Nueva inmunoterapia contra diversos tumores como el cáncer gastrointestinal y gástrico.

Péptido con una longitud total de entre 10 y 14 aminoácidos que comprende una secuencia seleccionada del grupo siguiente:

a) una secuencia consistente en la SEQ ID N. º 1

b) una variante de la SEQ ID N. º1 que induce que linfocitos T reaccionen con dicho péptido, siendo dicha variante seleccionada entre el grupo de las secuencias LFQILQGIVF, LYQILQGIVL, LYQILQGIVI, LFQILQGIVL y LFQILQGIVI.

Nueva ¡nmunoterapia contra diversos tumores como el cáncer gastrointestinal y gástrico

La presente invención se refiere a péptidos, ácidos nucleicos y células destinados a la utilización en métodos ¡nmunoterapéuticos. En particular, la presente Invención se refiere a la ¡nmunoterapia contra el cáncer. La presente invención se refiere asimismo a epítopos peptídlcos asociados a tumores reconocidos por linfocltos T CD8+, solos o en combinación con otros péptidos asociados a tumores que pueden servir como principios activos farmacéuticos en composiciones vacunales destinadas a estimular respuestas inmunitarias antltumorales. La presente invención se refiere a secuencias peptídicas derivadas de moléculas HLA de clase I de células tumorales humanas que pueden ser utilizadas en composiciones vacunales para desencadenar respuestas Inmunitarias antitumorales, en particular respuestas de ünfocitos T c¡totóx¡cos (CTL).

Antecedentes de la invención

El cáncer gástrico es una enfermedad que se caracteriza por la aparición de células tumorales malignas en la mucosa que recubre el estómago. El cáncer de estómago o gástrico puede aparecer en cualquier parte del estómago y extenderse por todo él y a otros órganos, sobre todo al esófago, a los pulmones y al hígado. El cáncer de estómago es el cuarto cáncer más frecuente en el mundo con 930. 000 casos diagnosticados en 2002. Es una enfermedad con una elevada tasa de mortalidad (-800. 000 al año) que la convierte en la segunda causa de muerte por cáncer en el mundo, solo superada por el cáncer de pulmón. Afecta con más frecuencia a los varones y sobre todo a los habitantes de los países asiáticos y de países en vías de desarrollo. ( http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs297/en/ .)

En Estados Unidos representa aproximadamente el 2% (25. 500 casos) de los casos nuevos de cáncer cada año, pero es más frecuente en otros países. En Corea es el cáncer más Importante, con el 20,8% de las neoplasias malignas. En Japón el cáncer gástrico sigue siendo el cáncer más común en la población masculina. Cada año en Estados Unidos se diagnostica cáncer de estómago a unos 13. 000 hombres y 8. 000 mujeres. La mayoría tienen

más de 70 años.

El cáncer de estómago es el cuarto tipo de cáncer más frecuente en el mundo, por detrás del cáncer de pulmón, mama, colon y recto. Además, sigue siendo la segunda causa más frecuente de muerte por cáncer. La Amencan Cancer Soc/efy calcula que en 2007 se produjeron un millón de casos nuevos, cerca del 70% en países en vías de desarrollo, y unos 800.000 fallecimientos

( http://www.cancer.org/downloads/STT/Global_Facts_and_Flgures_2007_rev2 . pdf.)

La incidencia de la enfermedad presenta una enorme variación geográfica en el globo. La Incidencia es máxima en Asia y en regiones de Sudamérica, y mínima en Norteamérica. La mortalidad más elevada se registra en Chile, Japón, Sudamérica y la antigua Unión Soviética.

El cáncer gástrico se diagnostica a menudo en un estadio avanzado debido a la Inexistencia de campañas de cribado en la mayor parte del mundo, excepto en Japón (y, de forma limitada, en Corea) donde la detección precoz es un hecho frecuente. Así pues, supone un desafío importante para los profesionales sanitarios. Los factores de riesgo del cáncer gástrico son la infección por He/zcobacferpy/on (H. py/on), el tabaquismo, la abundante ingesta de sal y otros factores alimenticios. Una pequeña parte de los casos de cáncer gástrico (1% a 3%) está vinculada a síndromes de predisposición genética. Las mutaciones de la cadherlna E están presentes en cerca del 25% de las familias con predisposición a la dominancia autosómlca del cáncer gástrico de tipo difuso. Este subgrupo de tumores gástricos ha sido denominado cáncer gástrico difuso hereditario. Puede ser útil ofrecer consejo genético y considerar la gastrectomia profiláctica en portadores jóvenes asintomáticos de mutaciones truncadoras en la línea germinal.

