Uso terapéutico de precursor de óxido nítrico.

Citrulina para usar en un procedimiento de tratamiento o prevención de una afección o trastorno en un sujeto que se somete a cirugía cardiaca,

que está asociado con la función subóptima del ciclo de la urea.

Uso terapéutico de precursor de óxido nítrico 5 Campo técnico

[0001] La presente invención se refiere a la citrulina para usar en un procedimiento para tratar o prevenir una afección o trastorno en un sujeto que se somete a cirugía cardiaca, que está asociado con una función subóptima del ciclo de la urea. Se describen además moléculas de polinucleótido aisladas útiles para analizar fenotipos de la 10 carbamil fosfato sintasa I, péptidos codificados por estas moléculas, y sus usos de diagnóstico y terapéutico relacionados con un polimorfismo recién identificado de la carbamil fosfato sintasa I. Entre dichos usos hay procedimientos descritos para determinar la susceptibilidad de un sujeto a la hiperamonemia, producción reducida de arginina y a la toxicidad en el trasplante de médula ósea basado en un análisis de una muestra de ácido nucleico aislada de biopsias tisulares del sujeto.

Tabla de abreviaturas

ABG - gas(es) de la sangre arterial ALI - lesión pulmonar aguda 20 ASO - oligonucleótido específico de alelo ATP - trifosfato de adenosina BCAA - aminoácido(s) de cadena ramificada BMT - trasplante de médula ósea BSA - albúmina de suero bovino 25 BuCy - busulfán, ciclofosfamida BUN - nitrógeno ureico en la sangre CBVP16 - ciclofosfamida, biscloroetilnitrosourea, etopósido cc - centímetros cúbicos CPSI - carbamil fosfato sintasa I 30 CTC - ciclofosfamida, tiotepá, carboplatino

CVP16TBI - ciclofosfamida, etopósido, irradiación corporal total ECMO - oxigenación por membrana extracorpórea fl - longitud completa GSHosc - glutatión sintasa 35 HAT - hipoxantina, aminopterina, timidina HVOD - enfermedad venooclusiva hepática ¡NO - óxido nítrico inhalado KDa - kilodalton

KLH - hemocianina de lapa californiana 40 I - litro

LAT - traducción activada por ligado LCR - reacción en cadena de la ligasa MAS - síndrome de aspiración de meconio NAG - n-acetil-glutamato

NASDA - amplificación basada en secuencia de ácido nucleico NO o NOx - óxido nítrico NOS - óxido nítrico sintasa O/C - ornitina/citrulina

PBSCT - trasplante de citoblastos de sangre periférica 50 PPHN - hipertensión pulmonar persistente de recién nacidos POR - reacción en cadena de la polimerasa RCR - reacción en cadena de reparación RDS - síndrome de dificultad respiratoria REF - huella de endonucleasa de restricción 55 RT - transcriptasa inversa

SSCP - polimorfismo de conformación de una cadena SDA - activación del desplazamiento de cadena SNP - polimorfismo de un solo nucleótido TC - tiotepá, ciclofosfamida

TEAA - aminoácidos esenciales totales UC - ciclo de la urea UCF - función del ciclo de la urea VPA - ácido valproico 5

Técnica anterior

[0002] La ruta sintética in vivo para la arginina comienza con la ornitina. La ornitina se combina con el fosfato de carbamilo para producir citrulina, que a su vez se combina con aspartato, en presencia de trifosfato de adenosina

(ATP) para producir argininosuccinato. En la etapa final, el fumarato se escinde del argininosuccinato para producir arginina. La ruta degradativa para la arginina es por la acción hidrolítica de la arginasa, para producir ornitina y urea. Estas reacciones forman el ciclo de la urea. El ciclo de la urea sirve como ruta principal para eliminar nitrógeno residual producido por el metabolismo de proteínas endógenas y exógenas, y se muestra esquemáticamente en la figura 1.

[0003] La alteración de los procesos metabólicos es un efecto secundario frecuente de la quimioterapia. De hecho, los agentes usados en la quimioterapia con dosis alta afectan a una serie de procesos celulares. Los procesos metabólicos localizados en tejidos quimiosensibles tales como el hígado y el tracto gastrointestinal, tienen un riesgo particularmente grande de alteración.

[0004] La renovación y procesamiento constante del nitrógeno implica a todos los tejidos del cuerpo, pero las primeras etapas críticas del ciclo de la urea están limitadas al hígado e intestino. La quimioterapia de dosis alta asociada con el trasplante de médula ósea (BMT) interfiere con la función hepática y es tóxica para el intestino. La hiperamonemia idiopática, que sugiere disfunción del ciclo de la urea, se ha descrito que está asociada con una alta

mortalidad en pacientes que se someten a trasplante de médula ósea Davies y col., Bone Marrow Transplantation, 17:1119-1125 (1996); Tse y col., American Journal of Hematology, 38:140-141 (1991); y Mitchell y coll., American Journal of Medicine, 85:662-667 (1988).

