Proteínas de fijación al antígeno receptor A de la IL-17.

Anticuerpo aislado o fragmento del mismo que comprende una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera que comprende la SEQ ID n.

º 224, una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera que comprende la SEQ ID n.º 225, una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera que comprende la SEQ ID n.º 226, una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada que comprende la SEQ ID n.º 146, una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada que comprende la SEQ ID n.º 147 y una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada que comprende la SEQ ID n.º 148, en donde dicho anticuerpo o fragmento del mismo se fija al receptor A de la IL-17 humana.

Proteínas de fijación al antígeno receptor A de la IL-17 Campo de la invención

La presente invención se refiere a los anticuerpos contra el receptor A de la IL-17 (IL-17RA o IL-17R), a las secuencias polinucleotídicas que codifican dichos anticuerpos y a las composiciones de los anticuerpos para ser usados en el tratamiento de enfermedades mediadas por la activación del receptor A de la IL-17 por acción de uno o más ligandos IL-17.

Antecedentes

La IL-17A es una citocina inflamatoria que se identificó al principio como un transcripto de expresión selectiva en los linfocitos T activados. El IL-17RA se expresa de manera ubicua y se ha demostrado que se fija a la IL-17A con una afinidad de aproximadamente ,5 nM (Yao et al., 1995, Immunity 3: 811-821). Se han identificado otros cinco ligandos más de tipo IL-17 (IL-17B a IL-17F) y otros cuatro receptores más de tipo IL-17RA (IL-17RB a IL-17RE) (Kolls y Linden, 24, Immunity 21: 467-476).

Se ha demostrado que el IL-17RC se fija a la IL-17A y a la IL-17F. Las observaciones de que la deficiencia del IL- 17RA y la neutralización del IL-17RA con anticuerpos suprimen el funcionamiento de IL-17A e IL-17F sugieren que el IL-17RC no puede transmitir una señal de IL-17A o IL-17F en ausencia del IL-17RA (Toy et al., 26, J. Immunol. 177: 36-39; McAllister et al., 25, J. Immunol. 175: 44-412). Adicionalmente, la expresión forzada del IL-17RC en las células sin IL-17RA no restaura el funcionamiento de IL-17A o IL-17F (Toy et al., 26, J. Immunol. 17: 36-39).

La IL-17A y la IL-17F se expresan predominantemente desde los linfocitos T CD4+ memoria activados (Kolls y Linden, 24, véase más arriba). Se ha propuesto que un subconjunto de linfocitos T CD4+ patógenos productores de IL-17A, ThlL-17, se expande en presencia de la IL-23 (Langrish et al., 25, J. Exp. Med. 21: 233-24). Adicionalmente, se ha demostrado que la IL-15 y el miembro de la superfamilia de TNF, OX4L, inducen la expresión de la IL-17A (Nakae et al., 23b, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 1: 5986-599; Ziolkowska et al., 2, J. Immunol. 164: 2832-2838). La IL-6 y el TGF-p también inducen la expresión de la IL-17A.

La IL-17A y la IL-17F se fijan al IL-17RA y lo activan. Se ha demostrado que el IL-17RA es importante para regular las respuestas inmunitarias. La activación del IL-17RA conduce a la producción de las citocinas, quimiocinas, factores de crecimiento y otra proteínas que contribuyen a los síntomas y/o la patología de numerosas enfermedades. La IL-17A es una citocina inflamatoria que induce la producción de citocinas y otros mediadores que conducen a enfermedades y efectos fisiológicos tales como la inflamación, la degradación de cartílagos y la resorción ósea. La IL-17A también interviene en una serie de afecciones inflamatorias que incluyen artritis (artritis reumatoide), psoriasis, enteropatía inflamatoria, esclerosis múltiple y asma. (L¡ et al., 24, Huazhong Univ. Sci. Technolog. Med. Sci. 24: 294-296; Fujino et al., 23, Gut. 52: 65-7; Kauffman et al., 24, J. Invest. Dermatol. 123: 137-144; Mannon et al., 24, N. Engl. J. Med. 351: 269-279; Matusevicius et al., 1999, Mult. Scler5, 11-14; Linden et al., Eur Respir J. mayo de 2; 15(5): 973-7; Molet et al., 21, J. Allergy Clin. Immunol. 18: 43-438). Los estudios recientes han sugerido que la IL-17F interviene en la inducción de respuestas inflamatorias (Oda et al., 26, American J. Resp. Crit. Care Medicine, 15 de enero de 26; Numasaki et al., 24, Immunol. Lett. 95: 97- 14).

