Métodos para tratar estados asociados con la acumulación excesiva de matriz celular.

Combinación de agentes que inhibe el TGF•para su uso en el tratamiento de un estado fibrótico asociado con una acumulación excesiva de matriz extracelular en tejidos u órganos,

estando prevista la combinación de agentes para reducir la acumulación excesiva de matriz extracelular asociada con la sobreproducción y/o la actividad del TGF• en un tejido y/u órgano, o en un lugar de lesión cutánea, utilizándose la combinación de agentes que inhiben el TGF• en una cantidad suficiente para inhibir la sobreproducción y/o la actividad del TGF•, resultando el uso de dicha combinación de agentes en una mayor reducción de la acumulación de matriz extracelular que cuando cada agente se utiliza por separado, reduciéndose la acumulación de matriz extracelular en un tejido y/u órgano o una lesión a partir del nivel existente en el momento de la administración de los agentes, consistiendo un agente de la combinación en un anticuerpo anti-TGF• y otro agente en EnalaprilTM, y seleccionándose dicho estado entre un grupo consistente en síndrome de dificultad respiratoria del adulto o aguda (ARDS), enfermedades fibróticas del hígado, fibrosis cardíaca postinfarto, enfermedades fibroquísticas tales como fibroesclerosis, cánceres fibróticos tales como cánceres de mama, útero, páncreas o colon, fibroides, fibroma, fibroadenomas, fibrosarcomas, estado de postinfarto de miocardio, hipertrofia ventricular izquierda, cirrosis hepática, enfermedad venooclusiva, estado después de una lesión de la médula espinal, estado después de cirugía retiniana y de glaucoma, postangioplastia, restenosis, fibrosis renal intersticial, fallo de injerto arteriovenoso, cicatrizaciones excesivas tales como cicatrices queloides, y cicatrices resultantes de lesiones, quemaduras o cirugía.

Métodos para tratar estados asociados con la acumulación excesiva de matriz celular

CAMPO DE LA INVENCIÓN

Esta invención se refiere a una combinación de agentes que inhiben el TGF en el tratamiento de un estado asociado con una acumulación excesiva de matriz extracelular en tejidos u órganos o en una herida. 5

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

En enfermedades tales como la fibrosis del riñón o pulmón existe una deposición y acumulación excesiva de matriz extracelular (ECM) . Aunque el factor transformante del crecimiento beta (TGF) de citoquina regula la deposición de matriz extracelular para la reparación de tejidos, una sobreproducción de TGF es claramente la base de la fibrosis tisular provocada por una deposición excesiva de matriz extracelular que provoca la 10 enfermedad (Border y Ruoslahti, J. Clin. Invest. 90:1-7 (1992) ) . La acción fibrinogénica del TGF resulta de la estimulación simultánea de la síntesis de proteínas de matriz (Border y col., Kidney Int 37:689-695 (1990) , la inhibición de la degradación y recambio de matriz y el incremento de las interacciones célula-matriz a través de la modulación de los receptores de la integrina que facilitan la formación de ECM. Ya se ha demostrado una sobreproducción de TGF en casos de glomerulonefritis (Okuda y col., J. Clin. Invest. 86:453-462 15 (1990) ) , nefropatía diabética y lesión glomerular en hipertensión, así como en afecciones fibróticas relacionadas de pulmón, hígado, corazón, pared arterial, piel, cerebro, articulaciones y médula ósea (Border y Noble, N. Eng. J. Med. 331:1286-1292 (1994) ) . Además del riñón, se ha demostrado que el bloqueo de la acción del TGF con un agente tal como un anticuerpo o el proteoglicano decorina es terapéutico en caso de fibrosis y cicatrización de piel, pulmón, sistema nervioso central y pared arterial (Border y Noble, Kidney Int. 20 51:1388-1396 (1997) ) .

También se ha demostrado una supresión de la producción de ECM y una prevención de la acumulación excesiva de matriz mesangial en glomérulos de ratas glomerulonefríticas mediante la administración intravenosa de anticuerpos neutralizantes específicos para el TGF (Border y col., Nature 346:371-374 (1990) ) o la administración de decorina purificada, un proteoglicano (Border y col., Nature 360:361-364 25 (1992) ) y mediante la introducción de decorina codificadora de ácido nucleico, un agente inhibidor del TGF, en un modelo de rata de glomerulonefritis mesangial aguda (Isaka y col., Nature Med. 2:418-423 (1996) ) . Además se ha demostrado que la inhibición de la actividad del TGF, utilizando por ejemplo anticuerpos anti-TGF, interrumpe la sobreproducción de TGF (Sharma y col., Diabetes 45:522-530 (1996) ) .

