Inmunización activa para generar anticuerpos para A-beta soluble.

Un medicamento que comprende un fragmento de Aß que consiste en Aß16-23 (KLVFFAED) en la forma de aminoácido humano natural;

en el que el fragmento está ligado a una molécula de vehículo para formar un conjugado que ayuda a provocar una respuesta inmunitaria contra el fragmento;

para efectuar el tratamiento o profilaxis de una enfermedad asociada a depósitos de amiloide de Aß en el cerebro de un paciente, por lo que los anticuerpos inducidos se unen específicamente a Aß soluble en el paciente, inhibiendo así la formación de depósitos de amiloide de Aß en el cerebro de Aß soluble y efectuando así el tratamiento o profilaxis de la enfermedad.

CAMPO TÉCNICO

La invención se encuentra en los campos técnicos de la inmunología y la medicina.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La enfermedad de Alzheimer (EA) es una enfermedad progresiva que produce demencia senil. Véase generalmente Selkoe, TINS 16, 403-409 (1993) ; Hardy et al., documento WO 92/13069; Selkoe, J. Neuropathol. Exp. Neurol. 53, 438-447 (1994) ; Duff et al., Nature 373, 476-477 (1995) ; Games et al., Nature 373, 523 (1995) . Hablando ampliamente, la enfermedad se clasifica en dos categorías: aparición tardía, que se produce en la vejez (65 + años) y aparición temprana, que se desarrolla mucho antes del periodo senil, es decir, entre los 35 y los 60 años. En ambos tipos de enfermedad, la patología es la misma, pero las anomalías tienden a ser más graves y extendidas en casos que empiezan en la edad más temprana. La enfermedad se caracteriza por al menos dos tipos de lesiones en el cerebro, placas seniles y ovillos neurofibrilares. Las placas seniles son áreas de neuropilo desorganizado de hasta 150 µm a través de los depósitos de amiloide extracelulares en el centro visibles por análisis microscópico de secciones de tejido cerebral. Los ovillos neurofibrilares son depósitos intracelulares de microtúbulos asociados a proteína tau que consisten en dos filamentos enrollados el uno sobre el otro en pares.

El principal constituyente de las placas es un péptido llamado Aβ o péptido amiloide β. El péptido Aβ es un fragmento interno de 39-43 aminoácidos de una proteína precursora llamada proteína precursora amiloide (APP) . Se han correlacionado varias mutaciones dentro de la proteína APP con la presencia de enfermedad de Alzheimer. Véase, por ejemplo, Goate et al., Nature 349, 704) (1991) (valina717 a isoleucina) ; Chartier Harlan et al. Nature 353, 844 (1991) ) (valina717 a glicina) ; Murrell et al., Science 254, 97 (1991) (valina717 a fenilalanina) ; Mullan et al., Nature Genet. 1, 345 (1992) (una mutación doble que cambia lisina595-metionina596 a asparagina595-leucina596) . Se cree que tales mutaciones producen enfermedad de Alzheimer por el elevado o alterado procesamiento de APP a Aβ, particularmente el procesamiento de APP que da elevadas cantidades de la forma larga de Aβ (es decir, Aβ1-42 y Aβ1-43) . Se cree que las mutaciones en otros genes, tales como los genes presenilina, PS1 y PS2, afectan indirectamente el procesamiento de APP para generar elevadas cantidades de Aβ de la forma larga (véase Hardy, TINS 20, 154 (1997) ) . Estas observaciones indican que Aβ, y particularmente su forma larga, es un elemento causante en la enfermedad de Alzheimer.

