Péptido de epítopo RAB6KIFL/KIF20A y vacunas que contienen el mismo.

Un oligopéptido aislado de menos de 15 aminoácidos, en donde el oligopéptido se selecciona a partir del grupo que consiste en:

(a) un oligopéptido que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en SEQ ID NOs: 3, 4 y 5; y

(b) un oligopéptido que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, en la que 1 o 2 aminoácidos están sustituidos, delecionados, insertados y/o añadidos, y en donde el oligopéptido tiene capacidad de inducir linfocitos T citotóxicos (CTL).

Péptido de epítopo RAB6KIFL/KIF2A y vacunas que contienen el mismo Campo técnico

La presente invención se refiere al campo de las ciencias biológicas, más específicamente al campo de la terapia contra el cáncer. En particular, la presente invención se refiere a nuevos oligopéptidos y al uso de los mismos.

Técnica anterior

Se ha demostrado que los CTLs positivos para CD8 reconocen péptidos de epítopo obtenidos a partir de los antíge- nos asociados a tumores (AATs) que se encuentran en una molécula de la clase I del complejo mayor de histocom- patlbllldad (MHC), y a continuación destruyen las células tumorales. Desde el descubrimiento de la familia de antí- genos de melanoma (MAGE) como primer ejemplo de AATs, se han descubierto muchos otros AATs, principalmente a través de metodologías inmunológicas (NPL 1: Boon T, Int J Cáncer 8 de Mayo 1993, 54(2): 177-8; NPL 2: Boon T & van der Bruggen P, J Exp Med 1 de Mar 1996, 183(3): 725-9). Algunos de los AATs están experimentando actualmente un desarrollo clínico como dianas inmunoterapéuticas.

La identificación de nuevos AATs, capaces de inducir respuestas inmunes antitumorales potentes y específicas, garantiza un desarrollo y una aplicación clínica adicionales a las estrategias de vacunación con péptidos para varios tipos de cáncer (NPL 3: Harris CC, J Nati Cáncer Inst 16 de Oct 1996, 88(2): 1442-55; NPL 4: Butterfield LH et al., Cáncer Res 1 de Jul 1999, 59(13): 3134^12; NPL 5: Vissers JL et al., Cáncer Res 1 de Nov 1999, 59(21): 5554-9; NPL 6: van der Burg SH et al., J Immunol 1 de Mayo 1996 1, 156(9): 338-14; NPL 7: Tanaka F et al., Cáncer Res 15 de Oct 1997, 57(2): 4465-8; NPL 8: FujieTetal., Int J Cáncer 18 de Ene 1999, 8(2): 169-72; NPL 9: Kikuchi M et al., Int J Cáncer 5 de Mayo 1999 5, 81(3): 459-66; NPL 1: Oiso M et al., Int J Cáncer 5 de Mayo 1999, 81(3): 387- 94). Hasta la fecha, ha habido varios informes de ensayos clínicos que emplean estos péptidos obtenidos a partir de antígenos asociados a tumores. Por desgracia, hasta el momento, solo se ha observado una tasa de respuesta objetiva baja en estos ensayos de vacunas contra el cáncer (NPL 11: Belli F et al., J Clin Oncol 15 de Oct 22, 2(2): 4169-8; NPL 12: Coulie PG et al., Immunol Rev Oct de 22, 188: 33-42; NPL 13: Rosenberg SA et al., Nat Med Sep 24, 1(9): 99-15).

Recientemente, se ha podido predecir la secuencia de los péptidos que se unen a la clase I del HLA, utilizando algoritmos (NPL 14: Journal of Immunological Methods, (1995), vol. 185, págs. 181-19, NPL 15: J. Immunol., (1994), vol. 152, págs. 163-175, NPL 16: protein Science, (2), vol. 9, págs. 1838-1846). Sin embargo, resulta difícil afirmar que el péptido del epítopo previsto se puede procesar de forma natural en las células diana y expresar en la superficie de la célula diana con la molécula de HLA. Por otra parte, el algoritmo, por ejemplo BIMAS ( http://blmas.dcrt.nih.gov/cgl-bln/molblo/ken_parker_comboform ) (NPL 17: Parker KC, et al, (1994) J Immunol; 152(1): 163-75; NPL 18: Kuzushima K, et al, (21) Blood; 98(6): 1872-81)) puede sugerir el péptido que se une a la molécula de HLA, pero el péptido sugerido no es tan riguroso (NPL 19: Bachinsky MM, et. al., Cáncer Immun. Mar 25 22;5:6). Por tanto, la detección de AATs sigue siendo un desafío que tiene muchas dificultades.