La cicatrización cutánea después de una lesión cutánea resulta de una acumulación excesiva de tejido 30 fibroso formado por colágeno, fibronectina y proteoglicanos en una herida. Dado que la matriz extracelular fibrosa carece de elasticidad, el tejido cicatrizado puede afectar a la función tisular esencial y provocar un aspecto estético no deseable. Se cree que el TGF induce la deposición de matriz fibrosa en la herida (Shah y col., Lancet 339:213-214 (1992) ) .

Una explicación de la sobreexpresión persistente del TGF en la enfermedad renal fibrótica progresiva es que 35 episodios reiterados o múltiples de lesión tisular, tal como ocurre en caso de enfermedades crónicas como hipertensión, diabetes o enfermedad por inmunocomplejos, conducen a una sobreproducción continua del TGF y matriz extracelular que resulta en una fibrosis tisular (véase Border y Noble, N. Eng. J. Med. 331:1286-1292 (1994) ) . Otra explicación posible de la sobreexpresión persistente del TGFes la presencia de una interconexión biológicamente compleja entre el TGF y el sistema de renina-Angiotensina (RAS) en el 40 riñón como parte de un sistema de emergencia que responde a la amenaza de lesión tisular tal como se describe adicionalmente aquí.

La renina es una aspartil proteinasa sintetizada por células yuxtaglomerulares del riñón y células mesangiales en humanos y ratas (Chansel y col., Am. J. Physiol. 252:F32-F38 (1987) y Dzau y Kreisberg, J. Cardiovasc. Pharmacol. 8 (Suppl 10) :S6-S10 (1986) ) . La renina tiene un papel clave en la regulación de la presión 45 sanguínea y el balance de la salinidad. Su fuente principal en humanos es el riñón, donde se produce inicialmente como preprorrenina. Después del procesamiento de péptidos señal y la glicosilación se produce una secreción de prorrenina y su forma enzimáticamente activa, renina madura. La enzima activa dispara una cascada proteolítica mediante escisión de angiotensinógeno para generar Angiotensina I, que se convierte a su vez en la hormona vasoactiva Angiotensina II mediante la enzima convertidora de Angiotensina ("ACE") . 50

La secuencia del gen de la renina humana es conocido (GenBank entrada M26901) . La renina humana recombinante se ha sintetizado y expresado en diversos sistemas de expresión (Sielecki y col., Science 243:1346-1351 (1988) , Mathews y col., Protein Expression and Purification 7:81-91 (1996) ) . También se conocen inhibidores del sitio enzimático de la renina (Rahuel y col., J. Struct. Biol. 107:227-236 (1991) ; Badasso y col., J. Mol. Biol. 223:447-453 (1992) ; y Dhanaraj y col., Nature 357:466-472 (1992) ) incluyendo un 55

inhibidor de la renina oralmente activo en primates, Ro 42-5892 (Fischli y col., Hypertension 18:22-31 (1991) ) . Además, se han identificado proteínas de unión a renina y a un receptor de renina de superficie celular en células mesangiales humanas (Campbell y Valentijn, J. Hypertens. 12:879-890 (1994) , Nguyen y col., Kidney Internat. 50:1897-1903 (1996) y Sealey y col., Amer. J. Hyper. 9:491-502 (1996) ) .

El sistema renina-angiotensina (RAS) es una red endocrina sistémica prototípica cuyas acciones en el riñón y 5 las glándulas suprarrenales regulan la presión sanguínea, el volumen intravascular y el equilibrio electrolítico. En cambio, el TGF se considera una citoquina prototípica, una molécula de señalización de péptidos cuyas múltiples acciones en las células están mediadas de forma local o paracrina. Sin embargo, datos recientes indican que existe un RAS intacto en muchos tejidos cuyas acciones son totalmente paracrinas y el TGF tiene efectos sistémicos (endocrinos) de amplia gama. Además, el RAS y el TGF actúan en diversos puntos 10 regulando mutuamente sus acciones.

En una respuesta sistémica a una lesión tal como una herida, el RAS genera rápidamente AII, que actúa por vasoconstricción para mantener la presión sanguínea y después estimula la secreción de aldosterona, lo que conduce a un aumento del volumen intravascular. En la herida, las plaquetas en degranulación liberan rápidamente TGF, que provoca una serie de efectos, incluyendo: 1) autoinducción de la producción de TGF 15 por células locales para amplificar los efectos biológicos; 2) quimioatracción de monocitos/macrófagos que desbridan y esterilizan la herida y fibroblastos que comienzan la síntesis de ECM; 3) provocación de una deposición de nueva ECM estimulando al mismo tiempo la síntesis de nueva ECM, inhibiendo las proteasas que degradan la matriz y modulando la cantidad de receptores de integrina para facilitar la adhesión celular a la matriz recién formada; 4) supresión de los efectos proinflamatorios de la interleuquina-1 y el factor de 20 necrosis tumoral; 5) regulación de la acción de factor de crecimiento derivado de plaquetas y factor de crecimiento fibroblástico, de modo que la proliferación celular y la angiogénesis se coordinan con deposición de matriz; y 6) finalización del proceso cuando la reparación está completa y la herida está cerrada (Border y Noble, Scientific Amer. Sci. & Med. 2:68-77 (1995) ) .

