Tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria por modulación de anexina-1 (lipocortina 1).

Un anticuerpo anti-anexina-1 (Anx-A1), o uno de sus fragmentos que se une a Anx-A1, para uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria.

Tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria por modulación de anexina-1 (lipocortina 1)

La presente invención se refiere a métodos para tratar una enfermedad mediada por linfocitos T modulando la actividad de anexina-1.

Las enfermedades autoinmunitarias son patologías discapacitantes crónicas causadas por el mal funcionamiento del sistema ¡nmunitario. En la mayoría de los casos son iniciadas por una respuesta incontrolada de linfocitos T a auto- antígenos presentados en el contexto de moléculas del MHC de las células presentadoras de antígenos (APC). Se ha descrito que diversos factores están implicados en la patogénesis de enfermedades autoinmunitarias que incluyen factores ambientales, genéticos y virales, con una característica general: la hiperreactividad de los linfocitos T.

Los glucocortlcoldes (GC) se utilizan con frecuencia para la terapia de una variedad de enfermedades autoinmunlta- rlas crónicas debido a su capacidad para bloquear simultáneamente tanto la respuesta inmunltarla innata como la adaptatlva. Los estudios realizados durante más o menos los 1 últimos años por los autores de la presente invención y otros grupos de investigación han demostrado que algunos de los efectos Inflamatorios de los GC sobre la respuesta Inmunltarla innata están mediados por una proteína llamada anexina-1 (Anx-A1). Se ha demostrado que esta proteína ejerce un control homeostátlco sobre varios tipos de células incluyendo neutrófilos, macrófagos y células endotellales. Sin embargo, un aspecto que siempre ha sido descuidado es el papel de la Anx-A1 en la respuesta inmunitaria adaptatlva. Esto es sorprendente considerando que Anx-A1 ha sido propuesta como uno de los segundos mensajeros de los efectos farmacológicos de los GC.

Los autores de la presente invención han demostrado previamente que Anx-A1 desempeña un papel homeostático en los linfocitos T modulando la fuerza de señalización del receptor de linfocitos T (TCR) (DAcquisto et al., Blood 19: 195-112, 27).

Además, los autores de la invención han demostrado que altos niveles de Anx-A1 disminuyen el umbral de activación de los linfocitos T y favorecen la diferenciación en linfocitos Th1, mientras que ratones deficientes en Anx-A1 muestran una activación de los linfocitos T deteriorada y un aumento de la diferenciación en linfocitos Th2 (DAcquisto et al., Eur. J. Immunol. 37: 3131-3142, 27).

El documento WO 25/27965 describe el hallazgo de un mecanismo por el que los neutrófilos apoptósicos suministran señales anti-inflamatorias a las células dendríticas e identifica un anticuerpo que interfiere con este proceso. En particular, el documento WO 25/27965 describe la identificación de Anx-1 como una molécula de señalización que se dice que es expresada por neutrófilos apoptósicos para inhibir la activación y maduración de las células dendríticas. El documento WO 25/27965 propone que un anticuerpo denominado detector de células apoptósicas 5 (DAC5, por la expresión inglesa Detector of Apoptotic Cells Ñor. 5) reconoce y bloquea los efectos anti-inflamatorios de la Anx-1 presentada en la superficie de los neutrófilos apoptósicos en la fagocitosis por las células dendríticas. El documento WO 25/27965 se refiere por lo tanto a la posibilidad de tratamiento de diversas enfermedades haciendo actuar dichas células apoptósicas como dianas y eliminándolas provocando una respuesta inflamatoria, pero no analiza el papel de Anx-1 en la activación de los linfocitos T.

El documento WO 25/27965 reivindica que las anexinas se expresan en células que experimentan apoptosis (véase, por ejemplo, la página 8, líneas 6-7 y 29-3) y que estas anexinas están presentadas en la superficie de estas células (véase, por ejemplo, la página 6, líneas 1-11 y la página 8, líneas 16-17). Sin embargo, dos estudios separados (Maderna et al., J. Immunol., 174: 3727-3733, 25; Scannell et al., J. Immunol, 178: 4595-465, 27) han demostrado que las células apoptósicas, incluyendo los neutrófilos, liberan anexina-1, en lugar de expresar la proteína y presentarla en la superficie celular. Puesto que la anexina-1 es liberada de la célula, no se puede reivindicar que el DAC5 identificaría sólo las células apoptósicas que expresan la proteína en la superficie, puesto que el anticuerpo también identificaría la anexina-1 liberada.

Además, el documento WO 25/27965 reivindica que la co-incubación de neutrófilos apoptósicos que expresan la anexina-1 en su membrana celular con células dendríticas activadas con LPS provoca la inhibición de la secreción de TNF-a y la sobre-regulación de los marcadores de activación CD83, CD86 y HLA-DR, y que la adición de DAC5 a este cultivo revierte los efectos inhibidores de los neutrófilos apoptósicos que expresan la anexina-1 (página 5, línea 31 a página 6, línea 8). Los datos de los autores de la presente invención (Huggins et al., FASEB J. 28, en prensa) demuestran que las células dendríticas liberan Anx-1 por estimulación con LPS y por lo tanto el DAC5 descrito en el documento WO 25/27965 se uniría a la Anx-1 exteriorizada en los neutrófilos, así como a la anexina-1 liberada por las células dendríticas. Además, los autores de la presente invención han encontrado que la ausencia de anexina-1 en las células dendríticas provoca un aumento de la expresión de los marcadores de maduración/activación y la producción de citoquinas inflamatorias, tales como TNF-a e IL-1(3 e IL-12. Por lo tanto, el anticuerpo DAC5 descrito en el documento WO 25/27965 debe afectar a la maduración y activación de las células dendríticas y por lo tanto a la subsiguiente modulación de la respuesta inmunitaria.