El cáncer de páncreas tiene un pronóstico desfavorable, con una tasa global de supervivencia a los 5 años de aproximadamente el 5% (1). Una resección quirúrgica sigue siendo la única opción para conseguir una supervivencia a largo plazo, pero los pacientes con cáncer de páncreas que se pueda extirpar son una minoría (9-22%) (NPL 2: Sener S F, et al. J Am Coll Surg 1999; 189:1-7, NPL 21: Eloubeidi M A, et al. Am J Surg 26; 192:322-9, NPL 22: Goonetilleke K S, et al. Int J Surg 27; 5:147-51). Sin embargo, incluso en estos pacientes, la tasa de supervivencia a los 5 años se mantiene aproximadamente en el 2%, a pesar de la cirugía con fines curativos (NPL 23: Smeenk H G, et al. Langenbecks Arch Surg 25; 39:94-13, NPL 24: Yeo C J, et al. Ann Surg 1995; 221:721-31). Hasta el 8% de los pacientes presentan una enfermedad avanzada localmente o metastásica, y su supervivencia media oscila entre 6 a 9 meses (NPL 25: Lockhart A C, et al. Gastroenterology 25; 128:1642-54). Por lo tanto, el desarrollo de nuevas modalidades terapéuticas es un tema de gran importancia, y la inmunoterapia puede ser un tratamiento potencial para el cáncer de páncreas.

RAB6KIFL (KIF2A) fue identificado por primera vez por tener un papel en la dinámica del aparato de Golgi a través de una interacción directa con la GTPasa pequeña Rab6 (NPL 26: Echard A, et al Science 1998; 279:58-5). RAB6KIFL pertenece a la superfamilia de las quinesinas que son proteínas motoras que tienen funciones decisivas en el tránsito de moléculas y orgánulos (NPL 26: Echard A, et al. Science 1998; 279:58-5, NPL 27: Hirokawa N, et al. CurrOpin Cell Biol 1998; 1:6-73, NPL 28: Alian VJ y SchroerTA. CurrOpin Cell Biol 1999; 11: 476-82). Recientemente, Taniuchi K et al. han reportado que RAB6KIFL se hiperexpresaba en tejidos cancerígenos del páncreas (NPL 29: Taniuchi K, et al Cáncer Res 25; 65:15-12). Encontraron evidencias de un papel decisivo de RAB6KIFL en la carcinogénesis pancreática.

A través del análisis del perfil de expresión génica, usando una micromatriz de ADNc de todo el genoma que contenía 23.4 genes, se ha mostrado recientemente que RAB6KIFL (KIF2A) está regulado al alza en varios tipos de cáncer, tales como el cáncer de vejiga (PTL 1: documento W26/85684), el cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP) (PTL 2: documento W27/13665) y el cáncer de próstata refractario a hormonas (CPRH) (PTL 3: documento W28/1296). Además, también se han identificado algunos péptidos de epítopos de productos

génicos de KIF2A (PTL 4: documento WO28/12557).