Los aspectos de la invención dan a conocer proteínas de fijación a antígeno que se fijan específicamente al IL-17RA e inhiben la activación del IL-17RA mediada por los miembros de la familia de la IL-17 tales como, pero sin limitarse a ellos, IL-17Ay/o IL-17F, como se describe con más detalle en la presente memoria.

Breve descripción de los dibujos

En la figura 1 se muestra un dendrograma del análisis filogenético de las CDR (regiones determinantes de la complementariedad) de los dominios variable de cadena pesada (Vh) y variable de cadena ligera (Vl) de diferentes proteínas (anticuerpos) de fijación al antígeno IL-17R.

En la figura 2 se representa un alineamiento de las secuencias aminoacídicas de las CDR de los dominios variables de cadena pesada (Vh) de diferentes proteínas (anticuerpos) de fijación al antígeno IL-17R. Se resaltan las regiones CDR1, CDR2 y CDR3.

En la figura 3 se representa un alineamiento de las secuencias aminoacídicas de las CDR de los dominios variables de cadena ligera (VL) de diferentes proteínas (anticuerpos) de fijación al antígeno IL-17R. Se resaltan las regiones CDR1, CDR2 y CDR3.

En la figura 4 se muestra que las puntuaciones clínicas medias de los ratones IL-17RA_/_ (ratones agónicos o KO) son mucho más bajas que las de los ratones genéticamente intactos (WT, por su nombre en inglés) en un modelo de artritis inducida por colágeno (AIC).

En la figura 5 se muestra el retraso de la aparición de la encefalomielitis autoinmunitaria experimental (EAE) en los

ratones agénicos sin el IL-17RA en comparación con los ratones genéticamente intactos en un modelo inducido por la glucoproteína de la mlellna de los ollgodendrocltos (MOG, por su nombre en inglés).

En la figura 6 se muestra la reducción de las puntuaciones clínicas en los ratones agénicos sin el IL-17RA en comparación con los ratones genéticamente intactos en un modelo inducido por MOG.

En la figura 7 se muestra que los ratones agénicos sin el IL-17RA tienen menos cantidad de células inflamatorias en líquido de lavado broncoalveolar (LBA) que el genéticamente intacto en un modelo de asma inducido por la ovalbúmlna.

En la figura 8 se muestra que los ratones agénicos sin el IL-17RA tienen menos cantidad de eosinófilos (figura 8A), neutrófilos (figura 8B) y llnfocltos (figura 8C) en líquido de LBA que los ratones genéticamente intactos en un modelo de asma inducida por la ovalbúmlna. En la figura 8D se muestra la ausencia de cambios en los macrófagos del líquido del LBA observada en los ratones WT o en los ratones agénicos sin el IL-17RA (intactos o provocados con OVA).

En la figura 9 se muestra la Inhibición dependiente de la dosis mediante un Acm contra IL-17RA en un modelo genéticamente intacto (WT) de artritis inducida por colágeno (AIC). Se observó una P < ,5 cuando se comparó el Acm contra el IL-17RA en los grupos de tratamiento con 1 pg y 3 pg frente al grupo de tratamiento de control

(días 13, 15 y 16).

En la figura 1 se muestran los resultados del tratamiento terapéutico con el Acm contra el IL-17RA. Los datos muestran la estabilización de las puntuaciones clínicas medias de los ratones genéticamente intactos en un modelo estándar de AIC. Estos datos demuestran que la inhibición del IL-17RA mediante una proteína de fijación al antígeno IL-17RA puede ser terapéuticamente útil para tratar la artritis reumatoide (AR), en especial para la protección del hueso y del cartílago de la articulación.

En la figura 11 se muestra que el tratamiento terapéutico con el Acm anti-IL-17RA estabilizó las puntuaciones clínicas medias de los ratones agénicos sin TNFR p55/p75 en un modelo estándar de AIC. Estos datos demuestran que la inhibición del IL-17RA mediante una proteína de fijación al antígeno IL-17RA puede ser terapéuticamente útil para tratar la AR, en especial para la protección del hueso y del cartílago de la articulación. En particular, la inhibición del IL-17RA fue capaz de estabilizar la enfermedad en un modelo independiente de la señalización del TNF.

En la figura 12 se muestra que los Acm humanos contra el IL-17RA de ejemplo (AMh14/AMl14, AMh22/AMl22, AMh19/AMi_19 y AMh18/AMi_18) fueron capaces de inhibir la producción de IL-16 inducida por la IL-17 de macaco cangrejero a partir de las células JTC-12 (línea celular de riñón de macaco cangrejero). La línea () representa el valor del control positivo de la IL-17 de macaco cangrejero en combinación con el TNF-a. La línea (-.-.-) representa el valor del control positivo de TNF-a de macaco cangrejero. La línea (...) representa el valor medio del control.