La inmunización de modelos de ratón transgénico de EA con inmunógenos derivados de péptido β-amiloide (Aβ) produce una respuesta de anticuerpos que inhibe la formación y/o placas de amiloide claras en cerebros de los ratones (Schenk et al., (1999) Nature 400, 173-177; Janus et al., (2000) Nature 408, 979-982, Morgan et al. (2000) Nature 408, 982-985, Sigurdsson et al., (2001) Am. J. Pathol. 159, 439-447, 1-4) ) . Los anticuerpos para Aβ pasivamente administrados han logrado efectos similares. Se ha propuesto la fagocitosis dependiente de Fc mediada por anticuerpos por células de la microglía y/o macrófagos como un mecanismo para la eliminación de placas de amiloide existentes (Bard et al., (2000) Nat. Med., 6, 916-919) ) . Esta propuesta se basa en el resultado de que ciertos anticuerpos periféricamente administrados contra Aβ entran en el SNC de ratones transgénicos, decoran placas de amiloide e inducen la eliminación de placas. Por tanto, se ha informado de una fuerte correlación entre anticuerpos que fueron eficaces in vivo y en un ensayo ex vivo usando secciones de PDAPP o cerebro con enfermedad de Alzheimer (EA) para medir la actividad de eliminación de placas. Los receptores de Fc sobre las células de la microglía efectuaron la respuesta de eliminación en el ensayo ex vivo. Sin embargo, también se ha informado de que la eficacia de anticuerpos también puede obtenerse in vivo por mecanismos que son independientes de interacciones de Fc (Bacskai et al., (2002) J. Neurosci., 22, 7873-7878) . Se informó que un anticuerpo dirigido contra la porción media de Aβ, que no puede reconocer las placas de amiloide, se unía a Aβ soluble y reducía la deposición de placas (DeMattos et al., (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98, 8850-8855) . También se ha informado del tratamiento a corto plazo con este anticuerpo para mejorar el rendimiento en una tarea de reconocimiento de objetos sin afectar la carga de amiloide (Dodart et al., (2002) Nat. Neurosci., 5, 452-457) . Pallitto et al. (Biochemistr y . 1999 Mar 23;38 (12) :3570-8) describe una estrategia modular para generar compuestos que inhiben la toxicidad de Aβ, basada en enlazar un elemento de reconocimiento para Aβ a un elemento de alteración diseñado para interferir con la agregación de Aβ. El documento WO-A-02/096937 describe una vacuna 'no de auto' antígeno basada en estereoquímica para la prevención y/o tratamiento de Alzheimer y otras enfermedades relacionadas con amiloide. El documento US 2002/0162129 A1 describe el uso de una protofibrilla mutante o compuesto (s) con protofibrilla que forman actividad para la inmunización activa con el fin de tratar o prevenir EA. El documento US 2002/0094335 A1 desvela una vacuna “no de auto” antígeno basada en estereoquímica para la prevención y/o tratamiento de Alzheimer y otras enfermedades relacionadas con amiloide. Lemere, C.A. et al., (Neurobiology of aging. 2002 Nov/Dec 23 (6) 991-1000) describe un protocolo de vacuna con A-beta en modelos de ratón con EA con la esperanza de que mayores títulos de anticuerpos para A-beta puedan ser más eficaces en reducir niveles de A-beta cerebrales.

La presente solicitud está relacionada con el documento WO 00/72880 presentado el 26 de mayo de 2000,

documento WO 99/27944 presentado el 30 de noviembre de 1998, solicitud de EE.UU. nº 60/067.740 presentada el 2 de diciembre de 1997, solicitud de EE.UU. nº 60/080.970 presentada el 7 de abril de 1998 y solicitud de EE.UU. nº 09/201.430 presentada el 30 de noviembre de 1998.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

Fig. 1A-C. Anticuerpos producidos por inmunización con fragmentos del extremo N de Aβ se unen a placas amiloides. Fig. 1A. Se usaron péptidos que engloban diversos dominios de Aβ1-42 (SEC ID Nº: 1) (sintetizados contiguos al epítope de linfocitos T derivado de ovoalbúmina) para inmunizar ratones PDAPP. Se usó un reversémero, Aβ5-1 (SEC ID Nº: 2) , como control negativo. Fig. 1B. Títulos de ELISA contra Aβ1-42 agregada fueron significativamente mayores a lo largo de la duración del estudio en los grupos Aβ5-11 y Aβ15-24 que en el grupo Aβ1-5 (1:14, 457, p<0, 01 y 1:12, 257, p<0, 05 frente a 1:3, 647, respectivamente; ANOVA seguido de prueba de Tukey a posteriori) . Fig. 1C. Se expusieron secciones de criostato sin fijar de cerebro de ratón PDAPP sin tratar a los sueros de ratones inmunizados con Aβ5-1, Aβ3-9, Aβ5-11 o Aβ15-24 (títulos normalizados a 1:1000 para tinción) . Los anticuerpos para Aβ15-24 no se unieron a placas amiloides. La barra de escala representa 500 µm.

Figs. 2A-C. La captura de Aβ1-42 soluble por anticuerpos no está asociada a carga de amiloide reducida o patología neurítica. Fig. 2A. Se examinaron sueros de ratones inmunizados con fragmentos de Aβ para su capacidad para capturar Aβ1-42 soluble radiomarcado en un radioinmunoensayo. Sueros de todos los animales inmunizados con Aβ15-24 fueron capaces de capturar Aβ1-42 soluble (una muestra de suero tuvo un título superior a 1:1, 350 y no se determinó un título preciso) , en comparación con el 27 % de aquellos en el grupo Aβ1-5 y el 3 % del grupo Aβ3-9. Figs. 2B-C. Se evaluaron la carga de amiloide (Fig. 2B) y la patología neurítica (Fig. 2C) con análisis de imágenes por un microscopista cegado. Los valores se expresan como un porcentaje de la media del grupo de Aβ5-1 (péptido reversémero de control negativo) . El grupo de Aβ5-11 se evaluó en un turno separado de los otros grupos, pero conjuntamente con el mismo grupo de control negativo que una referencia interna (segundo conjunto de reversémeros de Aβ5-1, a la izquierda) . La carga de amiloide fue significativamente reducida en los grupos de Aβ15, Aβ3-9 y Aβ5-11 (p<0, 001) . Las barras representan valores medios y la línea horizontal discontinua indica el nivel de control. La carga neurítica fue significativamente reducida en los grupos de Aβ3-9 y Aβ5-11 (p<0, 05) . Ningún punto final estuvo significativamente alterado por... [Seguir leyendo]

1. Un medicamento que comprende un fragmento de Aβ que consiste en Aβ16-23 (KLVFFAED) en la forma de aminoácido humano natural; en el que el fragmento está ligado a una molécula de vehículo para formar un conjugado que ayuda a provocar una respuesta inmunitaria contra el fragmento; para efectuar el tratamiento o profilaxis de una enfermedad asociada a depósitos de amiloide de Aβ en el cerebro de un paciente, por lo que los anticuerpos inducidos se unen específicamente a Aβ soluble en el paciente, inhibiendo así la formación de depósitos de amiloide de Aβ en el cerebro de Aβ soluble y efectuando así el tratamiento o profilaxis de la enfermedad.