Lista de citas - Bibliografía de Patentes

[PTL 1] WO26/85684

[PTL 2] WO27/13665

[PTL 3] WO28/1296

[PTL 4] WO28/12557

Bibliografía que no es de Patentes

[NPL 1] Boon T, Int J Cancer 8 de May 1993, 54(2): 177-8

[NPL 2] Boon T & van der Bruggen P, J Exp Med 1 de Mar 1996, 183(3): 725-9

[NPL 3] Harris CC, J Natl Cancer Inst 16 de Oct 1996, 88(2): 1442-55

[NPL 4] Butterfield LH et al., Cancer Res 1 de Jul 1999, 59(13): 3134-42

[NPL 5] Vissers JL et al., Cancer Res 1 de Nov 1999, 59(21): 5554-9

[NPL 6] van der Burg SH et al., J Immunol 1 de Mayo 1996, 156(9): 338-14

[NPL 7] Tanaka F et al., Cancer Res 15 de Oct 1997, 57(2): 4465-8

[NPL 8] Fujie T et al., Int J Cancer 18 de Ene 1999, 8(2): 169-72

[NPL 9] Kikuchi M et al., Int J Cancer 5 de May 1999, 81(3): 459-66

[NPL 1] Oiso M et al., Int J Cancer 5 de May 1999, 81(3): 387-94

[NPL 11] Belli F et al., J Clin Oncol 15 de Oct 22, 2(2): 4169-8

[NPL 12] Coulie PG et al., Immunol Rev Oct 22, 188: 33-42

[NPL 13] Rosenberg SA et al., Nat Med Sep 24, 1(9): 99-15

[NPL 14] Journal of Immunological Methods, (1995), vol. 185, págs.181-19

[NPL 15] J. Immunol., (1994), vol.152, págs. 163-175

[NPL 16] protein science, (2), vol.9, págs. 1838-1846

[NPL 17] Parker KC, et al., (1994) J Immunol; 152(1):163-75.

[NPL 18] Kuzushima K, et al., (21) Blood; 98(6):1872-81.

[NPL 19] Bachinsky MM. et. al., Cancer Immun. Mar 25 22; 5:6.

[NPL 2] Sener S F, et al. J Am Coll Surg 1999; 189:1-7.

[NPL 21] Eloubeidi M A, et al. Am J Surg 26; 192:322-9.

[NPL 22] Goonetilleke K S, et al. Int J Surg 27; 5:147-51.

[NPL 23] Smeenk H G, et al. Langenbecks Arch Surg 25; 39:94-13.

[NPL 24] Yeo C J, et al. Ann Surg 1995; 221:721-31.

[NPL 25] Lockhart A C, et al. Gastroenterology 25; 128:1642-54.

[NPL 26] Echard A, et al. Science 1998; 279:58-5.

[NPL 27] Hirokawa N, et al. Curr Opin Cell Biol 1998; 1:6-73.

[NPL 28] Allan VJ, y Schroer TA. Curr Opin Cell Biol 1999; 11:476-82.

[NPL 29] Taniuchi K, et al. Cancer Res 25; 65:15-12.

Compendio de la invención

La presente invención se basa en parte en el descubrimiento de nuevas dianas para la inmunoterapia. Debido a que los AATs tienen frecuentemente una falta de inmunogenicidad, el descubrimiento de dianas adecuadas es de extrema importancia. En particular, la invención se dirige a RAB6KIFL (SEQ ID NO: 2) codificado por el gen de GenBank con n° de orden AF153329 o CR598555, también indicado como NM_5733 (SEQ ID NO: 1)), ya que RAB6KIFL ha sido identificado por estar hiperregulado en varios tipos de cáncer, tales como cáncer de vejiga, cáncer de mama, carcinoma colangiocelular, cáncer de esófago, cáncer de pulmón no microcítico (CPNM), cáncer de páncreas, cáncer de próstata,... [Seguir leyendo]

1. Un oligopéptido aislado de menos de 15 aminoácidos, en donde el oligopéptido se selecciona a partir del grupo que consiste en:

(a) un oligopéptido que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en SEQ ID NOs: 3, 4 y 5; y

(b) un oligopéptido que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, en la que 1 o 2 aminoácidos están sustituidos, delecionados, Insertados y/o añadidos, y en donde el oligopéptido tiene capacidad de inducir linfocitos T citotóxicos (CTL).

2. El oligopéptido según la reivindicación 1, en donde el oligopéptido tiene al menos una sustitución seleccionada entre el grupo que consiste en:

(a) el segundo aminoácido desde el extremo N-terminal es leucina o metionina, y

(b) el aminoácido C-terminal es valina o leucina.