En la figura 13 se muestra la variación de secuencia en las regiones flanqueantes de la SEQ ID n.° 4 (AML14) en relación con los restos en las células reproductoras y el efecto sobre los valores de CI5.

En la figura 14 se muestra que las dos variantes que tienen restos que coinciden con los de las células reproductoras (véase la figura 13) reducían la actividad inhibidora de la IL-17A en relación con AMh14/AMi_14, lo que indica que se toleraba cierta variación en las regiones flanqueantes, pero que algunos restos pueden influir en la actividad. La línea () indica el valor del control positivo de la estimulación... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo aislado o fragmento del mismo que comprende una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera que comprende la SEQ ID n.° 224, una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera que comprende la SEQ ID n.° 225, una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera que comprende la SEQ ID

n.° 226, una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada que comprende la SEQ ID n.° 146, una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada que comprende la SEQ ID n.° 147 y una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada que comprende la SEQ ID n.° 148, en donde dicho anticuerpo o fragmento del mismo se fija al receptor A de la IL-17 humana.

2. Anticuerpo aislado o fragmento del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho anticuerpo 1 comprende una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera que comprende la SEQ ID n.° 4 y

una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada que comprende la SEQ ID n.° 14, en donde dicho anticuerpo o fragmento del mismo se fija al receptor A de la IL-17 humana.

3. Anticuerpo aislado o fragmento del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho anticuerpo o fragmento del mismo comprende una secuencia de cadena pesada que comprende la SEQ ID n.° 427 y una

secuencia de cadena ligera que comprende la SEQ ID n.° 429, en donde dicho anticuerpo o fragmento del mismo se fija al receptor A de la IL-17 humana.

4. Anticuerpo o fragmento del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicho anticuerpo es un anticuerpo lgG2.

5. Composición farmacéutica, que comprende el anticuerpo o fragmento del mismo de acuerdo con cualquiera 2 de las reivindicaciones 1 a 4.

6. Polinucleótido aislado, en donde dicho polinucleótido codifica el anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

7. Plásmido, que comprende el polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 6.

8. Plásmido de acuerdo con la reivindicación 7, en donde dicho plásmido es un vector de expresión.

9. Célula aislada, que comprende dicho vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 8, en donde dicha

célula se selecciona del grupo que consiste en:

a. una célula procariota;

b. una célula eucariota;

c. una célula de mamífero;

d. una célula de insecto; y

e. una célula CHO.

1. Procedimiento para hacer el anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende la incubación de dicha célula aislada de acuerdo con la reivindicación 9 en las condiciones que le permiten expresar dicho anticuerpo.

11. Anticuerpo o fragmento del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5 para ser usada en el tratamiento de una enfermedad o afección patológica asociada a la activación del receptor A de la IL-17, en donde la enfermedad o afección patológica se selecciona del grupo que consiste en inflamación, enfermedad autoinmunitaria, artritis, artritis reumatoide, artritis juvenil, artritis reumatoide juvenil, artritis reumatoide pauciarticular, artritis reumatoide juvenil pauciarticular, artritis 4 reumatoide poliarticular, artritis reumatoide juvenil poliarticular, artritis reumatoide juvenil de aparición sistémica, espondilitis anquilosante, espondilitis anquilosante juvenil, artritis psoriásica, artritis psoriásica juvenil, psoriasis, psoriasis en placas, artritis reumatoide de aparición sistémica, dermatomiositis, dermatitis atópica, esclerodermia, esclerodermia juvenil, polimiositis, sarcoidosis, aterosclerosis, lupus eritematoso sistémico, lupus eritematoso sistémico juvenil, enteropatías inflamatorias, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, celiaquía, esclerosis múltiple, 45 asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica y enfermedad de injerto contra huésped.

12. Anticuerpo o fragmento del mismo para ser usado de acuerdo con la reivindicación 11, que además comprende la administración de un segundo tratamiento que comprende una composición farmacéutica.

13. Anticuerpo aislado, que comprende un anticuerpo producido por las células CHO de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada codificada por una secuencia que

comprende la SEQ ID n.° 426 y una cadena ligera codificada por una secuencia que comprende la SEQ ID n.° 428.

14. Composición farmacéutica, que comprende el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 13.