en las que cada par genera un amplicón que comprende una secuencia capaz de unirse a una secuencia de solapamiento adyacente de al menos otro amplicón, generando de ese modo una biblioteca direccionable de amplicones en los que:
(i) la biblioteca de amplicones comprende miembros para el montaje de dos o más diferentes variantes de polinucleótido que comprende diferencias definidas de nucleótidos con respecto a una secuencia de polinucleótido de referencia; y
(ii) los miembros de la biblioteca están dispuestos en lugares posicionalmente distintos sobre un sustrato;
(b) ensamblar por separado una pluralidad de conjuntos de amplicones, en los que cada conjunto comprende amplicones que tienen secuencias adyacentes superpuestas capaces de unirse para formar la longitud completa de la secuencia de polinucleótidos de referencia;
(c) la replicación de la pluralidad de conjuntos de amplicones reunidos, generando de ese modo una biblioteca de variantes de polinucleótidos direccionables en los que los miembros de la biblioteca están dispuestos en ubicaciones posicionalmente distintas en un sustrato.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2009/047046.
Solicitante: Codexis, Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 200 Penobscot Drive Redwood City, CA 94063 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: FOX RICHARD J., MIJTS,BENJAMIN, COLBECK,JEFFREY, GIVER,LORRAINE JEAN.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07H21/00 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07H AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS; ACIDOS NUCLEICOS (derivados de ácidos aldónicos o sacáricos C07C, C07D; ácidos aldónicos, ácidos sacáricos C07C 59/105, C07C 59/285; cianohidrinas C07C 255/16; glicales C07D; compuestos de constitución indeterminada C07G; polisacáridos, sus derivados C08B; ADN o ARN concerniente a la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos o su aislamiento, preparación o purificación C12N 15/00; industria del azúcar C13). › Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido que tienen cada una grupos fosfato o polifosfato distintos unidos a los radicales sacárido de los grupos nucleósido, p. ej. ácidos nucleicos.
- C12N15/10 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
- C12N15/11 C12N 15/00 […] › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
- C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2575005_T3.pdf
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