[0005] Una complicación común del BMT es la enfermedad venooclusiva hepática (HVOD). La HVOD está 30 asociada con ictericia, tamaño aumentado del hígado y alteración del flujo sanguíneo hepático normal. La HVOD se

produce en aproximadamente 20 a 40% de los pacientes y está asociada con morbilidad y mortalidad.

[0006] El óxido nítrico (NO) tiene una función en la regulación del tono vascular y en el mantenimiento de la permeabilidad de las vénulas hepáticas y pulmonares después de quimioterapia de dosis alta. La función del ciclo de

la urea intacto es importante no solo para la excreción del amoniaco sino también en el mantenimiento de niveles tisulares adecuados de arginina, el precursor del NO.

[0007] La carbamll fosfato slntasa I (CPSI) es la enzima limitante de la velocidad que cataliza la primera etapa ejecutada de la ureagénesls por el ciclo de la urea. La CPSI es muy específica de tejido, con función y producción

sustancialmente limitada al hígado e Intestinos. Codificada genómicamente, la CPSI es producida en el citoplasma y transportada a las mitocondrlas donde es escindida en su forma monomérica madura de 160 kDa. La enzima combina amoniaco y bicarbonato para formar carbamilo con el gasto de dos moléculas de ATP y usando el cofactor N-acetil-glutamato (NAG).

[0008] Cualquier predisposición genética a una función del ciclo de la urea disminuida conduciría a hiperamonemia y contribuiría probablemente a la gravedad de trastornos asociados con la función subóptima del ciclo de la urea, incluyendo la toxicidad relacionada con el BMT. Por lo tanto, es necesario en la técnica la caracterización de alelos presentes en poblaciones que padecen trastornos asociados con la función subóptima del ciclo de la urea, que se someten a BMT o que se enfrentan de otra forma a la exposición de hepatotoxinas 50 ambientales o farmacológicas. En vista de la función de la CPSI en el ciclo de la urea, hay una necesidad particular de caracterización de alelos de la CPSI presentes en dichas poblaciones.

[0009] Russel I. y col., ANESTHESIA AND ANALGESIA, vol. 87, no. 1, julio 1998, páginas 46-51, describen los efectos del óxido nítrico inhalado en la hipertensión pulmonar postoperatoria en bebés y niños que se someten a

reparación quirúrgica de enfermedad cardiaca congénita.

[0010] Schulze-Nelck y col., CIRCULATION, vol. 100, no. 7, agosto 1999, páginas 749-755, investigaron la disfunción endotelial pulmonar en niños con enfermedad cardiaca congénita evaluando la ruta de L-arginina-óxido nítrico (NO).

Resumen de la invención

[0011] La presente invención describe la citrulina para usar en un procedimiento para el tratamiento o prevención 5 de una afección o trastorno en un sujeto que se somete a cirugía cardiaca, que está asociado con la función

subóptima del ciclo de la urea.

[0012] Preferiblemente, la citrulina se administra en una dosis en el intervalo de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 1.000 mg.

[0013] Más preferiblemente, la citrulina se administra en un intervalo de dosis de aproximadamente 0,5 mg a aproximadamente 500 mg.

[0014] Incluso más preferiblemente, la citrulina se administra en un intervalo de dosis de aproximadamente 1,0 mg 15 a aproximadamente 250 mg.

[0015] Preferiblemente, el sujeto es un sujeto humano.

[0016] Se describe un procedimiento de cribado de la susceptibilidad a la función subóptima del ciclo de la urea en 20 un sujeto. El procedimiento comprende las etapas de: (a) obtener una muestra de ácido nucleico del sujeto; y (b)

detectar un polimorfismo de un gen de la carbamil fosfato sintasa I (CPSI) en la muestra de ácido nucleico del sujeto, indicando la presencia del polimorfismo la susceptibilidad del sujeto a la función subóptima del ciclo de la urea. Se describe además la detección del polimorfismo con respecto a la determinación de la susceptibilidad de un sujeto a la toxicidad por trasplante de médula ósea.

[0017] Preferiblemente, el polimorfismo del polipéptido de la carbamil fosfato slntasa comprende la transversión de C a A en el exón 36 del gen de CPSI, más preferiblemente en el... [Seguir leyendo]

1. Citrulina para usar en un procedimiento de tratamiento o prevención de una afección o trastorno en un sujeto que se somete a cirugía cardiaca, que está asociado con la función subóptima del ciclo de la urea.

2. La citrulina para usar en un procedimiento de tratamiento o prevención de acuerdo con la

reivindicación 1, caracterizado porque la citrulina se administra en un intervalo de dosis de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 1.000 mg.

3. La citrulina para usar en un procedimiento de tratamiento o prevención de acuerdo con la

reivindicación 2, caracterizado porque la citrulina se administra en un intervalo de dosis de aproximadamente 0,5

mg a aproximadamente 500 mg.

4. La citrulina para usar en un procedimiento de tratamiento o prevención de acuerdo con la

reivindicación 2, caracterizado porque la citrulina se administra en un intervalo de dosis de aproximadamente 1,0

mg a aproximadamente 250 mg.

5. La citrulina para usar en un procedimiento de tratamiento o prevención de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el sujeto es un sujeto humano.