3. El oligopéptido según la reivindicación 1, que consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada a partir del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 3, 4 y 5.

4. Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento y/o la profilaxis del cáncer, y/o la prevención de la recurrencia postoperatoria del mismo, en donde la composición comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y uno o varios oligopéptidos según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o un polinucleótido que codifica el oligopéptido.

5. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 4, que se formula para la administración a un sujeto cuyo antígeno del HLA es HLA-A2.

6. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 4, en donde el cáncer se selecciona a partir del grupo que consiste en cáncer de vejiga, cáncer de mama, carcinoma colangiocelular, cáncer de esófago, cáncer de pulmón no microcítico (CPNM), cáncer de páncreas, cáncer de próstata, carcinoma renal y cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP).

7. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 4, que es una vacuna.

8. Un exosoma que presenta en su superficie un complejo que comprende el oligopéptido según una cualquie

ra de las reivindicaciones 1 a 3, y un antígeno del HLA.

9. El exosoma según la reivindicación 8, en el que el antígeno del HLA es HLA-A2.

1. El oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para uso en un método para inducir una

célula presentadora de antígeno.

11. Un método in vitro para inducir una célula presentadora de antígeno, en donde el método comprende una etapa seleccionada a partir del grupo que consiste en:

(a) poner en contacto una célula presentadora de antígeno con el oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, e

(b) introducir un polinucleótido que codifica el oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en una célula presentadora de antígeno.

12. El oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para uso en un método para inducir un CTL.

13. Un método in vitro para inducir un CTL, en donde el método comprende una etapa seleccionada a partir del grupo que consiste en:

(a) poner en contacto un linfocito T positivo para CD8 con una célula presentadora de antígeno y/o un exosoma que presenta el oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en su superficie, e

(b) introducir en un linfocito T positivo para CD8 un polinucleótido que codifica un polipéptido que es capaz de formar una subunidad del receptor de linfocitos T (TCR) que se une a un complejo del oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y un antígeno del HLA en la superficie de una célula presentadora de antígeno.

14. Un CTL aislado, que se dirige al oligopéptido según la reivindicación 1 o 2.

15. El CTL según la reivindicación 14, que es capaz de unirse a un complejo del oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y un antígeno del HLA en la superficie de una célula presentadora de antígeno.

16. El CTL aislado, que se induce mediante el uso del oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

17. El CTL según la reivindicación 16, que es inducido por el método según la reivindicación 13.

18. Una célula presentadora de antígeno aislada que presenta en su superficie un complejo de un antígeno del

HLA y el oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

19. La célula presentadora de antígeno según la reivindicación 18, que es inducida empleando el oligopéptido según la reivindicación 1 o por el método según la reivindicación 11.

2. Una vacuna para uso en un método para inducir una respuesta inmune contra el cáncer en un sujeto, en

donde la vacuna al menos un ingrediente activo seleccionado a partir del grupo que consiste en:

(a) uno o varios oligopéptidos según una cualquiera las reivindicaciones 1 a 3;

(b) uno o varios polinucleótidos que codifican el oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a

3;

(c) uno o varios CTLs aislados según una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 17;

(d) una o varias células presentadoras de antígeno aisladas según la reivindicación 18 o 19.

21. Una composición farmacéutica para uso en la inducción de un CTL, en donde la composición comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y uno o varios oligopéptidos según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, un polinucleótido que codifica el oligopéptido o una célula presentadora de antígeno aislada según la reivindicación 18 o 19.

22. Uso de un ingrediente activo seleccionado a partir del grupo que consiste en:

(a) uno o varios oligopéptidos según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3;

(b) uno o varios polinucleótidos que codifican el oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en una forma expresable;

(c) una o varias células presentadoras de antígeno que presentan el oligopéptido según una cualquiera de las

reivindicaciones 1 a 3; y

(d) uno o varios CTLs que son capaces de unirse a un complejo del oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y un antígeno del HLA en la superficie de una célula presentadora de antígeno,

en la preparación de una composición farmacéutica o un agente farmacéutico para el tratamiento del cáncer.

23. Un polinucleótido que codifica el oligopéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.