En apoyo de lo anterior, los autores de la presente invención han demostrado que el co-cultivo de células dendríticas Anx-A1'/_con linfocitos T vírgenes en una reacción linfocitaria mixta (MLR) mostró una capacidad significativamente reducida para inducir la proliferación de linfocitos T o la producción de IL-2 e IFN-y. Por lo tanto, los agentes que

bloquean la función de Anx-A1 en las células dendríticas deben reducir su capacidad para estimular una fuerte respuesta ¡nmunltaria mediada por linfocitos T. Los anticuerpos citados en el documento WO 25/27965 no serían por tanto adecuados para tratar las enfermedades citadas en dicha solicitud de patente.

De acuerdo con un primer aspecto de la invención, se proporciona un anticuerpo anti-anexina-1 (Anx-A1) o uno de sus fragmentos que se une a Anx-A1 para uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria.

Los autores de la presente invención han demostrado previamente que Anx-A1 modula la fuerza de señalización del receptor de linfocitos T (TCR) y que altos niveles de Anx-A1 disminuyen el umbral de activación de los linfocitos T y favorecen la diferenciación en linfocitos Th1. Los autores de la presente invención han identificado ahora la vía de la anexina, y la señal resultante, como diana para el bloqueo con el fin de tratar las enfermedades mediadas por linfocitos T. Dichas enfermedades incluyen aquellas en las que se produce una activación anómala de linfocitos T, por ejemplo, muchas enfermedades autoinmunitarias, y aquellas en las que es deseable desviar la diferenciación de los linfocitos T a favor de los linfocitos Th1 en lugar de los Th2.

La presente invención utiliza una molécula de unión específica que se une a la anexina-1 (Anx-A1).

Las anexinas son un grupo de proteínas celulares que se unen al calcio y a fosfolípidos, y también son conocidas como lipocortinas. La familia de las anexinas tiene 13 miembros, incluyendo anexina A1, anexina A2 y anexina A5. La anexina-A1 también se conoce como anexina-1 y se denomina en la presente memoria "Anx-A1". La anexina-1 (Anx-A1) es una proteína de 37 kDa y fue descrita originalmente como un mediador de las acciones de los glucocor- ticoides. En los últimos años se ha demostrado que Anx-A1 desempeña un papel homeostático en el sistema inmuni- tario adaptativo, en particular en los linfocitos T, modulando la fuerza de señalización del receptor de linfocitos T (TCR). La Anx-A1 actúa como un sub-regulador endógeno de la inflamación en células del sistema ¡nmunitario innato in vivo. La Figura 1A es un diagrama de cintas que muestra la estructura tridimensional de Anx-A1.

Hay ocho secuencias de nucleótldos humanas que codifican Anx-A1. De éstas, sólo cuatro son traducidas y por lo tanto hay cuatro ¡soformas de Anx-A1, denominadas ANXA1-2, ANXA1-3, ANXA1-4 y ANXA1-6. Estas secuencias están disponibles en el sitio web Ensembl ( www.ensembl.org ) y se denominan OTTHUMT52664 (ANXA1-2), OTTHUMT52665 (ANXA1-3), OTTHUMT52666 (ANXA1-4) y OT-

THUMT52668 (ANXA1-6). Las secuencias de aminoácidos y nucleótidos de una ¡soforma de anexina-1... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-anexina-1 (Anx-A1), o uno de sus fragmentos que se une a Anx-A1, para uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria.

2. El anticuerpo anti-Anx-A1, o uno de sus fragmentos, de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo anti-Anx-A1 es un anticuerpo monoclonal o uno de sus fragmentos.

3. El anticuerpo anti-Anx-A1, o uno de sus fragmentos, de acuerdo con la reivindicación 2, en el que el anticuerpo monoclonal está humanizado.

4. El anticuerpo anti-Anx-A1, o uno de sus fragmentos, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el fragmento es un fragmento Fab, F(ab')2 Fv o una molécula monocatenaria Fv (scFv).

5. El anticuerpo anti-Anx-A1, o uno de sus fragmentos, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la enfermedad autoinmunitaria se selecciona del grupo que consiste en artritis reumatoide (RA), esclerosis múltiple (MS), lupus eritematoso sistémico (SLE), enfermedad de Addison, enfermedad de Grave, escle- rodermia, polimiositis, diabetes mellitus, uveorretinitis autoinmunitaria, colitis ulcerosa, pénfigo vulgar, enfermedad inflamatoria intestinal, tiroiditis autoinmunitaria y psoriasis.

6. El anticuerpo anti-Anx-A1, o uno de sus fragmentos, de acuerdo con la reivindicación 5, en el que dicha enfermedad autoinmunitaria se selecciona del grupo que consiste en artritis reumatoide (RA), esclerosis múltiple (MS) y lupus eritematoso sistémico (SLE).

7. Uso de un anticuerpo anti-Anx-A, o uno de sus fragmentos que se une a Anx-A1, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria.

8. Uso de acuerdo con la reivindicación 7, en el que dicha enfermedad autoinmunitaria se selecciona del grupo que consiste en artritis reumatoide (RA), esclerosis múltiple (MS), lupus eritematoso sistémico (SLE), enfermedad de Addison, enfermedad de Grave, esclerodermia, polimiositis, diabetes mellitus, uveorretinitis autoinmunitaria, colitis ulcerosa, pénfigo vulgar, enfermedad inflamatoria intestinal, tiroiditis autoinmunitaria y psoriasis.

9. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que dicha enfermedad autoinmunitaria se selecciona del grupo que consiste en artritis reumatoide (RA), esclerosis múltiple (MS) y lupus eritematoso sistémico (SLE).