Detección del evento de AAD-1 DAS 40278-9.

Un método para determinar la cigosidad de una planta de maíz que comprende un evento de AAD-1 de maíz DAS-40278-9,

comprendiendo dicho evento una construcción transgénica que comprende un gen AAD-1, estando dicha construcción transgénica flanqueada por ADN genómico de maíz flanqueante en 5' y por ADN genómico de maíz flanqueante en 3', comprendiendo dicho método:

obtener una muestra de ADN de ADN genómico de dicha planta de maíz;

producir una muestra de contacto poniendo en contacto dicha muestra de ADN con

a. un primer cebador del evento y un segundo cebador del evento, en los que dicho primer cebador del evento se une específicamente a dicha construcción transgénica tal y como se define por los restos 1.874-6.689 de la SEQ ID NO: 29, dicho segundo cebador del evento se une específicamente con dicho ADN genómico de maíz flanqueante en 5' tal y como se define por los restos 1-1.873 de SEQ ID NO: 29 o con dicho ADN genómico de maíz flanqueante en 3' tal y como se define por los restos 6.690-8.557 de SED ID NO: 29, y en donde dicho primer cebador del evento y dicho segundo cebador del evento producen un amplicón del evento cuando se someten a una reacción de PCR

b. un cebador directo de referencia y un cebador inverso de referencia que producen un amplicón de referencia a partir de un gen endógeno de referencia de maíz cuando se someten a una reacción de PCR, en donde dicho gen de referencia:

i. es un gen Invertasa endógeno de Zea Mays; o

ii. comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 y SEQ ID NO: 7 o una secuencia que tenga al menos un 90% de identidad de secuencia con cualquiera de las secuencias mencionadas anteriormente,

c. una sonda fluorescente del evento que hibrida con dicho amplicón del evento,

d. una sonda fluorescente de referencia que hibrida con dicho amplicón de referencia;

someter dicha muestra de contacto a un ensayo de sondas de hidrólisis basado en la fluorescencia que libera la fracción fluorescente de la sonda de la fracción inhibidora de la fluorescencia de la sonda;

cuantificar dicha sonda fluorescente del evento que ha hibridado con dicho amplicón del evento;

cuantificar dicha sonda fluorescente de referencia que ha hibridado con dicho amplicón de referencia;

comparar la cantidad de sonda fluorescente hibridada del evento con la de sonda fluorescente hibridada de referencia; y

determinar la cigosidad de DAS-40278-9 mediante la comparación de los índices de fluorescencia de la sonda fluorescente hibridada del evento y de la sonda fluorescente hibridada de referencia.