La pared del estómago está compuesta por tres capas de tejido: la mucosa (Interna), la capa muscular (media) y la capa serosa (externa). El cáncer gástrico comienza en las células que recubren la mucosa y se extiende hasta las capas externas a medida que crece. Cuatro son los tipos de tratamiento estándar. El tratamiento del cáncer gástrico puede consistir en cirugía, quimioterapia, radioterapia y qulmlorradloterapla. La cirugía es el tratamiento primario contra el cáncer gástrico. El objetivo es lograr la resección completa con márgenes negativos (resección R0). Sin embargo, cerca del 50% de los pacientes con cáncer gástrico locorreglonal no son aptos para la resección R0. R1 indica cáncer residual microscópico (márgenes positivos); y R2 cáncer residual macroscópico pero sin metástasis. El desenlace del paciente depende del estadio del cáncer en el momento del diagnóstico (NCCN Clinical Practice Guidelines ¡n Oncology^).

La supervivencia a 5 años tras la resección con finalidad curativa se sitúa entre el 30% y el 50% en los pacientes con estadio II y entre el 10% y el 25% en los pacientes con estadio III. Estos pacientes tienen un alto riesgo de recidiva local y sistèmica. La metástasis aparece en el 80-90% de los Individuos con cáncer de estómago, con una tasa de supervivencia a seis meses del 65% en los diagnosticados en estadios iniciales y de menos del 15% en los diagnosticados en estadios avanzados.

En definitiva, sigue existiendo la necesidad de nuevas opciones terapéuticas eficaces y seguras que mejoren el bienestar prescindiendo del uso de antineoplásicos y otros agentes que pueden causar efectos secundarlos graves

para los pacientes con cáncer gástrico, el carcinoma prostético, carcinomas de la cavidad bucal, carcinoma escamoso oral (OSCC), leucemia mlelolde aguda (LMA), llnfoma MALI Inducido por H. py/on, carcinoma de colon/cáncer colorrectal, glioblastoma, cáncer de pulmón amlcrocítlco (NSCLC), carcinoma de cuello uterino, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de colon, cánceres de páncreas, adenocarclnoma ductal pancreático, cáncer de ovario, carcinoma hepatocelular, cáncer de hígado, tumores cerebrales de diverso fenotipo, leucemias como la leucemia llnfoblástlca aguda (LLA), cáncer de pulmón, sarcoma de Ewlng, cáncer de endometrio, carcinoma epidermoide de cabeza y cuello, cáncer epitelial de la laringe, carcinoma esofágico, carcinoma oral, carcinoma de la vejiga urinaria, carcinomas ovárlcos, carcinoma de células renales, menlngloma atíplco, carcinoma papilar de tiroides, tumores cerebrales, carcinoma de los conductos salivales, cáncer de cuello de útero, llnfomas de linfocitos T/NK extragangllonares, llnfoma no hodgklnlano y tumores sólidos malignos del pulmón y la mama, y otros tumores.

WO 02/36614 da a conocer una secuencia de 25 aminoácidos que fue utilizada únicamente a efectos comparativos. La presente invención incorpora péptidos que estimulan el sistema ¡nmunltarlo del paciente y actúan como agentes antltumorales no Invasivos.

Resumen de ¡a invención

La estimulación de una respuesta inmunitaria depende de la presencia de antígenos que sean reconocidos como extraños por el sistema ¡nmunltarlo del hospedador. El descubrimiento de la existencia de antígenos asociados a tumores ha suscitado la posibilidad de utilizar el sistema ¡nmunltarlo del hospedador para Intervenir sobre el crecimiento de los tumores. Actualmente se están explorando diversos mecanismos para aprovechar las defensas humorales y celulares del sistema ¡nmunltarlo en la ¡nmunoterapla contra el cáncer.

Ciertos elementos de la respuesta Inmunitaria celular son capaces de reconocer específicamente y destruir las células tumorales. El aislamiento de linfocitos T cltotóxlcos (CTL) entre las células Infiltradas en los tumores o en la sangre periférica hace pensar en que tales células desempeñan un papel Importante en las defensas inmunitarias naturales contra el cáncer. Los linfocitos T CD8-posltlvos (TCD8*) en particular, que reconocen las moléculas de clase I del complejo mayor de hlstocompatlbllldad (MHC) portadoras de péptidos que suelen tener de 8 a 10 residuos de aminoácidos derivados de proteínas o de productos rlbosómlcos defectuosos (DRIP) localizados en el citosol, desempeñan un Importante papel en dicha respuesta. Las moléculas MHC del ser humano también se denominan antígenos leucocitarios humanos (HLA).