2. El medicamento de la reivindicación 1, en el que tratar o efectuar la profilaxis de la enfermedad comprende administrar en combinación con dicho medicamento un fragmento de Aβ que induce anticuerpos que se unen específicamente a Aβ en uno o más epítopes dentro de Aβ1-11.

3. El medicamento de la reivindicación 2, en el que el fragmento de Aβ que induce anticuerpos que se unen específicamente a Aβ en un epítope dentro de Aβ1-11 es adecuado para administración antes del fragmento de Aβ16-23.

4. El medicamento de la reivindicación 1, el que tratar o efectuar la profilaxis de la enfermedad comprende administrar en combinación con dicho medicamento un anticuerpo que se une específicamente a Aβ en un epítope con Aβ1-11.

5. El medicamento de la reivindicación 4, en el que el anticuerpo que se une específicamente a Aβ en un epítope dentro de Aβ1-11 es adecuado para administración antes del fragmento de Aβ16-23.

6. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la enfermedad se caracteriza por deterioro cognitivo.

7. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la enfermedad está seleccionada del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, síndrome de Down y deterioro cognitivo leve.

8. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que tratar o efectuar la profilaxis de la enfermedad comprende monitorizar los anticuerpos inducidos en el paciente.

9. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el paciente es asintomático.

10. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el paciente es sintomático y el medicamento inhibe el deterioro de los síntomas del paciente.

11. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el paciente tiene menos de 50 años de edad.

12. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el paciente tiene un factor de riesgo heredado que indica susceptibilidad a enfermedad de Alzheimer.

13. El medicamento de la reivindicación 9, en el que el paciente no desarrolla síntomas detectables durante cinco años después de realizarse por primera vez el tratamiento o profilaxis.

14. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones 1-11 y 13, en el que el paciente no tiene factores de riesgo conocidos para enfermedad de Alzheimer.

15. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que es adecuado para administración a una dosificación de al menos 50 microgramos del fragmento durante una pluralidad de días.

16. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que es adecuado para administración en múltiples dosificaciones durante un periodo de al menos tres meses.

17. El medicamento de la reivindicación 16, en el que las dosificaciones son al menos 50 microgramos.

18. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además un adyuvante que aumenta el nivel de anticuerpos inducidos por el fragmento.

19. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que es adecuado para administración intraperitoneal, oral, intranasal, subcutánea, intramuscular, tópica o intravenosa.

20. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que tratar o efectuar la profilaxis de la

enfermedad comprende además monitorizar el paciente para nivel de anticuerpos inducidos en la sangre del paciente.

21. El medicamento de la reivindicación 1, en el que el vehículo es un polipéptido heterólogo. 5

22. El medicamento de la reivindicación 1, en el que múltiples copias del fragmento están ligadas a una molécula de vehículo para formar un conjugado.

23. El medicamento de la reivindicación 1, en el que múltiples copias del fragmento están ligadas a múltiples copias 10 de la molécula de vehículo, que están ligadas entre sí.

24. El medicamento de la reivindicación 21, en el que el polipéptido heterólogo comprende QYIKANSKFIGITEL (SEC ID Nº: 8) .

25. El medicamento de la reivindicación 21, en el que el polipéptido heterólogo comprende la secuencia de aminoácidos AKXVAAWTLKAAA (SEC ID Nº: 11) .

26. El medicamento de la reivindicación 21, en el que el polipéptido induce una respuesta de linfocitos T contra el

polipéptido heterólogo y así una respuesta de linfocitos B contra el fragmento. 20

27. El medicamento de la reivindicación 1, en el que tratar o efectuar la profilaxis comprende además administrar un adyuvante que potencia el título y/o afinidad de unión de los anticuerpos inducidos con respecto al título y/o afinidad de unión de los anticuerpos inducidos por el fragmento solo.

28. El medicamento de la reivindicación 27, que comprende el adyuvante y el fragmento.

29. El medicamento de la reivindicación 27, en el que el adyuvante es adecuado para administración antes del fragmento.

30. El medicamento de la reivindicación 27, en el que el adyuvante es adecuado para administración después del fragmento.

31. El medicamento de la reivindicación 27, en el que el adyuvante está seleccionado del grupo que consiste en alumbre, MPL, QS-21 y adyuvante incompleto de Freund. 35

32. El medicamento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende el fragmento a una dosificación superior a 10 microgramos.