Las interacciones entre el RAS y el TGF se producen tanto a nivel sistémico como a nivel molecular. Se ha 25 comprobado que la acción del TGF para provocar la deposición de ECM en una herida en cicatrización es la misma acción que hace del TGF una potente citoquina fribrogénica (Border y Noble, New Engl. J. Med. 331:1286-1292 (1994) ; y Border y Ruoslahti, J. Clin. Invest. 90:107 (1992) ) . De hecho, el fallo en la conclusión de la producción de TGFes lo que distingue una reparación tisular normal de una enfermedad fibrótica. El RAS y el TGF corregulan mutuamente sus expresiones. Por consiguiente, los dos sistemas 30 pueden permanecer activos durante un largo tiempo después de haber finalizado una respuesta de emergencia, y esto puede conducir a una fibrosis progresiva. El riñón es particularmente susceptible a la sobreexpressión de TGF. La interrelación del RAS y el TGF puede explicar la susceptibilidad del riñón a la sobreexpresión de... [Seguir leyendo]

1. Combinación de agentes que inhibe el TGFpara su uso en el tratamiento de un estado fibrótico asociado con una acumulación excesiva de matriz extracelular en tejidos u órganos, estando prevista la combinación de agentes para reducir la acumulación excesiva de matriz extracelular asociada con la sobreproducción y/o la actividad del TGF en un tejido y/u órgano, o en un lugar de 5 lesión cutánea, utilizándose la combinación de agentes que inhiben el TGF en una cantidad suficiente para inhibir la sobreproducción y/o la actividad del TGF, resultando el uso de dicha combinación de agentes en una mayor reducción de la acumulación de matriz extracelular que cuando cada agente se utiliza por separado, reduciéndose la acumulación de matriz extracelular en un tejido y/u órgano o una lesión a partir del nivel existente en el momento de la administración de 10 los agentes, consistiendo un agente de la combinación en un anticuerpo anti-TGF y otro agente en EnalaprilTM, y seleccionándose dicho estado entre un grupo consistente en síndrome de dificultad respiratoria del adulto o aguda (ARDS) , enfermedades fibróticas del hígado, fibrosis cardíaca postinfarto, enfermedades fibroquísticas tales como fibroesclerosis, cánceres fibróticos tales como cánceres de mama, útero, páncreas o colon, fibroides, fibroma, fibroadenomas, fibrosarcomas, 15 estado de postinfarto de miocardio, hipertrofia ventricular izquierda, cirrosis hepática, enfermedad venooclusiva, estado después de una lesión de la médula espinal, estado después de cirugía retiniana y de glaucoma, postangioplastia, restenosis, fibrosis renal intersticial, fallo de injerto arteriovenoso, cicatrizaciones excesivas tales como cicatrices queloides, y cicatrices resultantes de lesiones, quemaduras o cirugía. 20

2. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 1, caracterizada porque dicho anticuerpo anti-TGF es 1D11.

3. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 1, caracterizada porque dicho anticuerpo anti-TGF es un anticuerpo monoclonal.

4. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 3, caracterizada porque dicho 25 anticuerpo monoclonal es un anticuerpo de IgG.

5. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 1, caracterizada porque dicho anticuerpo anti-TGF se selecciona entre el grupo consistente en un anticuerpo no humano, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo humano, un anticuerpo de cadena sencilla y un fragmento de anticuerpo. 30

6. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 5, caracterizada porque dicho anticuerpo anti-TGF es un anticuerpo quimérico.

7. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 5, caracterizada porque dicho anticuerpo anti-TGF es un anticuerpo humanizado.

8. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 5, caracterizada porque dicho 35 anticuerpo anti-TGF es un anticuerpo humano.

9. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 5, caracterizada porque dicho anticuerpo anti-TGF es un anticuerpo de cadena sencilla.

10. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 5, caracterizada porque dicho anticuerpo anti-TGF es un fragmento de anticuerpo. 40

11. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 1, caracterizada porque otro agente de la combinación es un agente que potencia la degradación de la matriz extracelular acumulada en exceso.

12. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 1, caracterizada porque dicho tejido u órgano se selecciona entre el grupo consistente en riñones, pulmones, hígado, corazón, arterias, piel 45 y sistema nervioso central.

13. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 1, caracterizada porque dicho estado asociado con la acumulación excesiva de matriz extracelular es la cicatrización.

14. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 1, caracterizada porque los agentes se utilizan simultáneamente.

15. Combinación de agentes para su uso según la reivindicación 1, caracterizada porque los agentes se utilizan secuencialmente. 5