Péptido CDCA1 y agente farmacéutico que lo comprende.

Un péptido aislado de menos de 15 aminoácidos seleccionado del grupo que consiste en:

(A) un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 2;

(B) un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 2, en la que uno o dos aminoácidos están sustituidos, suprimidos, insertados, y/o añadidos, y en el que el péptido muestra actividad inductora de linfocitos T citotóxicos (asesinos); y

(C) un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 2.

Péptido CDCA1 y agente farmacéutico que lo comprende Campo técnico

La presente invención se refiere a nuevos péptidos que son eficaces como vacunas frente a cánceres que expresan altamente el péptido asociado al ciclo de división celular 1 (CDCA1), tales como cáncer de pulmón y carcinoma colangiocelular, y a fármacos que incluyen estos péptidos para el tratamiento y prevención de tumores.

Técnica antecedente

En años recientes, el número de pacientes con cáncer de pulmón continúa aumentando alrededor del mundo, y aproximadamente un millón de personas mueren actualmente de cáncer de pulmón a nivel mundial cada año. También en Japón, las muertes por cáncer de pulmón están aumentando, y se estima que alcanzarán 123. en 215. El cáncer de pulmón es más prevalente entre hombres, y la relación hombre-mujer es tres a uno. El cáncer de pulmón sobrepasó al cáncer de estómago en 1993 como la causa principal de muerte por cáncer entre los hombres. Además, con un número cada vez mayor de fumadoras, se espera que el número de pacientes femeninos aumente. El cáncer de pulmón ha sido la causa principal de muerte por cáncer desde 2, y al envejecer la sociedad, se espera que el número de pacientes aumente todavía más en el futuro. Se considera que el tabaquismo es la causa más importante de desarrollo de cáncer de pulmón, y otras causas son la inhalación de asbesto, contaminación del aire, etc. La detección temprana y el tratamiento rápido son importantes para la terapia de cáncer de pulmón. Sin embargo, se ha señalado recientemente que una simple radiografía de tórax y un ensayo de esputo realizados durante un examen médico no son eficaces para la detección temprana de cáncer de pulmón, y no conducen a la reducción de muertes por cáncer. Puesto que se espera que el número de muertes por cáncer de pulmón continúe aumentando en el futuro, es una tarea urgente desarrollar nuevas estrategias terapéuticas.

En Japón, el número de muertes por cáncer de las vías biliares está en aumento, y en 25, 16.586 personas murieron de cáncer de las vías biliares. En la mayoría de los casos de cáncer de vías biliares, no se encontraron síntomas subjetivos en las etapas tempranas. En comparación con cánceres que se forman en la luz del tubo digestivo, tales como cáncer de estómago y cáncer de colon, el cáncer de vías biliares es difícil de encontrar y diagnosticar en etapas tempranas. Por lo tanto, en muchos casos, el cáncer ya ha progresado y no se puede eliminar cuando se encuentra. Además de la terapia quirúrgica, para el cáncer de vías biliares se llevan a cabo la terapia de radiación y la quimioterapia, pero no son terapéuticamente eficaces, y es necesario establecer un nuevo método terapéutico.

Por otro lado, el desarrollo reciente en biología molecular e inmunología tumoral ha esclarecido que los linfocitos T citotóxicos (asesinos) y los linfocitos T colaboradores reconocen péptidos generados por la degradación de proteínas que se expresan específica y altamente en células cancerosas, y que se presentan sobre la superficie de células cancerosas o células presentadoras de antígenos vía moléculas de HLA y provocan inmunorreacción para destruir células cancerosas. Además, se han identificado muchas proteínas de antígenos tumorales y péptidos derivados de ellas, que estimulan tal inmunorreacción para atacar el cáncer, y está siendo aplicada clínicamente la inmunoterapia tumoral específica del antígeno.