Existen dos clases de moléculas MHC: moléculas del MHC de clase I, que se encuentran en la mayoría de células nucleadas. Las moléculas MHC están compuestas por una cadena pesada alfa y beta-2-microglobulina (receptores MHC de clase I) o por una cadena alfa y una cadena beta (receptores MHC de clase... [Seguir leyendo]

1. Péptido con una longitud total de entre 10 y 14 aminoácidos que comprende una secuencia seleccionada del grupo siguiente:

a) una secuencia consistente en la SEQ ID N. ° 1

b) una variante de la SEQ ID N. °1 que Induce que llnfocltos T reaccionen con dicho péptldo, siendo dicha variante seleccionada entre el grupo de las secuencias LFQILQGIVF, LYQILQGIVL, LYQILQGIVI, LFQILQGIVL y LFQILQGIVI.

2. El péptldo conforme a la reivindicación 1, dotado de la capacidad de unión a una molécula del complejo mayor de hlstocompatlbllldad humano (MHC) de clase I.

3. El péptldo conforme a la reivindicación 1 o 2, en la que el péptldo Incluye enlaces no peptídlcos.

4. El péptldo conforme con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en que dicho péptldo forma parte de una proteina de fusión, en concreto que comprende aminoácidos N-termlnales de la cadena Invariable (II) asociada al antígeno HLA-DR.

5. Ácido nucleico que codifica un péptldo conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, siempre que el péptldo no sea una proteina humana entera, y preferiblemente dicho ácido nucleico es ADN, ADNc, ÀPN, ARN o una combinación de los anteriores, o un vector de expresión que exprese dicho ácido nucleico.

6. Péptldo conforme con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o un ácido nucleico o un vector de expresión acorde con la reivindicación 5 para el uso en medicina.

7. Célula hospedadora, que comprende un ácido nucleico o un vector de expresión conforme a la reivindicación 5, que es una célula presentadora de antígeno.

8. Método para producir un péptldo conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, comprendiendo el método el cultivo de la célula hospedadora conforme con la reivindicación 7, y el aislamiento del péptldo a partir de la célula hospedadora o de su medio de cultivo.

9. Método /n v/fro para producir llnfocltos T cltotóxlcos (CTL) activados, comprendiendo el método la puesta en contacto en condiciones /n v/fro de CTL con moléculas MHC de clase I humanas cargadas con antigeno expresadas en la superficie de una célula presentadora de antígeno adecuada por tiempo suficiente para activar dichos CTL de una manera específica de antígeno, siendo dicho antígeno cualquier péptido acorde con la reivindicación 1 o 2.

10. El método conforme a la reivindicación 9, en que dicha célula presentadora de antígeno comprende un vector de expresión capaz de expresar dicho péptido acorde con la reivindicación 1 o 2.

11. Linfocito T citotóxico (CTL) activado, producido mediante el método conforme a la reivindicación 9 o 10, que reconoce selectivamente un péptido conforme a la reivindicación 1 o 2.

12. Linfocito T citotóxico (CTL) conforme a la reivindicación 11 para el uso en el tratamiento del cáncer consistente en la destrucción de las células diana de un paciente, en el que dichas células diana presentan de forma aberrante un péptido conforme a la reivindicación 1 o 2.

13. El péptido conforme a la reivindicación 1 o 2, el ácido nucleico o un vector de expresión conforme a la reivindicación 5, la célula conforme a la reivindicación 7, o el linfocito T citotóxico activado conforme a la reivindicación 12 para el uso en el tratamiento del cáncer, como el cáncer gástrico, gastrointestinal, colorrectal, pancreático, de pulmón o renal.

14. El péptido, el ácido nucleico o un vector de expresión, la célula, o el linfocito T citotóxico activado para el uso conforme a la reivindicación 13, en que dicho medicamento es una vacuna.

15. Uso no terapéutico del péptido conforme a la reivindicación 1 o 2, para la generación y el desarrollo de anticuerpos que sean específicos contra un complejo de MHC/péptido que comprende dicho péptido.