Procedimiento de análisis de metilación del ADN de alto rendimiento.
Un procedimiento para detectar la metilación de la citosina en dinucleótidos CpG dentro de una muestra de ADN genómico,
en el que la cantidad de metilación en la muestra de ácido nucleico se determina cuantitativamente basándose en la referencia a una reacción de control para la cantidad de ácido nucleico aportado, que comprende:
(a) poner en contacto una muestra de ADN genómico con un agente modificante que modifica citosinas no metiladas para producir un ácido nucleico transformado;
(b) amplificar el ácido nucleico transformado por medio de cebadores de oligonucleótidos en presencia de una o una pluralidad de sondas específicas de oligonucleótidos, en el que una o una pluralidad de sonda(s) específica(s), pero no los cebadores, son capaces de distinguir entre ácido nucleico metilado y no metilado;
(c) detectar el ácido nucleico metilado en base a un desplazamiento de la sonda mediado por amplificación y PCR en tiempo real basada en fluorescencia.
(d) medir la amplificación imparcial de todos los posibles estados de metilación en dicho acido nucleico transformado utilizando una segunda PCR cuantitativa en tiempo real basada en basada en fluorescencia, en la que ni los cebadores ni la(s) sonda(s) se superponen sobre ningún dinucleótido CpG; y
(e) formar una proporción de la cantidad de metilación detectada en (c) y la cantidad de ADN aportado detectada en (d).
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E06011777.
Solicitante: UNIVERSITY OF SOUTHERN CALIFORNIA.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 3716 SOUTH HOPE STREET SUITE 313 LOS ANGELES, CA 90007-4344 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: LAIRD, PETER, W., DANENBERG, KATHLEEN, D., CARROLL,CINDY A.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N15/09 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
- C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
- G01N21/78 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 21/00 Investigación o análisis de los materiales por la utilización de medios ópticos, es decir, utilizando rayos infrarrojos, visibles o ultravioletas (G01N 3/00 - G01N 19/00 tienen prioridad). › produciendo un cambio de color.
- G01N33/53 G01N […] › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
- G01N33/566 G01N 33/00 […] › utilizando un soporte específico o proteínas receptoras como reactivos para la formación de uniones por ligando.
- G01N33/58 G01N 33/00 […] › en los que intervienen sustancias marcadas (G01N 33/53 tiene prioridad).
PDF original: ES-2564048_T3.pdf
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