La molécula de HLA clase I se expresa sobre la superficie de todas las células nucleadas del cuerpo. Se une a un péptido generado por la degradación intracelular de proteínas producidas en el citoplasma o núcleo, y expresa el péptido sobre la superficie celular. Sobre la superficie de una célula normal, los péptidos derivados de proteínas autólogas normales se unen a moléculas de HLA clase I, y no son reconocidas ni destruidas por linfocitos T del sistema inmunitario. Por otro lado, en el proceso de convertirse en un cáncer, las células cancerosas expresan algunas veces una gran cantidad de proteínas que apenas se expresan, o se expresan muy poco, en células normales. Cuando las moléculas de HLA clase I se unen a péptidos generados por la degradación intracelular de proteínas expresadas específica y altamente en células cancerosas, y después expresan los péptidos sobre la superficie de células cancerosas, los linfocitos T citotóxicos (asesinos) reconocen y destruyen solamente las células cancerosas. Administrando tales antígenos o péptidos específicos del cáncer a un individuo, se pueden destruir las células cancerosas y se puede suprimir el crecimiento del cáncer sin dañar a las células normales. Esto se denomina inmunoterapia del cáncer, que usa antígenos específicos del cáncer. Las moléculas de HLA clase II se expresan principalmente sobre la superficie de células presentadoras de antígeno. Las moléculas se unen a péptidos derivados de antígenos específicos del cáncer, que se generan por la degradación intracelular de antígenos específicos del cáncer incorporados en células presentadoras de antígeno desde el exterior de las células, y entonces expresa los péptidos sobre la superficie de las células. Los linfocitos T cooperadores que los reconocen se activan e inducen o potencian inmunorreacción frente a tumores al producir diversas citocinas que activan otras células inmunocompetentes.

En consecuencia, si se desarrolla una inmunoterapia dirigida a antígenos expresados específica y altamente en cánceres, tal terapia puede eliminar de forma eficaz los cánceres solo sin provocar ningún suceso dañino sobre órganos autólogos normales. También se espera que la terapia se pueda usar para cualesquiera pacientes con cáncer terminal a los que no se pueden aplicar otros tratamientos. Además, administrando con antelación un

antfgeno y péptido específico del cáncer como vacuna a individuos con un riesgo elevado de desarrollar cánceres, se puede prevenir el desarrollo del cáncer.

Aunque existen diversos métodos terapéuticos para el cáncer de pulmón, el cáncer de pulmón da como resultado un mal diagnóstico en comparación con otros cánceres, y es uno de los cánceres intratables. La razón es, por ejemplo, la progresión rápida, y en muchos casos, se encuentra que el cáncer ha avanzado con el tiempo. Además, puesto que la cirugía es muy invasiva, los pacientes a los que es aplicable la cirugía son limitados, y es difícil la cura total mediante terapia de radiación o quimioterapia. Si se desarrolla una inmunoterapia dirigida a antígenos que se expresan específica y altamente en cáncer de pulmón, el cáncer solo se puede eliminar eficazmente mediante tal método de terapia sin ningún daño en los órganos autólogos normales. Además, se espera que tal método terapéutico sea aplicable a cualquier paciente con cáncer terminal, y a pacientes a los que no son aplicables otros tratamientos debido a una función pulmonar extremadamente pobre. Además, puesto que el riesgo de desarrollar cáncer de pulmón es elevado entre fumadores, la inmunoterapia puede ser aplicable para la prevención de cáncer de pulmón en un grupo de alto riesgo de cáncer de pulmón.

Mediante análisis de expresión génica a lo largo de todo el genoma usando micromatrices de ADNc, se ha examinado el perfil de expresión de 27.648 genes humanos en 37 casos clínicos de cáncer de pulmón no microcítico y en órganos embriónicos, y diversos órganos adultos normales. Como resultado, se ha encontrado que el péptido CDCA1 (asociado al ciclo de división celular 1, también conocido como homólogos humanos de Nuf2 (hNuf2)) (n° de acceso de GenBank NM_145697) estaba altamente expresado en muchos casos de cáncer de pulmón, mientras que apenas se expresaba en el hígado embriónico u órganos adultos normales excepto en el testículo aislado del sistema inmunitario. Además, CDCA1 estaba altamente expresado en todos los casos de carcinoma colangiocelular, cáncer de vejiga, y carcinoma de células renales. También se observó expresión elevada de CDCA1 en los tejidos cancerosos de 4% o más casos de cáncer de próstata, leucemia mielogenosa crónica, linfoma maligno, cáncer de cuello uterino, osteosarcoma, cáncer de mama, sarcoma de tejidos blandos, y cáncer de colon. Este hecho sugiere que CDCA1 podría servir como un antfgeno específico del cáncer en muchos carcinomas.

HLA-A2 se observa frecuentemente en poblaciones humanas independientemente de la raza, y se encuentra en alrededor de 3% de los japoneses. Por lo tanto, si se pudiese identificar un péptido antigénico del cáncer que se presenta a linfocitos T citotóxicos (asesinos) por HLA-A2, se podría aplicar ampliamente no solo a los japoneses... [Seguir leyendo]

1. Un péptido aislado de menos de 15 aminoácidos seleccionado del grupo que consiste en:

(A) un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 2;

(B) un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 2, en la que uno o dos aminoácidos están sustituidos, suprimidos, insertados, y/o añadidos, y en el que el péptido muestra actividad inductora de linfocitos T citotóxicos (asesinos); y

(C) un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 2.

2. El péptido de la reivindicación 1, en el que el péptido se selecciona del grupo que consiste en:

(A) un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 2; y

(B) un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 2, en la que uno o dos aminoácidos están sustituidos, suprimidos, insertados, y/o añadidos, y en el que el péptido muestra actividad inductora de linfocitos T citotóxicos (asesinos).

3. El péptido de la reivindicación 1 ó 2, en el que el segundo aminoácido del término N es leucina o metionina.

4. El péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el aminoácido C-terminal es valina o leucina.

5. Una vacuna para uso en la inducción de inmunidad frente a cáncer que expresa CDCA1, que comprende uno o más péptidos de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 como ingrediente activo.

6. Una vacuna para uso en el tratamiento y/o prevención de cáncer que expresa CDCA1, que comprende uno o más péptidos de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 como ingrediente activo.

7. Una vacuna para uso en la inducción de una célula presentadora de antigeno que muestra actividad inductora de linfocitos T citotóxicos (asesinos), en el que dicha vacuna comprende uno o más péptidos de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 como ingrediente activo.

8. Una vacuna para uso en la inducción de una célula presentadora de antígeno que muestra actividad inductora de linfocitos T citotóxicos (asesinos), en el que dicha vacuna comprende uno o más polinucleótidos que codifican los péptidos de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 como ingrediente activo.

9. Una vacuna para uso en la inducción de un linfocito T citotóxico (asesino), en el que dicha vacuna comprende uno o más péptidos de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 como ingrediente activo.

1. Un anticuerpo contra el péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

11. Un linfocito T cooperador, un linfocito T citotóxico (asesino), o una población inmunocítica que los comprende, que es inducido usando el péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

12. Una célula que presenta antígeno que presenta un complejo que comprende el péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un antígeno HLA

13. La célula que presenta antígeno de la reivindicación 12, que es inducida por la vacuna de la reivindicación 7 u 8.

14. Un exosoma que presenta un complejo que comprende el péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un antígeno HLA.

15. El exosoma de la reivindicación 14, en el que el antígeno HLA es HLA-A2 (HLA-A*21).

16. Un método in vitro para inducir una célula presentadora de antígeno que muestra actividad inductora de linfocitos T citotóxicos (asesinos), que comprenden la etapa de poner en contacto una célula presentadora de antígeno con el péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

17. Un método in vitro para inducir una célula presentadora de antígeno que muestra actividad inductora de linfocitos T citotóxicos (asesinos), que comprende la etapa de introducir un polinucleótido que codifica el péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en una célula presentadora de antígeno.

18. Un método in vitro para inducir un linfocito T citotóxico (asesino), que comprende la etapa de cocultivar una célula presentadora de antígeno puesta en contacto con el péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un linfocito T CD8+.

19. Uso del péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para la fabricación de un agente para inducir inmunidad frente a cáncer que expresa CDCA1.

2. Uso del péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para la fabricación de un agente para tratar y/o prevenir cáncer que expresa CDCA1.

21. El péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para uso en la inducción de inmunidad frente a cáncer

que expresa CDCA1.

22. El péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para uso en el tratamiento y/o prevención de cáncer

que expresa CDCA1.

23. La vacuna de la reivindicación 5 ó 6, o el uso de la reivindicación 19 ó 2, o el péptido de la reivindicación 21 ó

22. en el que dicho cáncer que expresa CDCA1 se selecciona del grupo que consiste en cáncer de pulmón, carcinoma colangiocelular, cáncer de vejiga, carcinoma de células renales, cáncer de próstata, leucemia

mielogenosa crónica, linfoma maligno, cáncer de cuello uterino, osteosarcoma, cáncer de mama, sarcoma de tejidos blandos, y cáncer de colon.